Use of Single Molecule Fluorescent In Situ Hybridization (SM-FISH) to Quantify and Localize mRNAs in Murine Oocytes

Kelsey  R. Timme; Jennifer R. Wood

doi:10.3791/59414

单分子荧光原位杂交 (SM-FISH) 在小鼠卵母细胞中 Mrna 的定量和定位

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Genetics

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Use of Single Molecule Fluorescent In Situ Hybridization (SM-FISH) to Quantify and Localize mRNAs in Murine Oocytes

单分子荧光原位杂交 (SM-FISH) 在小鼠卵母细胞中 Mrna 的定量和定位

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08:18 min

April 24, 2019

DOI: 10.3791/59414-v

Kelsey R. Timme¹, Jennifer R. Wood¹

¹Department of Animal Science,University of Nebraska-Lincoln

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

为了可重复地计数单个卵母细胞中的 Mrna 数量, 对非粘附细胞的单分子 RNA 荧光原位杂交 (RNA-FISH) 进行了优化。卵母细胞被收集, 与转录特异性探针杂交, 并使用图像定量软件进行量化。

这种技术不仅允许定位，而且允许在单个卵母细胞和胚胎中对候选mRNA进行定量。与其他检测（包括 PCR）相比，该技术的完成可产生低变异的可重复数据。演示这个程序的将是凯尔西·提姆，一个研究生在我的实验室。

从编写所需的材料和五至八周大的雌性小鼠开始，如文本协议所述。使用 70% 乙醇清洁鼠标。暴露腹腔，想象女性生殖道。

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