Name: 在小鼠小腿上应用一致的按摩样扰动，并监测由此产生的肌肉压力变化 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: 学习在小鼠小腿上应用机械负荷并监测肌肉内压力变化的方法。该方案使用手术胶带和铝线缠绕技术，为研究运动和按摩对肌肉生理的益处提供了简化的新途径。

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我们感谢中西K.、滨本K.、久米N.和鹤见K.在项目全程中的一贯支持。本工作部分得到了日本厚生劳动省内部研究基金、日本学术振兴会科学研究费补助金以及日本文部科学省2015-2019年度私立大学战略研究基础强化推进事业（S1511017）的资助。

所有动物实验均在残疾人国家康复中心机构动物护理和使用委员会的批准下进行。
1. 小鼠双侧后肢的固定
注意：实验使用雄性C57BL/6小鼠，在适应环境至少7天后，于11至12周龄时进行实验。
<ol>
	<li>使用戊巴比妥钠（50 mg/kg，腹腔注射）充分麻醉小鼠，确保小鼠对后肢脚趾夹捏无反应。 
	注意：为尽量减少对小鼠摄食活动的可能影响，固定操作应在上午10点至下午7点之间进行。</li>
	<li>将小鼠仰卧固定，膝关节伸展，踝关节跖屈，在其双侧后肢上贴上手术胶带。</li>
	<li>在小鼠躯干L4-5脊柱水平处放置一根铝丝（见材料表），并将铝丝以螺旋方式缠绕于后肢，每圈螺旋层之间保持5 mm间隙（图1A）。注意不要缠绕过紧，避免影响局部血流。</li>
	<li>为尽量减少小鼠脱离固定的可能性，通过手动调整铝丝的形状，将髋关节固定于90°外展位。</li>
	<li>将小鼠放回原有笼具。3小时后，确认其已从麻醉中恢复，并能正常进食和饮水。</li>
	<li>每笼饲养3至6只固定后的小鼠，饲养密度与固定前相同。</li>
</ol>
2. 小鼠腓肠肌肌肉内压力的测量
注意：在结合LCC的压力监测实验中，测试了多种不同重量的圆柱形单位（36 g、66 g 和 200 g）。该测量与分析肌肉炎症和萎缩的实验分别进行（详见步骤3-5），即用于压力测量的小鼠不用于组织学分析。
<ol>
	<li>由于压力测量涉及比后肢布线和负荷控制压缩（LCC）更为侵入性的操作（例如皮肤切口和针头插入），需使用三种麻醉剂的混合物（腹腔注射 medetomidine 0.75 mg/kg、midazolam 4.0 mg/kg 和 butorphanol 5.0 mg/kg）。确保小鼠对后肢脚趾夹捏无反应。</li>
	<li>将小鼠置于俯卧位，在使用电动剃须刀脱毛并用70%乙醇和氯己定浸润的吸水棉对皮肤表面进行半消毒后，用手术刀在后侧小腿处做一2 mm切口。</li>
	<li>以与皮肤表面成钝角（150°–170°）的方向将20 G留置针插入腓肠肌内。</li>
	<li>以针头的塑料套管作为引导，将血压遥测仪的传感器（参见材料表）置入腓肠肌中部肌腹，随后将套管从肌肉中取出。</li>
	<li>使用4-0尼龙缝线缝合皮肤后，在小鼠小腿上施加不同重量的圆柱形单元进行LCC处理（详见步骤3），并使用生物信号分析软件监测肌内压力（参见材料表）。</li>
	<li>将小鼠放回原有笼具中。3小时后，确认其已从麻醉/镇痛状态中恢复&#160;，并能正常获取食物和饮水。</li>
</ol>
3. 小鼠小腿局部周期性压缩（LCC）
