Name: 在小鼠中纳入可存活的肝脏活检程序评估非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 的解决方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 14 s
Description: 了解小鼠可存活肝脏活检技术用于非酒精性脂肪性肝炎研究。该方法模拟临床试验设计，可准确评估治疗前后肝脏病理变化，为NASH药物疗效评价提供可靠的临床前研究模型。

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作者们衷心感谢Sally Lee和Holly Koelkebeck在组织处理和免疫组织化学技术方面的专业支持。作者们还感谢Donna Goldsteen以及实验室动物资源部门的工作人员（MedImmune，美国马里兰州盖瑟斯堡）在技术操作、动物饲养与护理方面提供的帮助。

所有体内实验均按照美迪麦克斯有限责任公司机构动物照护与使用委员会（IACUC）的政策以及《实验动物照护与使用指南》第8版（2011年）的规定进行。雄性C57BL6J小鼠被喂饲高脂、高果糖、高胆固醇的AMLN饮食。在开始药物干预前3周，即饮食处理26周后，进行肝脏活检。
1. 获取并准备手术材料
<ol>
	<li>将无菌器械（小尖头剪刀、钝头镊子、棉签、纱布片、7 mm 皮肤缝合钉/伤口夹及缝合钉施加器）进行高压灭菌。</li>
	<li>准备用于关闭腹壁的无菌缝线（5-0 带涂层可吸收缝线，配 PC-1 针为宜）、可吸收明胶压缩海绵（用于止血）、无菌手术巾和手套、含碘消毒液及 70% 乙醇棉片/擦拭巾、布托啡诺（每只小鼠剂量为 0.05–0.1 mg/kg；每只小鼠至少准备 3 次剂量）以及手术用眼膏/润滑剂。</li>
	<li>向麻醉蒸发器中加入异氟烷，以备麻醉使用。</li>
	<li>开启玻璃珠灭菌器，用于动物间器械的快速灭菌。</li>
	<li>开启加热板或加热垫，用于动物术后恢复时保温。</li>
	<li>穿戴适当的个人防护装备（PPE）（即口罩、防护服、头帽、手套）。</li>
</ol>
2. 术前准备
<ol>
	<li>将小鼠放入诱导室，使用2-3%异氟烷气流进行诱导麻醉。</li>
	<li>观察小鼠直至其对脚趾夹捏无反应，以确认麻醉深度合适。</li>
	<li>使用眼药膏防止麻醉引起角膜干燥。</li>
	<li>皮下注射布托啡诺（0.05–0.1 mg/kg）。</li>
	<li>使用动物专用剪刀剃除剑突后方手术区域的毛发。</li>
	<li>剃毛后将小鼠转移至加热板（37 °C）上，体位呈背侧向下、腹部朝上。将小鼠鼻部插入麻醉鼻罩，持续输送2-3%异氟烷。</li>
	<li>用聚维酮碘和70%乙醇棉签交替擦拭手术区域，重复三次。</li>
	<li>打开并准备好无菌外科器械。</li>
	<li>脱去手套，更换为无菌外科手套。</li>
</ol>
3. 手术步骤
<ol>
	<li>在剑突下方紧邻处且略偏小鼠左侧的位置，沿纵轴方向用剪刀在腹部皮肤上做一个1-2 cm的切口。</li>
	<li>使用镊子和剪刀将皮肤与腹壁钝性分离。</li>
	<li>暴露腹壁并观察其下方的肝脏。</li>
	<li>使用无菌手术刀片在腹壁上做一个1-2厘米的切口，以暴露肝脏左外叶（LLL）。 
	注意： 在整个研究过程中保持一致。其他常见的关注肺叶包括右中叶（RML）和左中叶（LML）。</li>
	<li>通过切口将左外侧叶外置。</li>
	<li>方法一：用拇指和食指轻轻按摩腹部，以暴露部分左下叶（LLL）。</li>
	<li>选项2：将无菌棉签置于低液位限值（LLL）下方，轻轻拉出部分液体使其暴露。</li>
	<li>将一块无菌生理盐水浸湿的纱布置于肝脏下方，为肝脏提供一个无菌且湿润的接触面。</li>
	<li>用无菌剪刀进行两次切割，从左肝叶（LLL）上切下一小块楔形肝组织。 
	注意： 被切除肝脏的近似大小为 30-50 mg&#60;小鼠肝脏的5%。</li>
	<li>用镊子将一块大小与肝组织楔形切片相似的明胶海绵插入肝脏的切口部位。</li>
	<li>用镊子固定海绵，使其与肝脏保持接触，直至海绵黏附于肝脏表面并实现止血。</li>
	<li>将肝活检组织放入相应的试管中（例如冷冻管、固定液管等）。</li>
	<li>轻轻地将肝脏放回腹腔，注意不要触碰海绵。</li>
	<li>用5-0涂层可吸收缝线缝合腹壁，起始和结束均打完整的方结。</li>
	<li>使用7毫米伤口夹（或钉皮钉）闭合皮肤。</li>
	<li>检查伤口夹，确保切口完全闭合。</li>
	<li>将小鼠从鼻罩中取出，放入置于加热表面上的清洁笼具中。</li>
	<li>在小鼠之间将器械放入玻璃珠灭菌器中灭菌10–20秒。进行&#160;确保在将器械放入玻璃珠灭菌器之前，使用无菌生理盐水去除所有有机物。</li>
</ol>
4. 术后护理
<ol>
	<li>监测小鼠直至其恢复意识并能自行恢复正常体位。</li>
	<li>记录术后观察结果，并每天检查小鼠是否有伤口裂开情况。</li>
	<li>术后6-8小时和24小时，分别皮下注射第二剂和第三剂布托啡诺（0.05-0.1 mg/kg）。</li>
	<li>术后7-10天拆除伤口夹。</li>
</ol>

