同时进行机电刺激增强细胞心肌成功能的潜能

这是一种在细胞上应用机电刺激的方法。它有多种应用来研究它对细胞种群的影响，对体内分娩的预训练，以及细胞成熟。其优点是，电气和机械刺激可以单独或同时与同一设备一起应用，同时保持无菌病毒完好无损。

这种技术是我们治疗的间接方法。细胞疗法被认为是机电刺激细胞可能是一个有趣的细胞群体，以治疗内向心肌。该方法一般属于心血管领域，但也可以应用于神经系统。

这是一个简单的技术，需要耐心。最困难的部分是与小块工作，并保持无菌贯穿始终。操作的细节很少，很难解释，所以视觉演示真的很有帮助。

首先将 12 个清洁的 PDMS 结构转移到无菌的 10 厘米板。为保证完全灭菌，请将板暴露在紫外线下五分钟。然后将每个构造转移到一个单独的 35 毫米细胞培养板，或 6 孔板，用于立即细胞播种。

要开始细胞播种，首先用5毫升1xPBS清洗心脏 ATPC 的汇合 T75 瓶。要分离细胞，请添加一毫升0.05%的三辛-EDTA。并在37摄氏度下孵育5分钟。

然后，添加五毫升的完整介质，以灭活 trypsin-EDTA。在15毫升管中收集所有分离的细胞。用五毫升PBS清洗细胞玻璃两次，收集任何剩余的细胞，并将其加入15毫升的管中。

在230克的离心机，在22摄氏度下5分钟。取出上清液，将细胞重新悬浮在两毫升的完整介质中，然后用血细胞计计数。种子200微升的心脏ATC进入每个板与PDMS构造，以获得约80%的种子表面覆盖细胞第二天。

在37摄氏度和5%CO2下孵育。轻轻添加 2 毫升预热完整介质每个板。在37摄氏度和5%CO2的构造下孵育细胞。

在开始此过程之前，为机电刺激分配 12 个构造中 6 个，为非刺激控制分配 6 个结构。使用70%乙醇清洁刺激装置。将刺激装置、无菌电极和钳子放在流柜内。

为了轻松操作电极和构造，从每个细胞培养板中去除 90% 的介质。将 PDMS 结构放在向磁铁的右侧位置，以确保固定磁体和移动磁体之间的磁吸引。前两个步骤是最关键的，在这些步骤中，您操作细胞的种子 PDMS 构造和电极，同时保持整个过程的无菌性。

然后，将铂线连接到电极连接器。在 PDMS 结构中，将电极的 PTFE 部分定向到其指定空间中。在每个构造中添加 2.5 毫升新鲜、预热的完整介质。

放置所有 PDMS 结构并电气连接到平台后，将平台放回 37 摄氏度和 5%CO2 培养箱。然后连接电气和机械源。要配置刺激程序，请通过控制机械刺激的应用的用户界面指定电气和机械刺激方案。

要设置同步性，请打开电气刺激器，然后等待主菜单显示在显示屏上。然后选择选项 2，编辑序列，加上 Enter。要编辑序列菜单，请使用模式选项卡选择当前"通过单击加"，然后按 Enter"表示" 选择1000"带加号/减号，按 Enter"和"对于触发模式"选项卡，通过软件选择外部，按"对于振幅选项卡，选择1"带加号/减号，然后按 Enter"，然后，在主菜单中，选择选项4，然后生成序列，然后按 Enter"在控制应用面板的机械刺激部分，首先在加号期间文本控件中写入1000"。

然后在 ON 时间文本控制中写入 500"，以设置机械脉冲持续时间。最后，在游游文本控件中编写2000"以提供10%的构造伸长。每周更换两次单元格介质，首先移除旧介质，然后在 PDMS 支持的两侧添加温暖、新鲜的介质。

在第七天，在实验结束时，收集手稿中描述的样本。机电刺激心脏 ATDC 增强心肌生成潜力。实时PCR显示早期和晚期心脏基因表达增加，特别是心脏转录因子GATA-4、结构标记β-霉素重链和钙相关基因康内辛43。

对作用素纤维的法罗酮染色表明，大多数细胞根据垂直模式对齐。康内辛43分布主要在细胞质和血浆膜，有助于通过间隙结细胞内通信。MEF2和GATA-4转录因子位于心脏 ATDPC 的核。

但是GATA-4在皮下非DPC中未检测到。细胞质标记SERCA2和沙康α-行为素，没有显示一个成熟的沙康科动物组织典型的心肌细胞。在控制和刺激细胞群中未观察到殴打。

在该协议的开头，一个健康的细胞单层和在整个过程中保持不育性是至关重要的。样品采集后，可以进行标准基因组蛋白表达技术。这种技术有助于更好地了解细胞电和/或机械刺激的影响。

直到最近，不可能使用相同的设备进行两种刺激，这使得结果更难比较。