<ol>
	<li>除肌肉内压测量和处死（即颈椎脱位）外，均使用戊巴比妥钠（50 mg/kg，腹腔注射）进行麻醉。</li>
	<li>将小鼠从后肢固定装置中松解，使其俯卧，膝关节伸展，踝关节跖屈，使小腿朝上。不要将小鼠后肢固定在平台上。</li>
	<li>通过垂直移动覆盖有缓冲垫的圆柱形重物单元（图1B）对小腿施加低强度循环载荷（LCC），频率为1 Hz，每天30分钟，持续7天（图1C）。</li>
	<li>每次每日LCC处理后，重新固定小鼠后肢。</li>
</ol>
4. 腓肠肌的免疫组织化学分析
<ol>
	<li>通过腹腔注射三种麻醉剂混合物（美托咪啶 0.75 mg/kg、咪达唑仑 4.0 mg/kg 和布托啡诺 5.0 mg/kg）实施充分的麻醉/镇痛后，采用颈椎脱位法处死小鼠。</li>
	<li>脱除小腿后侧毛发后，做皮肤切口，使用手术剪将腓肠肌从胫腓骨分离，并迅速将其在最佳切割温度包埋剂中冷冻。</li>
	<li>使用冷冻切片机在载玻片上制备腓肠肌的冷冻切片样本，分析前将样本储存在 -80 °C 冰箱中。</li>
	<li>从冰箱中取出待分析的腓肠肌冷冻切片样本，在室温下空气干燥以进行脱水处理。</li>
	<li>使用液体阻断笔在载玻片上画出包含所有冷冻切片的区域，该圆圈可防止溶液从载玻片上流失。</li>
	<li>将载玻片置于盛有湿水纸巾以形成湿润环境的托盘中，避免样本干燥。</li>
	<li>每张切片加入 100 µL 封闭缓冲液（含 0.25% 酪蛋白、载体蛋白和 0.015 M 叠氮化钠的磷酸盐缓冲液 (PBS)），室温孵育 30 分钟。</li>
	<li>用 PBS-T（含 0.1% 聚氧乙烯山梨醇单月桂酸酯（见材料表）的 PBS）孵育 5 分钟，重复清洗两次。</li>
	<li>每份样本加入 100 µL 用 PBS 稀释的一抗溶液，盖上托盘盖子，室温孵育过夜。</li>
	<li>用 PBS-T 清洗三次，每次 5 分钟。</li>
	<li>每份样本加入 100 µL 用 PBS 稀释的二抗溶液，室温孵育 1 小时。 
	注意：进行抗层粘连蛋白染色时，使用 Alexa Fluor 568 标记的二抗；进行抗 F4/80、抗 MCP-1 和抗 TNF-α 染色时，使用 Alexa Fluor 568 或 488 标记的二抗。</li>
	<li>用 PBS-T 清洗三次，每次 5 分钟。</li>
	<li>每份样本加入 100 µL 用 PBS-T 稀释的 DAPI 溶液，室温孵育 3 分钟。</li>
	<li>用 PBS-T 清洗三次，每次 5 分钟。</li>
	<li>用封片剂封片，并加盖盖玻片。</li>
</ol>
5. 腓肠肌的组织形态计量学分析
<ol>
	<li>将样本载玻片置于荧光显微镜（参见材料表）上，使用20×物镜及适当的滤光片观察样本（DAPI-B：激发波长360/40 nm，发射波长460/50 nm；GFP-B：激发波长470/40 nm，发射波长535/50 nm；FRITC：激发波长540/25 nm，发射波长605/55 nm）。</li>
	<li>使用图像分析软件（参见材料表），测量每根肌纤维的横截面积（CSA），并计数F4/80、MCP-1和TNF-α阳性细胞的数量。 
	注意：通过勾画抗层粘连蛋白-2免疫染色所显示的基底膜内缘来确定每根肌纤维的横截面积。</li>
</ol>