<ol><li>Brunt, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonalcoholic+fatty+liver+disease+%28NAFLD%29+activity+score+and+the+histopathologic+diagnosis+in+NAFLD%3A+distinct+clinicopathologic+meanings%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) activity score and the histopathologic diagnosis in NAFLD: distinct clinicopathologic meanings.</a> Hepatology. 53 (3), 810-820 (2011).</li>
<li>Brunt, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Pathology of nonalcoholic fatty liver disease.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 7 (4), 195-203 (2010).</li>
<li>Kleiner, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+validation+of+a+histological+scoring+system+for+nonalcoholic+fatty+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease.</a> Hepatology. 41 (6), 1313-1321 (2005).</li>
<li>Diehl, A. M., Cause Day, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis%2C+and+Treatment+of+Nonalcoholic+Steatohepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis, and Treatment of Nonalcoholic Steatohepatitis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).</li>
<li>Golabi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+complications+and+challenges+in+nonalcoholic+steatohepatitis+screening+and+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Reviews+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Current complications and challenges in nonalcoholic steatohepatitis screening and diagnosis.</a> Expert Reviews of Gastroenterology and Hepatology. 10 (1), 63-71 (2016).</li>
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<li>Trevaskis, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucagon-like+peptide-1+receptor+agonism+improves+metabolic%2C+biochemical%2C+and+histopathological+indices+of+nonalcoholic+steatohepatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glucagon-like peptide-1 receptor agonism improves metabolic, biochemical, and histopathological indices of nonalcoholic steatohepatitis in mice.</a> American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 302 (8), G762-G772 (2012).</li>
<li>Tolbol, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+and+hepatic+effects+of+liraglutide%2C+obeticholic+acid+and+elafibranor+in+diet-induced+obese+mouse+models+of+biopsy-confirmed+nonalcoholic+steatohepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Metabolic and hepatic effects of liraglutide, obeticholic acid and elafibranor in diet-induced obese mouse models of biopsy-confirmed nonalcoholic steatohepatitis.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (2), 179-194 (2018).</li>
<li>Clapper, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet-induced+mouse+model+of+fatty+liver+disease+and+nonalcoholic+steatohepatitis+reflecting+clinical+disease+progression+and+methods+of+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Diet-induced mouse model of fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis reflecting clinical disease progression and methods of assessment.</a> American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 305 (7), G483-G495 (2013).</li>
<li>Armstrong, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liraglutide+safety+and+efficacy+in+patients+with+non-alcoholic+steatohepatitis+%28LEAN%29%3A+a+multicentre%2C+double-blind%2C+randomised%2C+placebo-controlled+phase+2+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Liraglutide safety and efficacy in patients with non-alcoholic steatohepatitis (LEAN): a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled phase 2 study.</a> Lancet. 387 (10019), 679-690 (2016).</li>
</ol>

S.O. 和 C.R. 目前是 MedImmune/AstraZeneca 的员工和/或股东。JLT 在进行这些实验时曾是 MedImmune/AstraZeneca 的员工和股东。

