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DOI: 10.3791/58898-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
在这里, 我们提出了一个基于水凝胶的细胞疗法的体内验证方案, 并以胰岛移植为例进行了说明。h-Omental 矩阵 isle filling (h份) 植入术允许细胞-水凝胶混合物在血管附近的腹部之间植入, 以最大限度地植入适当的代谢环境。
该方法有助于回答细胞治疗领域的关键问题,例如,通过霍明手术技术,小岛移植能否得到优化?该技术的主要优点是简单、快速、可调,生物材料验证速度也非常快。针头放置的视觉演示对于确保在花管内进行适当的移植注射至关重要,因为放置不当的针头可能会导致小岛泄漏。
为了诱发糖尿病,每克链霉素每克注射75毫克,每6周大,150至190克刘易斯接受大鼠,并在注射后头四天通过每日血糖测量检查糖尿病状况。当大鼠的血糖超过每升2克时,每天注射6单位长效胰岛素,以防止糖尿病并发症和体重减轻。将大鼠纳入实验组,当两个测量尾静脉血糖水平连续两天大于每升四至五克,C-肽水平低于200皮莫拉尔。
对于颗粒植入,确认麻醉糖尿病接受者动物对手足口病缺乏反应,并用碘粉清洁颈部。剃除植入区域,用额外的波维酮碘清洁裸露的皮肤。三分钟后,在一至五波维酮碘溶液中消毒一个1/2胰岛素颗粒,并使用16测表的小车刺穿裸露的颈部皮肤。
然后,使用导轨和样式插入颗粒,然后用单个点缝合开口。用更多的波维酮碘清洁缝线,让大鼠在笼子里恢复,并监测食物,以避免低血糖。为了测量颗粒的效率,在植入后一个月内,每周测量血糖降低,包括实验组大鼠,在胰岛素颗粒植入后一个月内,尾静脉血 C-肽水平的测量维持在200皮摩尔以下。
对于内牙基质岛填充,计算从健康供体大鼠中分离出的小岛数量,并在单个1.5毫升管中为每公斤接受者准备一个7,660小岛当量。用500微升CMRL介质洗净,无需胎儿牛血清,并在150微升中重新排压每管新鲜准备的藻酸水凝胶载体中的胰岛颗粒,在将管子放在冰上之前小心地混合。接下来,加载配备创伤 21 量针的一毫升注射器,带 150 微升的空藻酸盐,无死体积,然后是 150 微升的藻酸盐加小岛。
将注射器放在冰上,并准备第一个接受动物的脖子,正如刚刚演示的。使用手术刀在旧伤口上切开,并使用钳子去除颗粒。用一个或两个单针点关闭缝合,将大鼠放在上针位置。
消毒的内皮内亚尔区域和剃须。使用手术刀在胸骨下创建一个 1/2 厘米的腹腔切除术。将湿消毒纱布放在切口周围,并识别位于胃旁边的奥体脂肪垫。
使用钳子轻轻地将脂肪垫从腹腔中拉出,将其铺在纱布上。用两毫升预热、37摄氏度的无菌盐水水合物,用一只手握住带有小弯曲钳的组织,用小小的注射器的针头穿透奥体层之间的奥体边缘。插入针头时,在开始注射之前,请确保针头被一层薄薄的软体组织包围。
完全插入针头,然后慢慢开始注射胰岛制剂,同时收回针头,使注射的胰岛在整个组织中扩散。在注射过程中,将针头缩回组织边缘,在针头几乎出手时停止注射。然后,等待五秒钟,然后再在下一个位置开始新的注射。
并注入另外三到四个等分,如所证明的。当所有水凝胶都已分配后,请小心地取走针头,以避免注射小岛的损失,检查小岛是否在注射结束时没有聚集在注射器中。当所有小岛都送来时,在小心地将牙托组织返回到腹腔之前,先给牙管和腹腔切除术的壁进行水合。
将两毫升预热无菌盐水注入腹腔,以补充大鼠水分。然后用连续的线缝合关闭肌肉壁,用单缝合点缝合皮肤层。经过一到两个月的代谢随检,打开每个接受者的手术切口,如证明,并使用钳子小心地将奥梅塔铺到切口旁边的盐水浸泡纱布上。
从区域到胰腺尾部,使用剪刀切除软体组织,并注射两毫升预加热的盐水,然后关闭每个动物,如证明。在嵌入石蜡之前,将检索到的奥梅塔修复为4%的甲醛。然后,在微子上获取四微米厚的组织部分,并应用赤氧树脂和 eosin 染色用于移植的形态评估。
使用hOMING方法移植的Dextran珠子在血管附近经常被观察到,并且被很好地植入脂肪组织。在这个具有代表性的异源性研究中,血糖首先通过植入一个1/2胰岛素颗粒进行控制,然后通过植入胰岛进行控制,如每升约2克的血糖和接受动物中大于500皮莫拉的C-肽。此外,对外植的奥门塔进行组织学分析后发现,高度再血管化的小岛很可能是由于它们靠近血管。
该技术开发后,为细胞治疗领域的研究人员在临床前模型中探索生物工程细胞微环境铺平了道路。
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