<ol><li>Furlan, A. D., Imamura, M., Dryden, T., Irvin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massage+for+low+back+pain%3A+an+updated+systematic+review+within+the+framework+of+the+Cochrane+Back+Review+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Spine%22%5BJournal%5D)">Massage for low back pain: an updated systematic review within the framework of the Cochrane Back Review Group.</a> Spine. 34 (16), 1669-1684 (2009).</li>
<li>Robertson, A., Watt, J. M., Galloway, S. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+leg+massage+on+recovery+from+high+intensity+cycling+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effects of leg massage on recovery from high intensity cycling exercise.</a> British Journal of Sports Medicine. 38 (2), 173-176 (2004).</li>
<li>Waters-Banker, C., Butterfield, T. A., Dupont-Versteegden, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+effects+of+massage+on+nonperturbed+skeletal+muscle+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory effects of massage on nonperturbed skeletal muscle in rats.</a> Journal of Applied Physiology. 116 (2), 164-175 (2014).</li>
<li>Haas, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massage+timing+affects+postexercise+muscle+recovery+and+inflammation+in+a+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%26+Science+in+Sports+%26+Exercise%22%5BJournal%5D)">Massage timing affects postexercise muscle recovery and inflammation in a rabbit model.</a> Medicine & Science in Sports & Exercise. 45 (6), 1105-1112 (2013).</li>
<li>Crane, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massage+therapy+attenuates+inflammatory+signaling+after+exercise-induced+muscle+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Massage therapy attenuates inflammatory signaling after exercise-induced muscle damage.</a> Science Translational Medicine. 4 (119), 119ra113(2012).</li>
<li>Bove, G. M., Harris, M. Y., Zhao, H., Barbe, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+therapy+as+an+effective+treatment+for+fibrosis+in+a+rat+model+of+upper+extremity+overuse+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Neurological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Manual therapy as an effective treatment for fibrosis in a rat model of upper extremity overuse injury.</a> Journal of the Neurological Sciences. 361, 168-180 (2016).</li>
<li>Andrzejewski, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+skeletal+muscle+expression+of+VEGF+induced+by+massage+and+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Histochemica+et+Cytobiologica%22%5BJournal%5D)">Increased skeletal muscle expression of VEGF induced by massage and exercise.</a> Folia Histochemica et Cytobiologica. 53 (2), 145-151 (2015).</li>
<li>Mantovani Junior, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+massage+as+a+recuperative+technique+on+autonomic+modulation+of+heart+rate+and+cardiorespiratory+parameters%3A+a+study+protocol+for+a+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Trials%22%5BJournal%5D)">Effects of massage as a recuperative technique on autonomic modulation of heart rate and cardiorespiratory parameters: a study protocol for a randomized clinical trial.</a> Trials. 19 (1), 459(2018).</li>
<li>Zeng, H., Butterfield, S., Agarwal, F., Haq, T., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+engineering+approach+for+quantitative+analysis+of+the+lengthwise+strokes+in+massage+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Devices%22%5BJournal%5D)">An engineering approach for quantitative analysis of the lengthwise strokes in massage therapies.</a> Journal of Medical Devices. 2 (4), (2008).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mechatronic+system+for+quantitative+application+and+assessment+of+massage-like+actions+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">A mechatronic system for quantitative application and assessment of massage-like actions in small animals.</a> Annals of Biomedical Engineering. 42 (1), 36-49 (2014).</li>
<li>Saitou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+cyclical+compression+modulates+macrophage+function+in+situ+and+alleviates+immobilization-induced+muscle+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Science%22%5BJournal%5D)">Local cyclical compression modulates macrophage function in situ and alleviates immobilization-induced muscle atrophy.</a> Clinical Science. 132 (19), 2147-2161 (2018).</li>
<li>Onda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+New+mouse+model+of+skeletal+muscle+atrophy+using+spiral+wire+immobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">A New mouse model of skeletal muscle atrophy using spiral wire immobilization.</a> Muscle Nerve. 54 (4), 788-791 (2016).</li>
<li>Luster, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines--chemotactic+cytokines+that+mediate+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chemokines--chemotactic cytokines that mediate inflammation.</a> The New England Journal of Medicine. 338, 436-445 (1998).</li>
<li>Reid, M. B., Li, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor-%CE%B1+and+muscle+wasting%3A+a+cellular+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor-α and muscle wasting: a cellular perspective.</a> Respiratory Research. 2 (5), 269-272 (2001).</li>
<li>Baumann, J. U., Sutherland, M. D., Hangg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramuscular+pressure+during+walking%3A+An+experimental+study+using+the+wick+catheter+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Orthopaedics+Related+Research%22%5BJournal%5D)">Intramuscular pressure during walking: An experimental study using the wick catheter technique.</a> Clinical Orthopaedics Related Research. 145, 292-299 (1979).</li>
<li>Lee, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+physical+inactivity+on+major+non-communicable+diseases+worldwide%3A+an+analysis+of+burden+of+disease+and+life+expectancy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Effect of physical inactivity on major non-communicable diseases worldwide: an analysis of burden of disease and life expectancy.</a> Lancet. 380, 219-229 (2012).</li>
</ol>