本文详细描述了Clapper等&#160;al.10首次报道的小鼠肝脏活检操作步骤，并在一个类似于既往研究6,9的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠模型中展示了其应用价值。肝脏活检是一种有效的工具，可用于评估治疗前后NASH表型，其方式与临床治疗试验中的做法相似。该方法允许对同一受试个体进行直接比较，即同一只小鼠可用于两个时间点的检测。我们还展示了其转化应用潜力。在一项针对经活检证实为NASH患者的临床试验中，利拉鲁肽治疗使NAS评分改善的应答率达到39%（即改善的患者比例），而在本研究中，我们观察到NAS评分改善的应答率为66%。此外，在临床试验中，26%的患者纤维化评分得到改善，9%恶化，而安慰剂组分别为14%和36%11。在本研究中，我们观察到利拉鲁肽治疗组有17%的纤维化改善率。这些比较突显了基线肝脏活检的重要性，并证实了至少对于此类治疗药物而言，具有潜在的转化研究意义。
在活检过程中，获取足够大尺寸的肝组织样本对于正确分析其组织学特征至关重要，但同时应避免取材过大而影响肝脏功能。本手术观察到零死亡率，动物在术后1天内即完全恢复，并恢复正常进食行为。因此，活检与干预研究开始之间的时间间隔并不受限于动物恢复情况，而更可能取决于样本处理、分析以及后续随机分组所需的时间。
在干预前采用肝活检作为确认纤维化的方法，有助于降低本研究的变异性，使我们能够排除那些因AMLN NASH诱导饮食未能充分发展出一定程度肝纤维化的小鼠。此外，与仅依赖终末期肝组织样本和NASH评分相比，该方法增强了我们更深入理解潜在NASH改善干预措施效果的能力。在新的无创技术得到进一步探索并被广泛接受之前，肝活检是目前唯一经证实可用于确诊NASH的方法。

非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是一种进行性肝脏疾病，属于非酒精性脂肪肝病（NAFLD）中更为严重的一种，由于其与肥胖和2型糖尿病密切相关，发病率正日益上升。目前尚无获批用于治疗NAFLD/NASH的疗法，也缺乏可用于便捷评估疾病进展的生物标志物。NASH的诊断依赖组织学评估，包括炎症、肝脏脂质过度沉积（脂肪变性）、肝细胞气球样变以及纤维化1,2,3,4。在临床试验中，这些终点指标通过治疗前经肝活检获取的肝脏样本以及经过一定治疗周期后的第二次肝活检进行评估。因此，试验药物的有效性是通过比较经随机分组、且此前已通过活检确认并量化NASH病理特征的受试者在治疗前后肝脏病理变化来判断的。在临床前研究中，啮齿类动物模型也常采用相同的组织学终点来评估潜在NASH治疗药物的效果，但仅限于动物安乐死后获取的终末期组织，因而无法了解治疗前的疗效基线水平，也无法控制不同治疗组间基线疾病状态的差异。
尽管根据血清转氨酶水平升高，推测约有25%的非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）成人患者患有非酒精性脂肪性肝炎（NASH），但除组织学证据外，目前尚无其他确切方法可用于确诊NASH4。已开发出一些无创方法（如影像学技术，包括超声、计算机断层扫描和磁共振成像）用于检测肝脂肪变性，但这些方法无法诊断NASH或确定纤维化分期。瞬时弹性成像作为一种有前景的无创手段，可用于测量肝脏硬度，已被证明在区分纤维化分期方面具有较高准确性。然而，其准确性会随着体重指数（BMI）升高和脂肪组织增多而下降5。这一局限性尤为突出，因为大多数NASH患者存在肥胖。除临床应用价值外，上述所有方法均未用于临床前研究中。
为解决这一问题，Jonathan Roth 博士的研究团队首次在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的 Amylin NASH（AMLN）小鼠模型中实施了肝活检操作6,7,8。他们描述了活检结果与NASH疾病程度之间的预测效度，以及其与代谢性疾病的相关性。本文详细阐述了在AMLN NASH模型中进行肝活检的具体操作步骤，并探讨其在治疗研究中的应用价值，特别是用于评估利拉鲁肽的疗效。

