利用成像质谱技术捕获组织与细胞之间的小分子通信

我们的协议可以映射细胞和组织之间的小分子化学通信，我们特别应用这个来探索卵巢癌元移植中的小分子。我们技术的主要优点是能够以无标签的方式测量小分子，同时保持2D细胞和组织的空间完整性。这项技术使我们能够以非目标化的方式询问小分子在卵巢癌转移中的贡献。

这可能会揭示新的治疗目标和途径，以前被忽视。这种方法可以很容易地扩展到其他癌症，可以生长在阿加罗斯和任何其他疾病，其中空间成分可能是重要的细胞表型。确保所有电池和组件都手头，对干燥过程的耐心对该协议至关重要。

仓促的干燥步骤通常会导致质量差的质谱数据。此方法的视觉演示有助于了解我们的样品制备和干燥步骤，因为这些步长与使用农业上组织或微生物的典型成像质谱实验大相径庭。首先，在70摄氏度的高温盘上液化糖。

将八井分隔线放在 ITO 处理过的幻灯片顶部。通过标准的锥性分析处理，将MOE细胞收集在15毫升锥形管中，离心机，并加入1倍DMEM介质以重新暂停，每150微升获得5万个细胞的浓度，是最终所需密度的2倍。对于未分割的共培养，使用钳子将卵巢外植添加到四口井的中心。

就在电镀之前，将200微升的细胞悬浮液和200微升的液化阿加糖混合在单独的两毫升管中。在移液过程中避免气泡。立即将300微升的细胞-阿加罗斯混合物添加到每口井中，并在分压器上施加连续的缓下压力，以确保井间不会泄漏或混合。

确保没有气泡，卵巢仍留在井的中心。如果移液的气糖扰乱了卵巢，则轻轻地使用移液器尖端在气糖冷却前居中。然后，在37摄氏度的温度下孵化滑梯，在加湿的培养箱中孵化5%的二氧化碳。

对于分种的共培养，从薄，光滑的塑料切割分压器。使用无菌一次性介质盆的两侧。切他们足够宽，以适应舒适到井的低血压。

将八孔分隔器放在 ITO 处理过的滑轨顶部，然后对角线将塑料分隔线插入井中。准备细胞培养，如以前做，并结合100微升细胞悬浮液和100微升液化的阿加罗斯在两毫升管。立即，在分频器一侧保持向下压力的同时，将150微升的细胞-阿加罗斯混合物板放在分压器上。

让加糖冷却和凝固约一分钟，然后拆下分压器。使用钳子将卵巢外植放在空井的半部分的中心。在卵巢顶部加入150微升的细胞-阿加罗斯混合物。

在加湿的培养箱中孵化37摄氏度的滑梯和5%的二氧化碳。四天后，从加糖塞上拆下腔室分压器。用扁平的铲子，将加糖的两侧从腔室中分离出来，然后轻轻地向上拉起腔室。

如果移动任何阿加罗斯插头，请轻轻重新定位它们，以便它们彼此不接触。将幻灯片放入 37 摄氏度的烤箱中约 4 小时，每小时旋转 90 度，以确保整个样品的热量均匀分布。幻灯片必须完全干燥。

否则，它可能导致在 MALDI-TOF 质谱仪的高真空环境中样品爆炸。干燥幻灯片并监控进度是实现高空间分辨率和质量质谱的最关键步骤。如果出现剥落或过度起皱，我们不建议收集质谱数据。

在矩阵喷雾器上设置参数后，将矩阵溶液应用到幻灯片上。要使用红磷作为卡钳，请将一微升的磷红添加到幻灯片上的清晰位置。要使用肽混合物作为校准剂，请将其与 Parafilm 上的基质以一比一的比例混合，以帮助电离，并在幻灯片上点 0.5 比 1 微升。

等待校准剂干燥，然后再进行成像质谱数据采集。使用幻灯片每个角落的永久标记绘制 X，并使用相机或扫描仪以 1200 dpi 拍摄光学图像。在此实验中，仔细监测烤箱中的幻灯片对于确保最佳的干 ITO 幻灯片至关重要，从而产生平整的干燥样品，在红糖表面出现最小或无褶皱。

此图显示了应避免的皱纹。皱纹可以稍微影响高度，因此成像质谱信号的质量精度。轻微的皱纹不会影响数据的质量。

最佳定位的组织应尽可能靠近中心。如果井是未分割的，使用的组织应位于井的中心，如果井被分割，那么在半三角形的中心，以便获取 IMS 数据不会受到边缘效应的污染。位置不良的组织，当成像时，可能会导致来自边缘效应的假质量信号。

干幻灯片图像用于教 MALDI-TOF 质谱仪要成像的区域。卵巢组织周围的小区域被选为50微米的国际人体疾病系统。对于未分割的共培养，以及用于分室设置，将显示 m-over-z 信号的代表性图像。

需要记住的最重要的事情是，结果数据只与样品制备一样好。特别注意干燥过程。最令人兴奋的方面是验证用这种方式发现的小分子使用其他实验，如入侵分析或殖民化分析，以告知有效的浓度，并转化为人类生物学。

我们期望，这将打开大门，发现卵巢癌的潜在治疗目标的新途径，更好地了解卵巢癌的主要转移过程。