作者声明，本稿件不存在任何利益冲突。

我们描述了一种施加类似按摩的机械刺激的方法，该方法具有抗炎作用。与以往报道的方法相比，我们的系统具有以下优势。首先，以往的研究未对所施加的机械力进行定量定义2，或仅基于体表测量值来确定其强度，而非组织内部的测量10。相比之下，我们使用血压遥测仪测量了肌肉内的压力。其次，我们设备的结构简单（图1B），使得我们能够以相对较低的成本构建出高度一致且可重复的系统（图3A）。第三，我们的干预措施（LCC）在肌肉内压力变化（50 mmHg15）方面与身体活动（轻度肌肉收缩）相关。我们的研究将为类似按摩的干预措施提供科学依据，使其可能成为一种减轻久坐不动弊端的治疗或预防手段16。
本方案中最关键的步骤是小鼠后肢的定位（方案步骤 3.3）。我们需要将线性压缩装置（LCC）垂直于小腿肌肉方向施...

按摩通常被认为对竞技运动员和非运动员均有缓解疼痛和改善身体机能的作用1,2。事实上，先前的研究表明，按摩可抑制局部炎症3，并促进运动后肌肉损伤的恢复4,5。然而，按摩有益作用背后的分子机制在很大程度上仍不清楚。
关于按摩机制研究的一个难点在于按摩样干预测试方法的可重复性。在以往的研究中，模拟按摩的实验操作大多涉及使用操作者身体部位（如手掌和手指）施加物理干预6,7,8。这使得其作用强度、频率、持续时间和作用方式难以精确重复。
已有多种设备被开发用于对目标组织施加明确的机械负荷。例如，Zeng 等人开发了一种气动系统，可对大鼠后肢进行纵向机械加载9；Wang 等人开发了一种机电装置，能够以类似按摩的方式对大鼠和兔的后肢施加机械负荷，并具有实时反馈控制功能10。与这些装置相比，我们的局部周期性压缩（LCC）系统更为简单，构建成本显著降低。尽管如此，我们仍能重现轻度肌肉收缩期间产生的肌内压变化。利用该装置，我们已成功证明类似按摩的机械干预可调节局部间质液动力学，并缓解制动引起的肌肉萎缩11。
本文详细描述了我们的设备及实验方案，该方案可能有助于探索运动和按摩产生积极效应背后的分子机制。方案的示意图见补充图1。

