从成年小鼠分离心膜肌细胞

将心房肌细胞隔离用于贴片夹实验，极大地增进了我们在细胞和分子水平上对心房电生理学的了解和理解。我们使用的方法有效地产生大量的孤立的心房肌细胞，可用于研究细胞心房电生理学和心律失常在广泛的实验模型和条件。我们采用了一种主干消化方法来隔离心房菌体。

这种方法的优点是，它允许研究人员选择他们想要调查的特定区域。从准备文本协议中描述的设备和解决方案开始此过程。布置解剖板、解剖工具、巴斯德移液器和防火抛光移液器。

该协议可对雄性或雌性野生小鼠、携带基因突变的小鼠和小鼠疾病模型执行。按照文本协议中描述的鼠标安乐死，将鼠标放在纸巾或软木板上，用胶带将爪子固定到位。用70%乙醇弄湿老鼠的胸部。

用弯曲的剪刀去除覆盖胸部的毛皮和皮肤。接下来使用大鼠牙钳提起胸骨，然后沿着肋骨边缘切割隔膜。用弯曲的剪刀切除整个肋骨，露出心脏。

要去除心房附属物，请用精细的解剖钳轻轻提起附属物，用弹簧剪刀将其切开。立即将心房附属物转移到硅涂层解剖盘中，其中含有 20 毫升加热改性 Tyrode 的 pH 7.4 溶液。将一个解剖销放在顶部，一个销放在心房附属物开口的底部。

使用巴斯德移液器，用加热的经过的泰洛德 pH 7.4 溶液冲洗 atria 以去除血液。沿其顶部和底部边缘切割打开心房附属物。接下来，将心房附属物的角固定下来，形成一个扁平的矩形组织。

使用弹簧剪刀和细钳将心房附属物切成大约 8 到 10 个大小相等的条。请注意，条带一旦从主组织上切割，就收缩。使用小孔防火抛光移液器，将组织条转移到第一管中，其中含有加热的改性 Tyrode 的 pH 6.9 溶液。

等五分钟现在，使用中孔防火抛光移液器将组织条转移到含有修改的 Tyrode pH 6.9 溶液的第二轮底部管中。要清洗组织条，盖上五毫升圆底管，轻轻反转管三次。

让组织条沉淀到管的底部，然后使用中孔防火抛光移液器将组织条转移到第三管。通过反转再次清洗条带。然后，使用中孔防火抛光移液器将组织条转移到酶溶液中，并孵育30分钟。

每三到五分钟旋转一次管子，以防止组织条粘附在一起。在酶消化的开始，组织条在旋转后迅速沉淀。在大约20分钟的消化中，组织条在旋转后开始漂浮在酶溶液中。

在此期间，心房组织条在消化时也从淡粉色变成白色。酶消化后，在准备好的五毫升圆形底部管中使用2.5毫升KB溶液进行三次洗涤。对于每次洗涤，轻轻反转管三次，然后使用中孔防火抛光移液器将组织移动到下一管。

最后洗涤后，将条板转移到含有 2.5 毫升 KB 溶液的 14 毫升圆形底部管中。等五分钟使用宽孔防火抛光移液器轻轻三角组织 7.5 分钟。

这将机械地分离组织条，并产生一个浑浊溶液，充满了个别心房菌。第一个三角化必须进行定制，以产生大量的细胞，而不会损害细胞。考虑诸如小鼠的年龄和疾病状况等因素。

通过改变从宽孔火抛光移液器中排出组织条的频率和速度，将三化力定制到单个隔离。温和的三角化导致细胞产量低，而严酷的三角化会产生许多死细胞。将含有三化组织条的 14 毫升圆形底部管填充为 7 到 10 毫升的最终体积，具体取决于实验用途所需的细胞密度。

将此管在室温下放置一小时。在此潜伏期之后，细胞可用于各种实验长达7小时。这里展示的有来自正常小鼠的分离心房菌的例子。

分离的心房菌体通常按100微米的长度和10微米的宽度和清晰的条纹。分离的心房菌的电容通常是40至70皮科法拉。显示了在当前夹紧模式下使用穿孔贴片夹技术记录的心房菌细胞作用电位的例子。

在贴片夹技术的整个细胞配置中记录了钠电流的代表性系列。这些电流是在负 100 和正 10 毫伏之间使用 50 毫秒电压夹步记录的，这些电流的保持电位为负 120 毫伏。此处概述了钠电流电压关系。

使用负 60 和正 80 毫伏之间的 250 毫秒电压夹步记录了具有代表性的钙电流系列，其保持电位为负 70 毫伏。此处显示了钙电流电压关系摘要。使用负 120 毫伏和正 80 毫伏之间的 500 毫秒电压夹步从负 80 毫伏的保持电位中记录了一个具有代表性的钾电流系列。

此处显示了总钾电流的汇总电流电压关系。重要的是要记住，成功的心房菌细胞分离取决于适当的酶消化以及三角分离期间细胞的机械分离。一旦分离，心房菌体可用于贴片夹实验，以测量作用潜力形态和离子电流，如钠电流、钙电流和钾电流。

研究心房肌细胞电生理学的变化对于确定威胁心律失常的细胞和分子基础以及开发并测试心房心律失常的抗心律失常化合物至关重要。