<table><tbody><tr><td>异氟烷</td><td>Henry Schein</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>5-0 缝合线</td><td>Ethicon</td><td>J834G</td><td></td></tr><tr><td>7 mm 伤口夹</td><td>Reflex</td><td>203-1000</td><td></td></tr><tr><td>可吸收明胶海绵（GelFoam）</td><td>辉瑞</td><td>09-0353-01</td><td>压缩型，任意尺寸</td></tr><tr><td>酒精消毒垫</td><td>VWR</td><td>75856-902</td><td></td></tr><tr><td>动物用剪毛器</td><td>Oster</td><td>78005010002</td><td>40 号刀头</td></tr><tr><td>人工泪液</td><td>Henry Schein</td><td>048272</td><td>管装</td></tr><tr><td>丁丙诺啡（Buprenex）</td><td>Reckitt Benckiser&amp;nbsp;</td><td>NDC 12496-0757-5</td><td></td></tr><tr><td>碘伏消毒垫</td><td>Nice Pak Products</td><td>C12400</td><td></td></tr><tr><td>无菌手术巾</td><td>Stoelting</td><td>50981</td><td></td></tr><tr><td>外科手套</td><td>Medline</td><td>54720</td><td></td></tr></tbody></table>

在小鼠中实施可存活肝活检手术以评估非酒精性脂肪性肝炎（nash）的缓解

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

评估非酒精性脂肪性肝炎（NASH）治疗药物的临床试验通常包括研究基线和结束时的肝活检，并评估疾病终点的改善情况，这种改善通常以各治疗组中病情改善、恶化或无变化的小鼠所占百分比来体现。传统的NASH候选药物临床前啮齿类动物研究往往受限于无法获知治疗干预开始时肝脏疾病/NASH的实际程度，而是基于体重、代谢状态或其他易于测量的指标对治疗组进行随机分组。本文介绍一种在饮食诱导的NASH小鼠模型中进行肝活检的技术，用于评估肝脏疾病的基线水平，从而排除无纤维化表现的小鼠，并将具有相似纤维化程度的动物均衡分配至各治疗组。随后可将这些基线水平与干预结束后的终末水平进行比较，以更真实地理解药物在体内的药理作用，从而更准确地模拟临床试验的设计策略。小鼠在无菌条件下接受适当麻醉并完成术前准备。在上腹部做一小切口，暴露肝脏左外叶。外科手术切除一块楔形肝组织，并植入大小相似的可吸收明胶海绵以止血。随后对手术切口进行缝合并使用缝合钉闭合，小鼠通常在1天内恢复正常。整个操作过程每只小鼠耗时5–10分钟。本文通过利用研究前活检，示例性地展示了该操作在评估胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂利拉鲁肽对小鼠NASH疾病终点影响中的应用价值。