<table><tbody><tr><td>铝线</td><td>DAISO JAPAN</td><td>B028</td><td>使用铝线以避免因导线造成的限制性逃逸</td></tr><tr><td>血压遥测仪</td><td>米勒</td><td>SPR-671</td><td>使用血压遥测仪测量肌内压。</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>D1306</td><td>DAPI 是一种常用于荧光显微镜下DNA染色的荧光探针。</td></tr><tr><td>山羊抗兔 Alexa Fluor 488（稀释比例，1:500）</td><td>Invitrogen </td><td>A11034</td><td>免疫组织化学染色用抗体</td></tr><tr><td>山羊抗大鼠 Alexa Fluor 568（稀释比例，1:500）</td><td>Invitrogen </td><td>A11077</td><td>免疫组织化学染色用抗体</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>美国国立卫生研究院</td><td>N/A</td><td>图像分析软件</td></tr><tr><td>LabChart8</td><td>ADInstrumens</td><td>&amp;nbsp;</td><td>用于获取生物信号的分析软件。</td></tr><tr><td>延长金</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>P36930</td><td>Prolong Gold 用于封固染色样本。</td></tr><tr><td>蛋白封闭剂 无血清</td><td>Dako</td><td>X090930-2</td><td>用于免疫组织化学实验中阻断非特异性背景染色。</td></tr><tr><td>大鼠单克隆抗层粘连蛋白-2抗体（稀释比例，1:1000）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L0663</td><td>免疫组织化学染色用抗体</td></tr><tr><td>大鼠单克隆抗F4/80抗体（稀释比例，1:500）</td><td>Abcam</td><td>ab6640</td><td>免疫组织化学染色用抗体</td></tr><tr><td>兔多克隆抗MCP-1抗体（稀释比例，1:1000）</td><td>Abcam</td><td>ab25124</td><td>免疫组织化学染色用抗体</td></tr><tr><td>兔多克隆抗TNF-&amp;alpha; 抗体（稀释比例，1:1000）</td><td>Abcam</td><td>ab66579</td><td>免疫组织化学染色用抗体</td></tr><tr><td>手术胶带</td><td>3M 日本</td><td>1530EP-0</td><td>手术胶带用于限制关节活动。</td></tr></tbody></table>

在小鼠小腿上施加一致的按摩样扰动并监测由此产生的肌内压变化

Application of Consistent Massage-Like Perturbations on Mouse Calves and Monitoring the Resulting Intramuscular Pressure Changes

按摩通常被认为有助于缓解疼痛和炎症。尽管先前的研究已报道了按摩对骨骼肌具有抗炎作用，但其背后的分子机制尚不明确。我们近期开发了一种简单的装置，用于施加局部周期性压缩（LCC），该装置可产生不同振幅的肌内压力波。利用该装置，我们已证明LCC可在原位调节巨噬细胞的炎症反应，并减轻因制动引起的肌肉萎缩。本文中，我们描述了将LCC作为类似按摩的干预手段，用于缓解小鼠后肢骨骼肌因制动所致炎症和萎缩的优化与应用方案。我们所建立的实验方案有助于研究体力活动和按摩益处背后的机制。尽管仍需进一步完善以开展更全面的研究，但我们的实验系统为解析机械力调控肌肉稳态的分析方法提供了一个原型。

与我们之前的观察结果一致12，后肢固定显著降低了腓肠肌肌纤维的横截面积（CSA）（图2A,B）。此外，我们的免疫荧光染色分析显示，在固定后肢的腓肠肌组织中，表达MCP-1和TNF-α的细胞数量显著增加；这两种因子在调控炎症过程中发挥关键作用13,14（MCP-1：图2C,F,H；TNF-α：图2D,G,I）。结合F4/80阳性染色细胞（巨噬细胞标志物）的增加（图2C-E,H,I），后肢固定似乎引发了涉及局部炎症反应（包括巨噬细胞积聚）的小腿肌肉萎缩。随后，我们进一步探讨了LCC（一种类似按摩的机械干预）是...

