Name: 活小鼠肠道移植物对宿主病的诱导及微内窥镜评价 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: 了解利用微内窥镜技术在小鼠活体中评估结肠炎症的方法，用于研究异基因造血干细胞移植后的急性移植物抗宿主病。该技术可重复监测肠道病变，无需牺牲动物即可获取病理学级别的诊断信息。

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本研究由德国研究基金会（Deutsche Forschungsgemeinschaft，DFG）资助，项目包括合作研究中心（CRC）221（CRC/TR221-DFG，#324392634；项目B03）（资助对象：K.H.）和合作研究中心1181（CRC-DFG，项目B05）（资助对象：K.H.）。

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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本方案描述了诱导及通过微型内窥镜评估肠道移植物抗宿主病（GvHD）过程中结肠表型的方法学。其更广泛的意义在于使科研人员能够对肠道GvHD在整个疾病进程中（即从结肠症状出现、病情进展直至疾病活动达峰期）进行纵向且无创的观察研究。
然而，在将这些技术应用于相应科学领域之前，实验人员需要了解所展示方法中存在的一些关键步骤和重要局限性。首先，尽管我们已成功在次要组织相容性抗原不匹配模型系统中使用微型内窥镜评估与肠道移植物抗宿主病（GvHD）相关的结肠病变11，但本文提供的方案目前仅适用于MHC I类完全不匹配的急性GvHD模型。虽然MHC I类完全不匹配的GvHD模型较为常见且被广泛使用5，但已明确的是，GvHD表现的特征高度依赖于所使用的近交系小鼠亚系，因为这会显著影响例如对辐射的敏感性。此外，实验小鼠的来源，例如其肠道微生物群组成的差异以及所移植同种异体T细胞的数量，可能对肠道GvHD发生发展的动力学过程产生关键影响12。因此，一个关键步骤是必...

起源于造血干细胞室的血液系统恶性肿瘤，以及失控的、快速进展的严重免疫介导性疾病，通常是进行异基因造血干细胞移植（allo-HCT）的指征1,2。然而，尽管供体淋巴细胞可产生预后有利的移植物抗肿瘤效应，但也常诱导并促进对allo-HCT受者体内健康组织成分的非预期免疫攻击，这一过程称为移植物抗宿主病3。胃肠道表现，即所谓的肠道GvHD，是急性GvHD中最令人担忧的并发症，其严重形式通常与高死亡率相关1,2,4。
总体而言，小鼠异基因造血细胞移植（allo-HCT）模型已成为识别和研究移植物抗宿主病（GvHD）发病机制中免疫介导作用的宝贵工具5然而，对活体小鼠中新型治疗干预措施的有益效果进行时间依赖性的动力学评估，通常依赖于临床移植物抗宿主病（GvHD）评分的测定。6。尽管这些评分适用于反映整体疾病负担（例如，系统性移植物抗宿主病），但临床评分在可靠地反映器官特异性表现方面缺乏足够的敏感性（例如, 因此，基于这些评分系统得出的结论（例如关于某种治疗干预对肠道的保护作用）通常不够充分。
尽管通过开发新型全身成像技术，并结合使用生物发光或荧光遗传小鼠模型取得了重大进展7,8，目前尚缺乏能够直接且特异性地评估活体小鼠肠道移植物抗宿主病（GvHD）表现的方法。因此，下一节所述内镜评估肠道GvHD表型方案的设计 rationale 在于克服这一障碍。此外，该方法的另一动机在于减少实验小鼠的使用数量，因为迄今为止，对细胞、形态及分子特征（例如, 通过组织病理学或分子生物学方法检测肠道移植物抗宿主病（GvHD）表现，最终需要牺牲实验小鼠。
本机构此前已报道过在同基因型结肠炎模型中进行结肠病变微型内窥镜评估的方法学9。在本研究中，我们优化并调整了结肠镜评分矩阵，以适用于在主要组织相容性复合体（MHC）I类完全错配条件下，经异基因造血细胞移植（HCT）和供体淋巴细胞输注后，活体小鼠因异体免疫应答引发肠道移植物抗宿主病（GvHD）的评估。我们确定了四个能够反映肠道GvHD相关结肠病变的参数，并建立了一套可对每个参数进行精细分级的系统，从而形成一种新型评分方法，能够直观地反映特定时间点单只小鼠肠道GvHD的严重程度。组织病理学分析证实，当内镜评分超过某一阈值时，可可靠地预测中至重度的组织炎症。因此，微型内窥镜评估似乎可作为金标准组织病理学的有效替代方法，后者通常需要牺牲实验小鼠。重要的是，该方案几乎可在疾病进程中的任意时间点应用，并可进行多次重复使用10,11。此外，与依赖生物发光的检测方法不同，本方法无需进行繁复且耗时的遗传修饰小鼠杂交等操作，因此几乎可应用于任何感兴趣的小鼠品系。
综上所述，鉴于异基因造血干细胞移植（allo-HCT）患者在发生严重肠道移植物抗宿主病（GvHD）时具有不良的临床预后，迫切需要加快科学研究进展，并更深入地了解其免疫病理过程中潜在的分子机制。同样重要的是，伦理考量要求必须以最少数量的实验小鼠获取最大化的科学知识。因此，通过在实验流程中引入对实验小鼠模型进行结肠的连续微型内镜评估，以实时监测和分级评价肠道GvHD，既可推动对肠道GvHD研究的科学进展，又能满足动物伦理要求。本研究所描述并验证的实验方案即实现了这一目标。

