In Vitro Transcribed RNA-based Luciferase Reporter Assay to Study Translation Regulation in Poxvirus-infected Cells

Pragyesh Dhungel; Fernando Cantu; Candy Hernandez; Zhilong Yang

doi:10.3791/59626

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

In Vitro Transcribed RNA-based Luciferase Reporter Assay to Study Translation Regulation in Poxvirus-infected Cells

体外转录 rna 基荧光素酶记者法研究类病毒感染细胞的翻译规律

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08:58 min

May 1, 2019

DOI: 10.3791/59626-v

Pragyesh Dhungel¹, Fernando Cantu¹, Candy Hernandez¹, Zhilong Yang¹

¹Division of Biology,Kansas State University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

我们提出了一种研究 mrna 翻译调节的方案, 在天花病毒感染细胞使用体外转录 Rna 基荧光素酶报告法。该方法可用于研究 mRNA 的cis元素的翻译调控, 包括 5 '-未翻译区域 (utr) 和 3 '-utr。使用此方法还可以检查不同的翻译启动模式。

我们关于体外转录RNA的荧光素酶测定的协议有助于研究痘病毒感染细胞的转化调控。此外，Poly（A）升的定制长度允许研究其对翻译的监管影响。该技术的主要优点是，它允许研究Cis元素的翻译调控，如5'UTR和3'UTR在mRNA和广泛的翻译启动。

体外转录RNA基荧光素酶检测方法可进行定制，以纳入对盖和其他修饰的修改，并用于测试对翻译的影响。首先，设计前进和反向底转，以生成包含以下元素的 PCR 放大器，方向为 5'到 3':T7-促进器，聚（A）升，萤火虫路西加酶 ORF 在聚（A）尾称为T7_12A-Fluc，包括几个额外的核苷酸在前进底转，其次是T7-促进器聚（A）升或所需的5'UTR序列和大约20核苷酸对应于5'端的记者基因的OF。根据与报告基因的 ORF 的 5'端对应的熔化温度调整底因长度，确保底源器中的相应区域与基因的感应链相同。

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