本文介绍了对小鼠小腿施加特定机械负荷以及监测伴随发生的肌内压变化的实验方案。我们开发的实验系统可用于研究体育锻炼和按摩有益作用背后的机制。

按摩通常被认为有助于缓解疼痛和炎症。尽管先前的研究已报道了按摩的抗炎作用……

我们的方案在系统和机制研究中具有应用价值。正确的信息展示了物理应激和按摩的效果。我们的局部循环完成系统更为简单。局部插入无需采用传统方法。将动物置于仰卧位，膝关节伸展，踝关节跖屈，然后在双侧后肢上使用外科胶带固定。在L4-5脊柱水平的躯干上放置一根铝丝，并将铝丝以螺旋方式缠绕于后肢，每圈之间保持5毫米的间距。为尽量减少导线松脱的可能性，手动调整导线的布线方式，使髋关节固定于90度外展位。然后将小鼠放回其饲养笼中，并进行监测直至完全恢复。为测量腓肠肌肌内压力，将麻醉后的小鼠置于俯卧位，剃除、脱毛并进行小腿后侧皮肤的半消毒处理。使用手术刀在已消毒的皮肤上做一个两毫米的切口，并以与皮肤表面成150至170度的角度将20号留置针插入腓肠肌。接下来，以针头的塑料套管作为引导，将血压遥测传感器放置于腓肠肌的肌腹中部。用4-0尼龙缝线包绕皮肤。然后，使用多个不同的圆柱形单位重量对小腿肌肉施加局部圆柱形压迫，持续一分钟。并使用适当的生物信号分析软件监测肌内压力。进行局部周期性压缩处理时，将麻醉后的小鼠从后肢固定装置上取下，并将动物置于俯卧位。调整后肢位置，使膝关节伸展，踝关节处于跖屈状态，小腿朝上。每天将覆盖有缓冲垫的圆柱形重物以每秒一次的频率垂直移动，对小鼠小腿肌肉进行30分钟的压迫，持续七天。每次每日压迫结束后，在将动物放回其饲养笼之前，重新连接小鼠后肢的导线。实验结束时，去除小腿后侧表面的毛发，切开皮肤，以便分离腓肠肌与胫腓骨。将收获的肌肉组织在最佳切割温度（OCT）包埋剂中迅速冷冻。使用冷冻切片机在玻璃载片上获取腓肠肌的切片。进行免疫组织化学标记时，先将切片在室温下空气干燥以解冻并脱水，然后使用疏水笔在每张载片的组织切片周围画一圈。接下来，将切片置于湿盒中，并在每张切片上加入100 µL封闭缓冲液。室温孵育30分钟后，用PBS-T缓冲液洗涤两次，每次5分钟，随后在切片上加入100 µL目标一抗，室温下避光孵育过夜。第二天早晨，用 PBS-T 缓冲液将玻片洗涤 3 次，每次 5 分钟。然后在避光条件下，室温下用合适的二抗对样品孵育 1 小时。孵育结束后，按所示方法用新鲜的 PBS-T 缓冲液将玻片洗涤 3 次。在室温避光条件下，用 100 µL DAPI 染色细胞核 3 分钟。然后，再用缓冲液洗涤载玻片三次。最后，使用适配的封片剂和盖玻片封片。进行组织形态计量分析时，将切片置于荧光显微镜载物台上，使用适当的滤光片在20倍物镜下观察样本。然后，在图像分析软件中测量每根肌纤维的横截面积，并计数表达目标实验标记物的细胞数量。后肢固定显著降低了腓肠肌肌纤维的横截面积。此外，免疫荧光染色分析显示，在固定后肢的腓肠肌组织中，表达 MCP-1 和 TNF-α 的细胞数量显著增加。结合 F4/80 阳性染色细胞的增多，后肢固定似乎会引发小腿肌肉萎缩，并伴随局部炎症反应，包括巨噬细胞积聚。在通过改变圆柱形单元重量测试的多种不同局部周期性压缩强度中，相当于 50 毫米汞柱肌内压力波的压缩强度，对缓解固定所致的肌纤维横截面积减小以及腓肠肌中巨噬细胞积聚的增加，表现出最有效的改善作用。每天对局部施加66克、1赫兹的周期性压缩，持续30分钟，连续7天，可显著缓解因制动导致的腓肠肌肌纤维横截面积减小。此外，局部周期性压缩可部分减轻制动引起的腓肠肌复合群收缩力下降。同时，局部周期性压缩还可抑制制动后后肢腓肠肌组织中F4/80阳性、TNF-α阳性以及MCP-1阳性细胞的增加。我们的方法将为患者肌肉增长提供科学依据，并为预防性治疗策略提供潜在方向。大鼠实验发现了身体活动受限的影响。利用我们的系统，我们已开始评估大多数患者肌肉缺乏机械刺激的情况。适度的局部工业方法可导致理想的制动性肌肉萎缩。