<table><tbody><tr><td>BIOTBEAM 2000 γ射线辐照仪</td><td>Gamma-Service Meical GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>D8662-6x500ML</td><td></td></tr><tr><td>Semken 镊子（长度：13 cm；带齿、弯曲尖端）</td><td>Fine Science Tools</td><td>11009-13</td><td></td></tr><tr><td>硬化精细剪刀（长度：8.5 cm；直头尖端；刃口长度：24 mm）</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 培养基</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>R8758-500ML&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>皮下注射针头（26 G）</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>4657683</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 注射器</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>9166017V</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 离心管</td><td>Sarstedt Ag &amp; Co.KG</td><td>62,547,254</td><td></td></tr><tr><td>带 40 &amp;micro;m 网筛的细胞滤器</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>氯化铵（NH&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;Cl）</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>11209</td><td>ACK 裂解缓冲液的组分</td></tr><tr><td>乙二胺四乙酸二钠盐二水合物（Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;EDTA）</td><td>Carl Roth GmbH &amp; Co.KG</td><td>8043.2</td><td>ACK 裂解缓冲液的组分</td></tr><tr><td>碳酸氢钾（KHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;）</td><td>Merck KGaA</td><td>1,048,540,500</td><td>ACK 裂解缓冲液的组分</td></tr><tr><td>CD90.2 MicroBeads，小鼠</td><td>Miltenyi Biotec GmbH</td><td>130-049-101</td><td>磁性细胞分选法用于分离去T细胞的骨髓细胞</td></tr><tr><td>小鼠 Pan T 细胞分离试剂盒 II</td><td>Miltenyi Biotec GmbH</td><td>130-095-130</td><td>磁性细胞分选法用于分离脾脏T细胞</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 700 抗小鼠 CD45.2 抗体（克隆：104；批号：B252126；RRID: AB_493731）</td><td>Biolegend</td><td>109822</td><td></td></tr><tr><td>Pacific Blue 抗小鼠 CD3 抗体（克隆：17A2；批号：B227246；RRID: AB_493645）</td><td>Biolegend</td><td>100214</td><td></td></tr><tr><td>FITC 抗小鼠 CD4 抗体（克隆：GK1.5；批号：B225057；RRID: AB_312691）</td><td>Biolegend</td><td>100406</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 抗小鼠 CD45.1 抗体（克隆：A20；批号：B217246；RRID: AB_1134168）</td><td>Biolegend</td><td>110730</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 抗小鼠 CD8a 抗体（克隆：53-6.7；批号：B247008；RRID: AB_312753）</td><td>Biolegend</td><td>100714</td><td></td></tr><tr><td>过滤牛血清&amp;nbsp;</td><td>Pan Biotec</td><td>P40-47500</td><td>FACS 缓冲液的组分&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>96 孔聚苯乙烯 V 型底板</td><td>Greiner Bio-One</td><td>651201</td><td></td></tr><tr><td>聚苯乙烯圆底管（5 mL）</td><td>Falcon</td><td>352052</td><td></td></tr><tr><td>BD LSRFortessa II 流式细胞仪</td><td>BD Bioscience Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>带无菌内腔的胰岛素注射器（30 G）</td><td>BD</td><td>324826</td><td></td></tr><tr><td>Oxy Vet Oxymat 3</td><td>Eickemeyer</td><td></td><td>用于麻醉的氧气浓缩器&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>NarkoVet&amp;nbsp;</td><td>Eickemeyer</td><td>213062</td><td></td></tr><tr><td>有机玻璃腔室&amp;nbsp;</td><td>Eickemeyer</td><td>214620</td><td></td></tr><tr><td>直视前视望远镜</td><td>KARL STORZ SE &amp; Co KG</td><td>64301 AA</td><td>结肠镜检查实验装置的组成部分</td></tr><tr><td>保护与检查套管</td><td>KARL STORZ SE &amp; Co KG</td><td>61029 C</td><td>结肠镜检查实验装置的组成部分</td></tr><tr><td>带工作通道的检查套管</td><td>KARL STORZ SE &amp; Co KG</td><td>61029 D</td><td>结肠镜检查实验装置的组成部分</td></tr><tr><td>活检钳</td><td>KARL STORZ SE &amp; Co KG</td><td>61071 ZJ&amp;nbsp;</td><td>结肠镜检查实验装置的组成部分</td></tr><tr><td>&amp;nbsp;175 瓦 SCB 氙灯光源</td><td>KARL STORZ SE &amp; Co KG</td><td>20132120</td><td>结肠镜检查实验装置的组成部分</td></tr><tr><td>光纤导光缆</td><td>KARL STORZ SE &amp; Co KG</td><td>495 NL</td><td>结肠镜检查实验装置的组成部分</td></tr><tr><td>Image 1 S3 摄像头探头</td><td>KARL STORZ SE &amp; Co KG</td><td>22220030</td><td>结肠镜检查实验装置的组成部分</td></tr><tr><td>Image 1 SCB 摄像头控制单元</td><td>KARL STORZ SE &amp; Co KG</td><td>22200020</td><td>结肠镜检查实验装置的组成部分</td></tr><tr><td>LCD 显示器</td><td>Olympus</td><td>OEV181H</td><td>结肠镜检查实验装置的组成部分</td></tr><tr><td>Forane / 异氟烷</td><td>AbbVie Inc.&amp;nbsp;</td><td>B506</td><td></td></tr><tr><td>37% 甲醛溶液</td><td>Carl Roth GmbH &amp; Co.KG</td><td>7398.1</td><td></td></tr><tr><td>5.0 mL 分液头&amp;nbsp;</td><td>Eppendorf AG</td><td>30089456</td><td></td></tr></tbody></table>

