提高墨西哥龙舌兰对幼虫后表型和全体免疫组织化学的分析

在这里，我们演示如何繁殖墨西哥Tetra Astyanax墨西哥鱼，饲养幼虫，并在幼虫后鱼类上执行全安装免疫功能化学，以比较河流和洞穴适应鱼类的表型。我们以相同的密度饲养鱼，吃营养丰富的轮盘鱼。该技术可确保一致的增长，并在成本、生物安全和水质方面提供优势。

首先，在五加仑油箱的底部放置一个塑料网。然后用鱼准备水填满水箱。将热水器贴在水箱的侧面。

在水箱中加入一条雌性鱼和两条雄性阿斯蒂安娜克斯墨西哥鱼。将热水器的温度设置为 24 摄氏度。24小时后，将温度升高1摄氏度。

每天用手电筒将手电筒照射到水箱底部，检查鸡蛋。在育种箱中识别出卵子后，取出成年鱼和塑料网。使用烧杯将水深减至 10 厘米。

要估计受精时间，请使用转移移液器将几个卵子放入培养皿中，并使用立体显微镜观察它们以确定其阶段。取出不透明的鸡蛋或粪便。然后给水箱加满鱼水，在水中加入七滴甲基蓝。

在此之后，向水箱中添加加热器和水族馆气泡器。将加热器设置为 24 摄氏度，并调整气流调节器以产生温和的气泡流。然后盖住水箱以保持水温。

在8升鱼准备水中加入20克盐，搅拌至溶解。然后将一升准备好的水添加到每个苗圃容器中。接下来使用转移移液器将 20 个孵化幼虫移动到每个育苗容器。

搅拌大水箱中的水，以确保所有幼虫都已被清除。要准备鱼食，在一升收获的轮盘中加入三毫升藻类混合物。受精后五天，每个苗圃容器中加入三毫升的鱼食。

轮盘机应以密集的组在容器的一角可见，除非在中心附近可见。每天检查容器有其有轮盘，如果浓度耗尽，请添加更多食物。清除任何死幼虫。

首先，要清除胃肠道的食物内容，倒苗圃容器与鱼的所需年龄通过尼龙网过滤器。将过滤器放入装有清洁鱼就绪水的容器中，并扣留食物 24 小时。对鱼进行安乐死后，根据机构指南，使用转移移液器将鱼转移到锥形管。

用固定性替换安乐死解决方案。并在4摄氏度下过夜地用摇摆孵育管子。在此之后，删除固定剂并将其替换为 PBST。

用摇动将管子再孵育15分钟。再重复一次洗涤过程。接下来，使用转移移液器将鱼移动到带螺钉顶盖的四毫升玻璃瓶中。

从小瓶中去除 PBST，加入三毫升的阻解溶液。在室温下用摇动孵育小瓶一小时。在此之后，使用转移移液器去除阻塞溶液，代之以在阻断溶液中稀释的原抗体。

在室温下孵育小瓶过夜，搅拌。接下来，用PBST洗鱼三次，如前所述。用在阻断溶液中稀释的二次抗体取代PBST。

并在室温下孵育小瓶，搅拌。最后，用PBST洗鱼三次，15分钟。利用此协议，在静态繁殖池中养殖了表层鱼蒂娜亚鱼、莫利诺鱼和帕琼洞穴鱼。

表面和帕琼产卵，受精胚胎，总是产生孵化幼虫。而莫利诺和蒂娜雅在一段时间里没有成功。一般来说，表鱼每只产卵的幼虫数量最大，其次是帕琼、蒂娜雅和莫利诺。

全安装免疫控制技术成功地用于标记神经元和胰腺细胞在受精后12.5天的阶段。当你提高幼虫并记录幸存的鱼的数量时，清除任何死鱼是重要的。如果许多鱼死亡，这可能是由于细菌或真菌污染。

使用前应使用 70% 乙醇对罐进行消毒。我们描述的免疫处理技术已成功用于材料表中列出的抗体。免疫后，鱼可以全安装或分段，以查看任何感兴趣的组织。

结合，育种、孵化和免疫污染过程为以实验室之间可比的方式评估基因活性NC2提供了一种强有力的方法。