脑缺血再灌注的双血管闭塞小鼠模型

这种脑缺血-再灌注双血管遮挡小鼠模型可以研究中风的病理生理学。该模型将诱导一个稳定的脑梗塞体积渗入免疫细胞在缺血大脑和脑缺血-再灌注后的行为缺陷。在此模型中，在皮质区域引起梗塞，死亡率较低。

由于结扎 MCAO 再灌注模型需要颅骨切除术来暴露开骨 MCA 的大小，因此可以轻松确认其大小，并且检查在手术过程中，开胃 MCAO 中的血液流动是否中断是简单的。在手术前，为老鼠提供免费水和食物。使用手术工具进行手术，并使用70%乙醇对手术台和设备进行消毒。

麻醉8至12周大的小鼠后，确保它没有任何踏板反射时，测试使用坚定的脚趾捏。使用兽医软膏，以防止眼睛干燥，而鼠标麻醉。要监测血压，首先去除头发，然后使用非侵入性血压系统和生理监测系统来监测直肠温度和动脉血气。

用预防性抗生素注射小鼠皮下。接下来，将鼠标放在加热垫上的上点位置。要暴露皮肤，请使用电动剪子剃光腹颈区域和右眼和右耳之间的区域的毛皮。

用脱毛霜清除动物体内的毛皮，用70%乙醇对手术部位进行消毒。然后用虹膜剪刀在颈部切开一厘米长的中线切口。使用虹膜钳，仔细解剖普通胡萝卜动脉，摆脱迷走神经，而不会造成身体伤害，并使用5-0丝缝合线隔离动脉。

接下来，使用虹膜剪刀在右眼和右耳之间的中点头皮上做一个0.3厘米的切口。使用微型剪刀，切割时态肌肉，以暴露酶和鳞状骨。将鼠标放在立体解剖显微镜下，并使用微钻直接在右侧深中脑动脉上形成一个两毫升孔。

使用 10-0 缝合线将右侧端心 MCA 的树干进行缝合，并使用非创伤动脉瘤夹遮挡右侧 CCA。在缺血所需的持续时间后，取出缝合线和动脉瘤夹，以恢复血液流向 MCA 和 CCA。使用缝合夹密封头部的皮肤切口，用手术胶密封宫颈皮肤切口。

注射丁丙诺啡皮下疼痛缓解。将动物的体温保持在36.5°C或零下0.5摄氏度，在完全从麻醉中恢复之前，不要无人看管或将体温归还给其他动物。最后，将鼠标放入自动通道笼中，以便它完全恢复后可以自由获取水和食物。

使用虹膜剪刀在麻醉和斩首的老鼠头部皮肤上切口，以暴露头骨。然后用手术剪刀切割前骨的前身，然后用虹膜剪刀，沿着缝合线切割头骨。用骨骨，推开正面和面骨，露出大脑。

取出大脑，并将其放在鼠标大脑矩阵中。使用剃须刀刀片获得两毫升冠状切片，并将它们放在 50 毫升管中，管子中填充 5 毫升 2%TTC。当使用小鼠大脑矩阵获得日冕切片时，切割大小在不同的大脑中应相同。

切割大小会影响大脑切片的大小，这也会影响梗塞大小的计算。在37摄氏度下用2%TTC和1X PBS将脑片染色10分钟，然后用10%的甲醛冲洗两次。在室温下将大脑切片固定为10%的细胞，24小时。

干燥纸巾上的大脑切片以吸收多余的甲醛后，将它们排列在干净的塑料幻灯片上，将其从 rostral 定向到骨面体，然后用另一个干净的塑料幻灯片盖住它们。使用扫描仪扫描幻灯片。翻转幻灯片，然后扫描反面。

使用 ImageJ 软件计算每个部分的梗塞面积，首先打开图像文件并设置图像比例。然后使用徒手选择来选择梗塞区域，并使用兴趣 ROI 管理器区域测量感兴趣区域。最后，对每个部分的梗塞区域进行求和，将结果乘以节厚以估计总梗塞量，然后完成手稿中描述的统计分析。

在此 MCAO 再灌注过程中，缺血持续时间的增加在右 MCA 区域的大脑皮层产生了不同程度的缺血引起的梗塞体积和神经元损失。此外，缺血在MCAO再灌注后48小时减少了动物的运动活动。脑缺血再灌注后，大量外周免疫细胞渗入缺血脑的异血半球。

此外，当将双容器遮挡模型与 MCAO 模型进行比较时，其梗塞体积没有显著差异。在头骨上制造孔时，必须小心使用微型钻头。使用不适当的操作，容易引起 MCA 的出血。

MCA 不应损坏，在结扎程序之前和之后必须避免出血。可激光多普勒检查 MCA 遮挡和再灌注状态。该方法可以确认MCA血流的情况。