活体小鼠肠道移植物抗宿主病的诱导及其微型内镜评估

Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice

急性移植物抗宿主病（GvHD）是既往接受异基因造血干细胞移植（allo-HCT）的患者所面临的最严重并发症，常与不良临床预后相关。例如，皮肤GvHD表现通常对已建立的免疫抑制治疗有反应，因此一般不会导致致命后果；而肠道GvHD的存在及其严重程度，尤其是中下段肠道的受累，显著影响急性GvHD患者的预后和总体生存率。目前的治疗选择主要局限于经典的免疫抑制剂，其疾病缓解效果有限。因此，迫切需要深入了解肠道GvHD发生前后及过程中组织驻留免疫级联反应、肠道微生物群的变化以及间质细胞的应答，以阐明其发病机制并开发创新性治疗策略。GvHD的小鼠模型常被用于识别和功能评估可能驱动肠道GvHD的分子和通路。然而，由于目前用于评估和分级急性GvHD的既定评分系统通常包含多种参数，更多反映的是&#160;全身性GvHD表现，因此尚缺乏能够特异性地随时间动态监测和评估肠道炎症的方法。对肠道GvHD的详细评估以往仅限于使用安乐死小鼠的研究，从而基本排除了在活体小鼠（即体内）特定实验条件下（例如，抗体介导的促炎细胞因子阻断）对结肠部位进行纵向（即动力学）分析的可能性。本文所述的对allo-HCT处理小鼠远端结肠进行微型内镜原位评估方法，能够实现：a）对肠道炎症不同方面的宏观细致评估；b）在观察期间的多个时间点采集组织样本以进行后续分析。总体而言，微型内镜技术为临床前无创监测和评估肠道GvHD提供了重要进展。

