人类囊胚活检和细胞化

爆细胞活检和玻璃化都是试管婴儿的一场革命，体外受精使来自世界各地的胚胎学家能够对人类胚胎进行植入前基因测试，而胚胎风险最小。Trophectoderm活检使从完全生长的胚胎中检索到大约7个细胞，从而能够进行可靠的下游基因分析。此外，迄今为止，尚未显示对这种做法的影响。

此工作流程的临床效率使单基因条件的患者和所有在其囊肿内染色体异常风险增加的患者受益于植入前基因测试。目前，胚胎选择策略仍有改进的余地。例如，miRnomic 和蛋白质组分析代表有趣的选项，以补充单次营养异常活检的植入前基因测试。

缺乏经验的操作员经常难以打开和穿透佐纳佩鲁西达。这只是一个焦点问题。爆震、激光目标和移液器应在同一焦点平面上。

在用患者的详细信息标记活检盘后，用永久的、无毒的标记，用胚胎和周期 ID 将每 10 微升的 HEPES 缓冲介质数数。 使用 300 微米剥离移液器，将可行、完全展开的爆震转移到活检盘的第一滴，并冲洗滴以去除多余的培养基，然后再将胚胎转移到第二滴。将盘子放在倒置显微镜下，用活检盘第三滴的介质对活检移液器进行加热。在20倍的放大倍率下，定向胚胎，在7点钟时获得内细胞质量的清晰视图，并固定胚胎在保持移液器上。

专注于佐纳佩普鲁西达，使移液器和爆震都在同一焦点平面上。切换到激光目标，将激光笔定位在内细胞质量的对面。用两到三个激光脉冲钻取佐纳佩普利达，然后轻轻地将活检移液器压在佐纳佩普鲁西达上，使介质通过突破口吹出，将营养细胞从内部表面分离出来。

当营养细胞分离时，通过孔进入，用温和的吸力将七到八个营养细胞吸入活检移液器。在应用适度吸力拉伸目标细胞时，稍微向后移动活检移液器，将激光引导至吸气细胞的最薄部分。在细胞之间的交界处发射两到五个激光脉冲，将目标细胞与胚胎体分离。

当营养球菌片段与爆震分离时，将片段释放到远离囊肿的同一活检滴中，以防止片段被吸回活检移液器中。从保持移液器中释放爆震，并及时升起两个移液器，以防止碎片粘在移液器上。然后为质量控制目的对活检片段进行成像。

当所有胚胎都像刚刚演示的一样进行活检时，将活检盘移回层流罩，并标记后活检培养皿与夫妇 ID 和每个滴与胚胎和循环 ID。当有目击证人在场的情况下，用干净的IVF介质冲洗胚胎，将胚胎移动到其在活检后盘中的相应下降。然后将活检后盘放在37摄氏度、6%的二氧化碳和5%的氧气培养箱中。

在证人在场的情况下，在室温下在层流罩内，用永久的、无毒的标记标记 PCR 管。用活检胚胎 ID 标记 60 x 15 毫米管培养皿的盖子，并在该盘中加入两滴 10 微升活检洗涤溶液。在立体显微镜下，用活检洗涤溶液从管盘的第二滴中，用活检洗涤液来放置 140 微米脱液器，以可视化营养球状片段。

轻轻释放一些活检洗涤溶液，在营养球片碎片上，将碎片加载到剥离移液器中。将碎片移动到活检洗涤溶液的第二滴，并小心冲洗组织两到三次。使用装载溶液将营养球状碎片转移到贴有适当标记的 PCR 管的底部，注意避免用剥离移液器的尖端接触管壁。

当所有碎片都添加到它们的管子中时，在一个小型离心机中旋转所有管子几秒钟，以沉淀碎片。然后将样品储存在零下20摄氏度，直到被运到推荐基因实验室进行测试。在30分钟内的营养细胞活检，标记一个玻璃化板与病人的详细信息和必须玻璃化的囊肿的ID。

使用特殊的耐低温冷冻棒，用患者的姓名、夫妻身份证、将加载到其上的胚胎的 ID 以及手术日期来标记玻璃化支架。在室温下，为每种将进行玻璃化的气囊分配 300 微升的平衡溶液，并在有目击证人在场的情况下，使用 300 微米剥离移液器将爆炸囊移入一卷平衡溶液中。将防爆液留在平衡溶液中 13 至 15 分钟。

在卷的初始收缩后，将观察到逐渐的重新膨胀。在平衡结束时，在玻璃化板的第二孔中加入300微升的玻璃化溶液，并将完全重新膨胀的爆炸囊液转移到玻璃化溶液中一分钟。在孵化结束时，冲洗囊肿以稀释平衡溶液，并在有目击者在场的情况下，将爆炸囊加载到玻璃化支撑上。

去除多余的玻璃化溶液。一个微妙的溶液膜应该围绕爆炸。将玻璃化支架插入液氮中，并大力移动支架，以降低靠近试样形成气泡的风险。

然后，当玻璃化支撑仍浸入液氮中时，将保护盖放在支撑上。在这一具有代表性的两年期间进行的1 544次营养细胞活检程序中，每个手术进行1至4次爆震活检，每个程序3至22分钟。在这些图中，显示了每个操作员在研究三个月时进行活检的均值，平均总值为 8.24 分钟。

获取每个活检片段的图像以用于质量控制，以评估无定论诊断的原因是否与片段的尺寸和/或质量、管材或遗传实验室中样品处理中的一些问题有关。在这项研究中，572个欧倍体胚胎在诊断出后被加热接受胚胎移植。所有囊肿在30分钟内全部发生，2.4%的囊肿在31至90分钟内不重新膨胀，4.9%的囊肿在重新温化后90分钟以上不重新膨胀。

特别是对于质量差和/或第七天爆震，活检和玻璃化之间的时间似乎至关重要，以实现变暖后重新膨胀。在暴露营养细胞和发射之间的交界处时，在打开 zona pellucida 时注意聚焦，并注意防止在玻璃化之前重新膨胀囊肿。另外两种胚胎活检方法也存在，两者都需要佐纳·佩鲁西达的开口和等待营养细胞的自发拱形。

这些方法比较容易，但需要更多的操作，而且更耗时。该工作流程的功效允许在IVF中实施分子技术，以尝试在胚胎移植前选择植入机率最高的胚胎。请记住，不要使用任何可能对胚胎有毒的装置或溶液，并使用无DNA材料防止DNA污染。