本研究中，根据小鼠预实验活检的肝纤维化分级和体重，将其随机分配至各处理组（每组 n = 12）。小鼠每日一次皮下注射给予载体（PBS）或利拉鲁肽（5 nmol/kg），给药体积为 10 mL/kg，持续 42 天。第 42 天时，小鼠在非禁食状态下通过吸入 CO2 处死，取出肝脏并进行组织学处理。
活检及终末期肝组织样本经10%福尔马林固定过夜，随后进行石蜡包埋，并按照标准方案进行苏木精-伊红染色和天狼星红染色9。由病理学家采用盲法根据非酒精性脂肪性肝炎活动度评分（NASH Activity Scoring, NAS）系统对组织切片进行评估1,2。NAS评分反映脂肪变性、小叶内炎症和肝细胞气球样变的程度（每项参数评分为0–3分），具体方法如前所述9。
将肝活检纳入本研究设计，可获得基线（活检前）纤维化评分。共有118只小鼠在喂食NASH饮食26周后接受了肝活检，并对每例活检样本进行了肝纤维化和脂肪变性评分（图1）。在这118只小鼠中，有49只因纤维化程度过低（评分为0）、纤维化程度过高（评分为4，表现为异常病理特征）或出现异常体重减轻或伤口愈合不良而被排除。通过上述排除标准，最终保留69只小鼠用于分配至各研究组，以评估治疗后NASH表型的改善情况（图1）。
小鼠经溶剂或GLP-1R激动剂利拉鲁肽（5 nmol/kg）处理6周。在溶剂处理组中，1只小鼠表现出纤维化加重，4只小鼠表现出NAS评分恶化图2A-B）。利拉鲁肽治疗与纤维化总体改善相关（图 2C），其中治疗组有17%病情改善，83%保持不变。同样，利拉鲁肽治疗改善了总体NAS评分（图 2D），其中66%的受试者NAS评分改善，33%保持不变。
此外，利拉鲁肽治疗改善了炎症，75%的受试者炎症评分降低，25%保持不变（图3B）。对照溶剂治疗则加重了炎症，17%的受试者炎症评分升高，83%保持不变（图3A）。在对照组和利拉鲁肽治疗组中，从基线至研究结束时，脂肪变性评分均未发生变化图3A，B）。还展示了单个小鼠在活检前与活检后炎症和气球样变参数的比较（图3C- F).
<img alt="纤维化和NAFLD评分图表；饮食影响；NASH治疗分析；实验结果。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig1.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="图1"> 
图1：肝脏活检纤维化程度与NAS评分的初筛结果。（A）通过肝脏活检对全部118只小鼠进行纤维化筛查的结果示意图。（B 和 C）分别显示符合入组标准的小鼠分组后的基线纤维化程度与NAS评分。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的高清版本。</a>
<img alt="纤维化和NAS评分分析图表，比较载体药物和利拉鲁肽治疗前后的变化。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig2.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Figure 2"> 
图2：肝活检前和干预后的纤维化程度与NAS评分。 根据基线肝活检至研究结束时肝组织样本的检测结果，对使用载体药物（A, C）或利拉鲁肽治疗（B, D）的小鼠进行纤维化分期（A, B）和NAS评分（C, D）的应答率百分比分析。每组中，从研究前到研究后活检的评分变化以连线表示。每个评分等级上的数据点略有偏移，以便在视觉上区分不同动物，此偏移仅为可视化目的，并不反映实际评分差异。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig2large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="利拉鲁肽与对照剂对脂肪变性、炎症和气球样变评分在治疗前后影响的图表分析" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig3.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="图3"> 
图3：干预前活检与干预后活检的脂肪变性、炎症和气球样变情况。 根据基线肝活检至研究结束时肝组织样本的结果，对对照剂组（A、C、E）或利拉鲁肽治疗组（B、D、F）小鼠的脂肪变性评分（A、B）、炎症（C、D）和气球样变（E、F）进行应答率百分比分析。每组中，从研究前到研究后活检的变化以连线表示。每个评分等级上的数据点略有偏移，以便于动物个体间的视觉区分，此仅为可视化目的，并不代表评分存在实际差异。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig3large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的高清版本。</a>

在临床环境中，肝活检用于评估非酒精性脂肪性肝炎（脂肪变性、炎症、肝细胞气球样变和纤维化）的病变程度。本文介绍了一种可在小鼠中实施的可存活肝活检方法，可用于组织学分析，从而以更贴近临床试验的方式评估治疗药物的效果。

在小鼠中实施可存活肝活检手术以评估非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的缓解

评估非酒精性脂肪性肝炎（NASH）治疗方法的临床试验包括研究基线和研究结束时的肝活检，以及……

这种在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠中可存活的肝活检手术，既能够排除未发生NASH的动物，又可准确测量干预措施的反应。该手术方法 closely 模拟了针对NASH研究的临床试验设计，通过比较治疗前后肝脏的病理变化，能够更准确地评估药物疗效。初次操作时，暴露肝叶可能具有一定挑战性。可先用手指或棉签轻触组织进行练习，以找到最适合您的操作方式。确认小鼠对脚趾夹捏无反应后，在麻醉小鼠的剑突后方约1至2厘米处、略偏左侧的位置，做一纵向腹部皮肤切口。使用镊子和剪刀钝性分离皮肤，直至暴露腹壁，并可在肌肉组织下方观察到肝脏。使用无菌手术刀片在腹壁上做一个一至两厘米的切口，以暴露肝脏左外侧叶，并将无菌棉签置于左外侧叶下方，轻柔地将需暴露的部分经切口拉出。在暴露的肝叶下方放置一块无菌生理盐水浸湿的纱布，使用无菌剪刀从外露的肝脏组织上切除一块30至50毫克的楔形组织。取一块大小与所切除肝组织相近的可吸收明胶压缩海绵，用无菌镊子将海绵插入肝脏的切口部位。用镊子将海绵固定在原位，直至明胶粘附于肝脏表面并实现止血，然后将肝活检组织放入适当的容器中，用于后续分析。轻柔地将肝脏复位至腹腔，注意不要扰动海绵；从打一个完整的方结开始并以方结结束，使用5-0涂覆型可吸收缝线缝合腹壁。随后，用7毫米的伤口夹关闭皮肤，确认夹合完全闭合后，将小鼠放回清洁的笼子中，置于加热表面上，并持续监测直至完全恢复。在此代表性实验中，118只小鼠在摄入高脂肪、果糖和胆固醇的定制饮食29周后接受了活检，以诱导非酒精性脂肪性肝炎（NASH）。随后对每例活检样本的纤维化程度和脂肪变性程度进行评分。根据纤维化程度过低或过高，以及异常体重减轻或伤口愈合不良的情况，将小鼠排除出研究；剩余小鼠则接受溶剂对照或胰高血糖素样肽-1受体激动剂利拉鲁肽治疗，持续六周。在溶剂处理组中，一只小鼠表现出纤维化程度增加，四只小鼠表现出NASH活动评分升高。利拉鲁肽治疗与整体纤维化改善相关，治疗组中有17%的小鼠纤维化改善，83%保持不变。类似地，利拉鲁肽治疗改善了整体NASH评分，其中66%的小鼠NASH活动评分改善，33%保持不变。此外，利拉鲁肽治疗改善了炎症，治疗后75%的动物炎症评分降低，而对照剂处理组的动物炎症则有所加重。激动剂治疗对脂肪变性无影响，两组在干预前后均保持不变。注意不要过度损伤切除的肝组织，以确保能够满足您的分析需求。该方法可用于模拟临床试验设计，通过比较新型治疗药物对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）肝脏治疗前后的效应。