本方案描述了对远端结肠移植物抗宿主病（GvHD）相关病变进行微型内镜评估的方法，已在先前建立并验证的严重急性GvHD小鼠模型中应用。在本研究中，我们采用主要组织相容性复合体I类（MHC class I）完全错配的模型系统，即对BALB/c小鼠实施致死性照射后，移植T细胞耗竭的同种异体骨髓，并给予可诱导GvHD的同种反应性C57BL/6 CD3+ T细胞。+ T 淋巴细胞。用于诱导移植物抗宿主病（GvHD）的T细胞耗竭骨髓细胞和脾脏T细胞通过磁分离法进行纯化。这些细胞群的纯度通过流式细胞术测定，纯化过程的代表性结果如下所示。 图1，表明从总骨髓细胞中充分耗竭了T细胞，并稳定富集了脾脏来源的CD3+ T细胞在转移至先前接受照射的小鼠之前的临床病程显示 图2 在异基因造血细胞移植（allo-HCT）后，存在（WT，黑色）与不存在（noT，灰色）同种反应性供体T淋巴细胞的情况下，均可稳定、可重复地诱导出临床系统性移植物...

本文介绍了一种异基因造血干细胞移植方案，并可在原位对患有肠道移植物抗宿主病的活体小鼠远端结肠进行重复的微型内窥镜评估，以检测结肠炎症的存在、特征及其严重程度。

急性移植物抗宿主病（GvHD）是既往接受异基因造血干细胞……的患者所面临的最严重并发症

在活体小鼠中通过微型内窥镜对结肠进行评估，可为研究同种异体造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病（GvHD）相关的肠道表现提供关键的实验支持。这种对急性GvHD相关结肠炎的无创性评估可作为金标准组织病理学检查的有效替代方法，从而避免为获取组织样本而反复处死实验动物。本实验操作将由本实验室的博士后研究员Vera Buchele进行演示。在受体 BALB/c 小鼠接受全身照射后一天，将一只 CD-45.1 活体 5B6 SJL 供体小鼠置于清洁的操作套管上，呈俯卧位。使用 Simkin 止血钳的 13 厘米弯曲带齿尖端提起一侧跟腱处的毛发。用 8.5 厘米直头精细剪刀在止血钳与一侧足跟之间剪开皮肤，并将切口向头侧延长，以便去除后肢的皮肤和毛发。当后肢皮肤去除后，分别切断每个髋关节、踝关节和膝关节。将每条后肢的股部和小腿置于一个盛有PVS并放在冰上的92 mm培养皿中，小心地尽可能去除每根骨骼上的肌肉组织，并将清理干净的股骨和胫骨转移至含有湿冰的50 mL离心管中，管内预先加入无菌RPMI 1640培养基。为分离骨髓，每次取一根骨骼转移至另一个盛有新鲜RPMI 1640培养基的92 mm培养皿中，使用解剖刀切除骨骼两端。随后，使用配备26号针头的1 mL注射器，每次用1 mL新鲜培养基冲洗骨骼，将冲洗液收集至含有5 mL培养基的50 mL收集管中。当所有骨骼均完成冲洗后，轻轻吹打松散的骨髓组织数次，以获得单细胞悬液，随后通过40微米孔径的细胞滤筛过滤至新的50 mL收集管中。离心沉淀细胞，并将细胞重悬于5 mL氯化铵-钾裂解缓冲液中，在室温下孵育3分钟。孵育结束后，加入10 mL PBS终止反应，并再次离心细胞。将沉淀重悬于2 mL新鲜PVS中用于计数，并保留六乘十的六次方个细胞等分试样，用于后续流式细胞术分析。接下来，按照生产商说明书，使用 commercially available 细胞纯化试剂盒通过磁性去除骨髓单细胞悬液中CD90.2阳性的T细胞，并保留一乘十的六次方个细胞的T细胞耗竭流出液等分试样，用于分离前后细胞纯度和组成的后续流式细胞术分析。