用原生动物给鱼作动物感染的载体

该方法有助于回答微生物学领域有关胃肠道微生物的殖民化和感染动力学的关键问题。这种技术的主要优点是，它更代表人类食源性感染，并且与口服食物相比，它减少了鱼类的潜在组织损伤。此方法的视觉演示至关重要，因为由于参数具有高度的动性，清洗步骤可能难以执行。

从活生长培养物中，加入一毫升的副物质培养物和一毫升的电子大肠杆菌MG1655培养物，加入含有8毫升E3培养基的10毫升组织培养瓶。轻旋转烧瓶，然后将其在22摄氏度下将一毫升共培养的烧瓶传成一个新的10毫升组织培养瓶，含有9毫升的新鲜E3培养基，每两周每毫升电子大肠杆菌MG1655的108个菌落形成单位。要确定副苯二甲酸菌内的细菌半寿命，计算从光学密度600准米细菌共培养的寄生虫的数量，并添加50微升的上清液，每小时1.5毫升微离心管，每小时6小时。

在PBS中加入950微升1%非离子表面活性剂。然后用一分钟的涡旋来敲打每个样品中的副酶，然后在无菌PBS中稀释每个样品的十分之一。和板100微升每次稀释到选择性板16小时的孵化在37摄氏度。

第二天，只计算单独和独特的个体菌落，以确定板上的细菌菌落数量。并识别一个稀释的板，产生30-300个菌落形成单位。在感染前一天，通过离心每次治疗，从600培养的光学密度中收集一卷细菌。

将颗粒重新悬浮在每管一毫升的E3介质中。接下来，在每个细菌悬浮液中加入一个适当细菌污渍的微升。并保护管照片漂白与箔。

在室温下用端端旋转孵育细菌样本前，使用15分钟。在孵育结束时，用大体积的E3介质清洗细菌两次，以去除多余的染料。将颗粒重新悬浮在每管一毫升的新鲜 E3 介质中。

然后，在两个新鲜副物的烧瓶中加入一毫升的细菌悬浮液，在室温下孵育两小时。将每个条件的两个烧瓶的内容拉入单独的 50 毫升锥形管中。通过离心对样品进行颗粒化。

使用稳定移液器，用10毫升新鲜E3介质更换每个管中约10毫升的E3上经剂，通过离心进行3次洗涤。上次洗涤后，取出约十毫升的 E3 中继剂，注意不要破坏颗粒，并在 E3 介质的剩余 10 毫升中重新悬浮颗粒。将每个悬浮液的 500 微升转移到单独的 1.5 毫升微升管中，通过离心对准物进行颗粒化。

丢弃400微升的超钠，并添加20微升36.5%甲醛溶液到剩余的100微升的副液，用温和的移液。在室温下五分钟后，通过移液器测量每个管中的实际总体积，然后计算每毫升的死参数数。对于斑马鱼的食源性感染，将副食性样品稀释至每毫升E3中浓度的五分之一。

并添加3毫升的每个参数培养到一个井的6井板每个条件。接下来，用最小的液体将十条麻醉斑马鱼转移到每一个井中。在白天的孵化器中，在30摄氏度的温度下孵化联合培养两个小时。

要确定捕食率，请用立体显微镜查看喂养的斑马鱼，同时获取猎物捕获的视频片段。猎物捕获的特点是斑马鱼对猎物的撞击。每次打击估计是一个猎物捕获事件。

在孵育结束时，在5种不同的井中清洗斑马鱼，其中含有3毫升的新鲜E3介质，每井每升三分型100毫克。将每只斑马鱼嵌入3毫升1%的低熔红糖，嵌入黑色井6井板中。当所有鱼都嵌入后，将盘子放在立体显微镜下，并使用剪切的凝胶加载尖端，以确保头部位于左侧，尾部在每个观察场的右侧。

等待5分钟，让阿加罗斯设置，然后用新鲜的E3介质与三分素叠加嵌入的鱼，并在荧光显微镜上对斑马鱼进行成像，以评估细菌感染的进展。对于致病性电子大肠杆菌，最初的细菌密度为每维分量790细菌，细菌在每次分膜切原子的真空中降解，半寿命约2.3小时。猎物伴随着一个特征的显著行为，猎物率的确定基于假设每次打击导致1副物的内化。

消化后，游出的细菌从前肠移动到中肠和后肠，在猎物开始大约1至2小时后被检测到。例如，S-inica主要在肠道粘膜中局部，一些上皮入侵导致嗜中性粒细胞渗入上皮。不要忘记，使用某些类型的细菌可能极其危险，并且在执行此过程时应始终采取预防措施，例如佩戴适当的个人防护设备。