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在小鼠中纳入可存活的肝脏活检程序评估非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 的解决方法

此处优化了生成方法 体内 和 体外 描述了肝脂肪变性模型的建立方法，以及对脂肪变性表型和相关生理参数的分析。...

优化分析 体内 和 体外 肝脂肪变性

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核糖体亲和纯化技术（TRAP）能够快速高效地分离特定细胞类型的翻译中mRNA。在此，我们展示了一种方法，该方法结合了在肝细胞再生小鼠模型中进行的水动力尾静脉注射与TRAP技术，以检测再生肝细胞的基因表达谱。...

小鼠肝脏中细胞类型特异性基因表达谱分析

本方案描述了一种增强型超声技术的使用方法，用于无创性地观察和量化非酒精性脂肪性肝病啮齿类动物模型中肝组织的变化。...

超声与剪切波弹性成像在非酒精性脂肪性肝病/非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型中的应用

非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型中肝脏细胞外基质的三维成像

本方案描述了一种通过门静脉灌注对完整小鼠肝脏进行切片以用于代谢研究的简便方法。...

Ex Vivo 小鼠门静脉肝脏灌注

富含脂质的肝细胞在肝脏再生过程中具有内在作用，但通常在密度梯度离心过程中丢失。本文介绍了一种优化的细胞分离方案，可保留脂肪变性肝细胞，从而在小鼠部分肝切除术后获得具有代表性的再生肝细胞群体。...

小鼠部分肝切除术后再生肝细胞的分离

联合肝脏分割和门静脉结扎分阶段肝切除术（ALPPS）已被证实可在第一阶段手术后数周内显著促进肝脏再生。已建立接受ALPPS的动物模型，以探索肝脏再生潜力并获得理想的临床效果。...

一种在显微镜辅助下建立用于分阶段肝切除术的肝脏联合分割和门静脉结扎小鼠模型

小鼠部分肝切除（2/3，即66%）模型在文献中已有充分描述，但用于模拟肝移植后小体积综合征的更大范围肝切除模型则较少被采用。本文介绍一种在小鼠中实施的扩展性78%肝切除手术方法，该操作在健康小鼠中可导致约50%的术后死亡率。...

小鼠手术模型中的扩大78%肝切除术

一种模拟代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）的小鼠模型，具有代谢功能障碍、肝脏基因表达改变以及肝组织病理学变化，且包含进展至晚期纤维化3期的纤维化特征，与人类MASLD相似。该模型可用于MASLD发病机制的研究以及新疗法的临床前研究。...

伴纤维化的代谢功能障碍相关脂肪性肝病小鼠模型

本方案介绍了一种全面的成像流程，用于在完整肝组织中可视化并建模肝星状细胞的形态。该方法结合利用小鼠遗传学对成纤维细胞进行荧光标记， 原位 基于肝脏灌注的组织制备，以及改良的iDISCO组织透明化方法，以实现光学透明。...

在小鼠肝纤维化模型中绘制肝星状细胞形态

了解小鼠可存活肝脏活检技术用于非酒精性脂肪性肝炎研究。该方法模拟临床试验设计，可准确评估治疗前后肝脏病理变化，为NASH药物疗效评价提供可靠的临床前研究模型。

在小鼠中实施可存活肝活检手术以评估非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的缓解

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