然后，使用配备30号针头的1 mL注射器，将五乘十的五次方个T细胞耗竭的骨髓细胞溶于100 µL PVS中，静脉注射至每只经辐照受体动物的眼后静脉窦内。第二天，将从供体动物获取的脾脏置于50 mL收集管中的40微米细胞筛网上，用注射器活塞将脾组织压过筛网进入管中。用PVS冲洗细胞筛网和活塞以收集全部脾细胞，并通过离心形成细胞沉淀。在完成红细胞裂解后，重新悬浮白细胞进行计数，并保留6 × 10⁶个细胞用于后续流式细胞术分析。为了从总脾细胞中分离出全部 CD3 阳性 T 细胞，应根据制造商说明书使用 commercially available cell purification kit（商品化细胞纯化试剂盒），并从阳性细胞组分中预留一份 1 × 10⁶ 个 CD3 阳性 T 细胞的等分试样，用于分离前后通过流式细胞术分析细胞纯度与组成。随后，将 7 × 10⁵ 个同种反应性 CD3 阳性 T 细胞溶于 100 µL PVS 中，通过眼球后静脉注射至每只受体小鼠体内，以诱导移植物抗宿主病（GvHD）。为通过微型内窥镜检查远端直肠结肠区域的 GvHD 相关病变，用一只手在受体动物尾根上方提起尾巴，另一只手则小心地将内窥镜经肛门插入直肠。当气流使结直肠管腔膨胀时，缓慢而谨慎地将内窥镜向远口方向推进。为避免结肠损伤，应通过实时视频屏幕辅助，将内窥镜保持在管腔的中央区域。开始录制视频流并进行炎症评分，根据所示参数对与移植物抗宿主病（GvHD）相关的结肠炎症进行评估和评分。当找到评分区域后，轻柔地前后移动内镜以评估各项参数。为评估透光性和粪便性状，应将内镜置于距离结肠壁较远的位置。为评估病灶的颗粒感和血管分布情况，应将内镜靠近结肠壁，并使用内镜前端对结肠壁施加适当且控制良好的张力。完成评分过程后，停止录像。与对照组相比，同种异体造血干细胞移植所诱导的系统性移植物抗宿主病（GvHD）表型具有可重复且显著的表现，受体动物的临床GvHD评分呈进行性升高。这些可通过微型内窥镜评估的标准是根据既往报道的在同基因型结肠炎模型中、针对异体反应驱动的结肠炎评分参数专门改进而来，用于精确描述、评分和分级远端结肠中与肠道GvHD疾病相关的病变。事实上，基于微型内窥镜的分级系统能够轻松区分接受供体淋巴细胞且表现出严重肠道炎症的小鼠与基本无移植物抗宿主病（GvHD）的对照小鼠。通过组织病理学研究对基于微型内窥镜的分级系统进行验证，结果证实，受GvHD相关炎症严重影响的小鼠结肠表现出类似的显著组织病理学炎症征象。相比之下，对照小鼠的结肠组织显示无或至多仅有轻度的组织病理学炎症征象，这与微型内窥镜下几乎无法检测到结肠炎征象的结果一致。此外，微型内镜评估的结肠炎活动度与组织病理学评估的结肠炎活动度及系统性移植物抗宿主病（GvHD）评分之间的相关性研究表明，微型内镜评估得分小于或等于3分可可靠地预测组织病理学分级中不存在中至重度与GvHD相关的结肠炎症。同时，内镜下评估的肠道GvHD严重程度与系统性GvHD疾病活动度之间存在相关性。为了标准化微型内镜对结肠炎症评估的结果，并确保不同小鼠及随时间推移的不同实验之间具有可比性，应选择特定的解剖部位进行评分。除了评估结肠炎症外，微型内窥镜系统内置的工作通道还可获取在内窥镜引导下进行的组织活检样本，适用于多种后续分析，例如常规组织病理学检查。由于微型内窥镜具有非侵入性的特点，可在几乎任何时间对同一动物反复评估急性移植物抗宿主病（GvHD）相关的结肠炎，从而为肠道GvHD的研究提供引人入胜的深入见解。