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免疫学与感染

在小鼠小腿上应用一致的按摩样扰动，并监测由此产生的肌肉压力变化

本视频演示了一种在小鼠体内测量复合肌肉动作电位（CMAP）的技术。该技术概述了电极设置、刺激支配肌纤维的前肢神经元以及记录肌肉反应的步骤。该方法可用于评估神经元脱髓鞘及功能性神经元的丢失。...

在活体小鼠前肢肌肉中测量复合肌肉动作电位

本论文提供了一种在小鼠体内植入遥测仪以测量妊娠期间子宫内压力的实验方案。...

子宫内遥测法测量小鼠收缩压 体内

我们提出经过优化的实验方案，可实现 体内...

小鼠后肢肌肉中复合肌肉动作电位（CMAP）的电生理运动单位计数（MUNE）测量

神经传导测量是评估神经退行性疾病小鼠模型的有用工具，但通常仅用于刺激后肢坐骨神经。本文介绍了一种测量复合肌肉动作电位（CMAP）的技术 体内...

体内电生理记录小鼠运动神经元变性模型前肢复合肌肉动作电位

测量啮齿类动物骨骼肌的收缩功能是一种有用的工具，可用于追踪疾病进展以及评估治疗干预的效果。本文描述了一种非侵入性的、可在活体（in...

小鼠背屈肌功能的非侵入性评估

我们开发了一种诱发性关节炎疼痛的检测方法，并将其与标准化的自发性疼痛测量方法相结合，用于检测不同化学诱导型小鼠关节炎模型中的疼痛。这些方法对不同类型的关节疼痛具有较高的敏感性和可重复性。...

单关节膝痛小鼠模型中疼痛的自发性与诱发性评估

量化膝伸肌最大肌力对于理解衰老、疾病、损伤及康复过程中的功能适应至关重要。我们提出了一种新方法，用于重复测量体内膝关节伸展的等长峰值强直性扭矩。...

活体小鼠膝伸肌功能的测量

本文提供了利用尿激酶型纤溶酶原激活物进行韧带内注射，以快速、简便地建立小鼠背痛模型的方法。...

尿激酶型纤溶酶原激活物诱导的小鼠背痛模型

本方案描述了一种称为剂量调整阻力训练（DART）的独特技术，该技术可应用于在小动物（如小鼠）中开展的精准康复研究。...

剂量调整型抗阻训练在降低肌肉损伤风险小鼠中的应用

本研究介绍了一种用于小鼠的腹部按摩装置，该装置可模拟人工按摩，同时最大限度地减少应激反应和组织损伤。该装置显著降低了2型糖尿病小鼠的血糖水平，改善了脂质代谢，并增强了胰岛素敏感性，提供了一种具有临床潜力的、有前景的非侵入性治疗策略。...

T2DM小鼠腹部按摩的固定与操作方法

本方案描述了如何测量小鼠的膝关节痛觉过敏。我们展示了急性膝关节疼痛小鼠模型以及骨关节炎（OA）模型中的示例。...

使用压力应用测量法评估小鼠膝关节痛觉过敏

学习在小鼠小腿上应用机械负荷并监测肌肉内压力变化的方法。该方案使用手术胶带和铝线缠绕技术，为研究运动和按摩对肌肉生理的益处提供了简化的新途径。

在小鼠小腿上施加一致的按摩样扰动并监测由此产生的肌内压变化

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