在鼻内siRNA输送到中枢神经系统期间放置小鼠的定位装置

该协议详细说明了将生物分子在鼻内向小鼠CNS输送的定位装置。使用这种设备大大减少了对小鼠的处理和治疗时间，从而提高了该技术的效率和可重复性。要开始这个程序，通过踏板反射评估小鼠的麻醉水平，以保持手术平面。

接下来，将定位设备放在适当的距离和高度，以便方便地访问所有必需的试剂。然后，在动物的眼睛上涂抹软膏。用椅子带绑一只鼠标，确保鼠标前肢在放松时提供自然支撑，而不会感到不适。

对剩余的小鼠重复这些步骤。将每只鼠标轻轻放在指定的椅子上，将其背面与椅子的背靠平行，并在 90 度处放在椅子座椅上。让动物自然地躺在头部向下和向前的位置，而无需推或按压。

一旦所有的小鼠被绑住，立即开始鼻内接种。要执行鼻内输送，请用两个微升的RVG9R siRNA复合溶液加载微管。将移液器握在主导手中，用另一只手支撑移液器，以避免在管理siRNA时不受控制地移动。

将两个微升液滴放在离一个鼻孔很近的地方，这样鼠标就可以直接吸入它。如果小滴不容易形成，请用新的滴液器更换移液器尖端并重复操作。在鼠标吸入并保持位置时，用食指轻轻向下推鼠标头五秒钟。

为了防止药物排入肺部，在鼠标吸入时，用食指将鼠标头部向下推五秒钟非常重要。开始一个秒表时钟三到四分钟后，时间接种到第一只鼠标的第二个纳勒。此时间间隔对于小鼠完成第一剂量的吸入并恢复正常呼吸是必要的。

在第一只小鼠的备用鼻科接种间隔之间的三到四分钟之间，在装置上放置的其余三只小鼠中，每只进行一次鼻内接种。当秒表响起时，给第一只老鼠接种第二个鼻孔，然后重复其他小鼠的手术，如上所示。重复此过程，直到所有四只小鼠都交付 20 到 30 微升。

完成整个接种过程需要大约30到45分钟。把动物放回指定的笼子里。不要让小鼠无人看管，直到它们恢复足够的意识，以保持胸骨的仰卧状态。

要评估基因沉默，使用RNA纯化试剂盒从不同大脑区域提取RNA，使用cDNA合成试剂盒将逆转录入cDNA，并使用底向对执行qPCR。大多数标有Alexa Fluor 488的RVG9R肽的大脑输送是首次使用此处描述的鼠标定位设备进行测试的。在接种后48小时，各种器官被切除，以测量 A488 荧光。

阴性对控的任何器官中未发现任何。另一方面，在RVG9R接种组的大脑中只检测到强荧光A488信号。此外，将鼠标放置位置与苏平位置法和唤醒法进行比较。

结果表明，将小鼠低头和向前定位可改善RVG9R A488在整个脑组织的切开和沉积。为了进一步确认siRNA传递到大脑，在将RVG9R复合到Cy5标记siRNA的单一鼻内给后，进行了全脑部扫描。与PBS或RVM9R相比，与RVG9R的复合导致在主要大脑区域（包括嗅球、皮层、海马、丘脑、丘脑、下丘脑、中脑和小脑）中大量积累siRNA。

定位装置可用于向小鼠CNS输送药物或分子。应用扩展到治疗测试以及检查中枢和中枢的细胞机制。该定位装置已被调查人员用于证明西RNA在治疗西尼罗河病毒病的功效，以及探索其他中枢疾病的治疗方法。