使用线性加速器进行体外放射生物学实验

放射治疗最常使用线性加速器进行。该协议允许研究人员使用线性加速器评估辐射对细胞的生物影响。该技术的优点是，通过使用线性加速器，研究人员可以研究广泛的临床相关剂量和剂量率。

此外，该协议可用于所有类型的癌细胞。此方法可以使用与此处所示类似的设备执行。例如，由其他供应商制造的线性加速器。

没有使用线性加速器进行剂量计算经验的个人可能难以计算向样品提供所需剂量所需的正确监测单位数。他们将受益于寻求经验医学物理学家或医生的建议。使用线性加速器准确向样品提供剂量需要仔细放置。

在预定辐照前两天，在培养罩中工作，使用无菌的五毫升移液器将胶质瘤干细胞从培养板收集到15毫升离心管中。在台式离心机中以200倍g离心，三分钟。丢弃上一提液，用一毫升的三辛-EDTA重新暂停细胞颗粒。

在室温下孵育五分钟，消化颗粒，并在尝试性-EDTA中进行单细胞悬浮。在消化过程中，每两分钟轻轻摇动离心管底部，以确保细胞被彻底消化。然后加入三毫升干细胞培养培养剂，在台面离心机中以200倍g为单位轻轻混合并离心机3分钟。

丢弃上清液后，用五毫升细胞培养培养剂重新暂停细胞颗粒，用血细胞计对细胞进行计数。板500万细胞分成两个10厘米的板，含有10毫升的细胞培养基，在37摄氏度下孵育48小时。就在预定的辐照之前，收集细胞和离心机，如前完成。

丢弃上一提液，用五毫升细胞培养培养剂重新暂停细胞颗粒。将一毫升细胞悬浮液转移到一个35毫米的板中，其中包含两毫升的细胞培养基，确保培养基达到一厘米的高度。将镀有细胞转移到辅助容器中，以降低污染风险，并将公用车上容器中的细胞带到辐照设施，以照射细胞。

在照射前一天，在细胞培养罩中工作，使用连接到真空的巴斯德移液器将DMEM培养基从细胞培养板中去除至所附细胞系。然后用五毫升无菌PBS清洗细胞，冲洗掉残留介质。在培养皿中加入一毫升的三辛-EDTA，轻轻倾斜培养盘，确保覆盖整个盘子。

在室温下孵育五分钟后，用三毫升DMEM介质淬火抑制三辛-EDTA反应。使用五毫升移液器将细胞收集到15毫升离心管、离心机中，然后培养手稿中描述的细胞。使用 LINAC 的控制台软件照射这些以前准备的细胞，将加速器龙门和准直器设置为零度，将 x 和 y 钳口打开到对称的五乘五平方厘米的场大小，并收回多叶准直直器。

在治疗沙发上添加至少五厘米的水当量材料，并将细胞盘照射到 LINAC 十字线的中心。将细胞以最大剂量的深度放在约1.5厘米的6兆伏X射线束中，并在培养皿顶部添加1厘米的水当量材料。将前指针固定到 LINAC 的头部并扩展它，直到它接触堆积材料的表面。

调整表高度，直到从源到堆积表面的距离为 100 厘米。离开治疗库，确保所有其他人员已经离开。验证房间中是否有其他单元格，然后关闭保管库门。

在控制台上确认场大小、监控单元和每分钟监控单位，然后为辐射单元启用光束。使用该协议编写了三个胶质瘤干细胞样本，并在照射后24小时采集。计算细胞周期配置文件，并显示细胞在细胞周期的不同阶段的百分比。

与非辐照控制细胞相比，在以标准剂量率或超高剂量率照射胶质瘤干细胞后观察到G2细胞周期逮捕。为了提供正确的剂量，最重要的是测量培养皿中介质的高度，以确保其达到一厘米。按照这个程序，可以进行其他生物测定，如免疫污染，西部印迹和细胞周期分析。

由于该程序为研究人员提供了临床相关的剂量和剂量率设置，它可用于评估辐射效应对许多细胞培养为基础的模型。