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科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

活小鼠肠道移植物对宿主病的诱导及微内窥镜评价

小鼠小肠移植模型已被公认为研究免疫排斥机制和筛选新型免疫抑制药物的重要工具。然而，由于该模型所涉及的技术极为复杂，其应用受到限制。现在我们介绍一种改良的技术。...

小鼠小肠移植

小鼠骨髓移植是一种广泛使用的技术，用于研究调控人类移植物抗宿主病的免疫学机制。体内监测T细胞迁移模式的能力，使得能够对移植物抗宿主病过程中T细胞反应的发生与发展进行详细分析。...

移植物抗宿主病的诱导 在体 内 使用MHC匹配的小鼠模型监测T细胞

小肠移植已成为不可逆性肠功能衰竭患者的可接受治疗选择。我们在大鼠中建立的原位小肠移植实验模型，是研究肠移植过程中复杂的免疫和炎症反应的可靠工具。...

大鼠原位小肠移植

本视频展示了如何利用同种异体造血干细胞和可诱导移植物抗宿主病（GvHD）的脾源性异反应性T淋巴细胞，在经致死剂量照射的受体小鼠中诱导肠道移植物抗宿主病。该实验方案有助于建立严重的急性肠道GvHD模型，以深入理解该疾病的发病机制，并开发创新的治疗策略。...

通过同种异体骨髓与脾细胞移植在小鼠模型中诱导移植物抗宿主病

小型动物成像技术可实现活体内的连续诊断检查和治疗干预。in...

小鼠内窥镜检查技术 在体 内 癌症发生的多模态成像及肠道伤口愈合与炎症评估

我们介绍了利用刚性内窥镜对小鼠结肠疾病治疗疗效进行纵向监测的方法。该方案可直接用于活体小鼠中单个肿瘤治疗反应的表征，也可用于监测潜在的疾病复发。...

利用活体小鼠连续内窥镜成像无创评估新型肠道疾病治疗药物的疗效

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通过将效应性CD4+CD45RBhigh T细胞过继转移至免疫缺陷小鼠诱导小鼠肠道炎症

本文介绍了一种在异种移植物抗宿主病（xenoGVHD）模型中诱导并评估疾病发生的方法。xenoGVHD...

异基因小鼠模型中移植物抗宿主病的诱导与评分及使用数字PCR定量小鼠组织中的人源T细胞

本文介绍了一种利用化疗诱导黏膜炎模型来建立小肠损伤及代偿性高增殖的重要终点指标和增殖标志物的实验方案。我们通过细胞周期特异性标记物检测增殖细胞，并采用小肠重量、隐窝深度和绒毛高度作为评估终点指标。...

评估化疗诱导黏膜炎小鼠模型中小肠损伤与适应的重要终点指标和增殖标志物

炎症性肠病（IBD）的发病机制涉及遗传易感性、黏膜免疫和肠道微生态环境之间的相互作用。在本研究中，我们将粪菌移植应用于IL-10缺陷小鼠，并探讨其对结肠炎症和心脏功能的影响。...

白细胞介素10缺陷小鼠模型中粪菌移植的治疗效果评估

本方案描述了一种基于大鼠的带有回肠造口的肠道移植模型，用于评估药物干预对移植物排斥反应的时间进程影响。...

带外置回肠造口的大鼠小肠移植排斥反应模型用于纵向预后评估

了解利用微内窥镜技术在小鼠活体中评估结肠炎症的方法，用于研究异基因造血干细胞移植后的急性移植物抗宿主病。该技术可重复监测肠道病变，无需牺牲动物即可获取病理学级别的诊断信息。

活体小鼠肠道移植物抗宿主病的诱导及其微型内镜评估

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