使用无线视频-EEG系统监测侧流冲击后癫痫的放电诱发创伤性脑损伤

该协议提供了一个机会，协调研究，使用大鼠横向流体打击损伤模型创伤性脑损伤结合脑电图记录通过无线遥测。它可用于研究影响创伤后癫痫发生的因素，并测试药物干预的神经治疗潜力，这可能阻止创伤后癫痫的发展。这种方法允许对自由移动的老鼠进行长视频EEG记录，并允许在不中断EEG记录的情况下对动物进行适度操作。

演示这个程序的将是马修·麦奎尔，一个来自我实验室的医学博士学生。有关详细的外科手术，请参阅本协议随附的手稿。使用编号为 10 的手术刀刀片，通过头皮的皮肤和肌肉进行 1 1/2 至 2 1/2 厘米的中线切口。

缩回皮肤和肌肉，露出头骨，并提供一个清晰的手术场。电烧机是实现快速的出血。接下来，用手术的凝乳来剃下左侧骨的侧脊，以产生光滑、平坦的表面，使雌性Luer锁轮毂的基座与头骨齐平地休息。

在无菌盐水中，用每毫升 2.0 毫克的根霉素溶液灌溉头骨表面和周围组织，用无菌拭子中灌灌多余溶液。然后，将3%过氧化氢涂抹在头骨上，使骨骼干燥。此时，通过左皮骨创建一个直径为五毫米的颅骨切除术位点。

然后，用手术凝乳和光滑的组织钳子取出骨瓣。接下来，使用立体显微镜，轻轻去除骨骼的薄边，用光滑的组织钳子，注意不要破裂的杜拉。然后，用70%乙醇擦拭头骨，去除骨尘，使头骨干燥。

在 Luer 锁轮毂的底部边缘周围涂抹一层薄薄的氰丙烯酸酯，并将其固定到颅骨上，无需阻塞开口，也不允许胶水接触杜拉。然后，在轮毂的外基上用一层薄薄的胶水将 Luer 锁密封到位。接下来，准备一层牙科水泥，并将其涂抹在 Luer 锁毂周围和底部的头骨表面，以确保其就位。

然后，使用注射器和针头，用含有多种电解质的无菌无防腐剂溶液填充 Luer 锁毂。应在边缘顶部上方看到一个凸盐。一旦牙科水泥完全固化，停止气体麻醉，并删除大鼠从立体气框架。

将大鼠放在胸骨下液体打击伤害装置旁边的平台上。然后，将 12 厘米长的压力管固定到器件弯曲尖端的端端，另一端以两厘米的公 Luer 锁扭转接头结束。通过将大鼠头骨上的轮毂的母端连接到公连接器，将大鼠固定到设备。

反复检查动物的退出反射返回。一旦大鼠恢复戒断反射但仍是镇静的，释放设备的钟摆，导致单个20毫秒的压力脉冲并诱发伤害。然后，立即断开大鼠与 FPI 设备的连接，将其放在胸骨下，然后通过鼻锥提供补充氧气，直到自发的呼吸恢复。

请注意，呼吸暂停是受伤的预期后果。如有必要，通过袋阀面罩提供定期手动呼吸，直到大鼠开始自发地自己呼吸。连续监控，记录右反射返回的时间。

受伤后四个小时，再次麻醉老鼠，并将其放回立体定向框架，以去除Luer锁轮毂和牙科水泥。在要钻五个试验孔的每个位置，对头骨涂抹 0.5%的盐酸布利瓦卡因。然后，用手持式 0.1 毫米钻头在头骨中钻出先导孔。

接下来，固定不锈钢电极螺钉。首先，在小脑上放置一个参考螺丝钉。然后，将记录电极放在此处看到的四个位置。

一定要用70%乙醇擦拭头骨，以去除骨尘。然后，用一层薄薄的无菌骨蜡覆盖颅骨切除术，以覆盖裸露的杜拉。现在，通过将彩色编码电极导线的外露端紧密缠绕在其指定的不锈钢电极螺钉上，将电极阵列连接到五个 EEG 电极。

将电极线收集到基座下方的线圈中，用骨水泥将电线和基座固定到位。将基座保持到位，直到骨水泥固化。最后，在将动物从立体定向帧中卸下之前，将带新鲜电池的无线发射器连接到基座上。

从受伤当天开始，使用 EEG 制造商的收集软件连续录制视频 EEG，通过独特的频率将每个无线发射器连接到特定的接收器。记录每个老鼠的视频，其自己的摄像头配置为以每秒 30 帧的速度录制。手动筛选 EEG 录像，以识别定义癫痫发作活动的索引事件。

此图显示在中度 TBI 当天收集的单边间歇性增量减速。在这里，我们看到一个90秒的EEG跟踪从假操作，未受伤的控制大鼠与FFT分析2，048毫秒选定的EPOC。然后，在这里我们看到一个中度受伤的动物的EEG痕迹，这显示了间歇性的，单边三角洲减速模式和2，048毫秒选定的EPOC的FTF分析。

此图显示了在严重 TBI 当天收集的双边连续增量减速，使用相同的分析技术。在这里，我们看到一个90秒的EEG轨迹，它显示了一个严重受伤的动物的连续的双边三角洲减速模式。在这里，我们看到非惊厥电图发作活动收集三天后严重TBI。

显示手术后三天对照大鼠的数据，以及 90 秒脑电图在严重伤害后三天的跟踪，以及 2，048 毫秒选定 EPOC 的 FFT 分析。最后，这个数字显示了抽搐电图发作活动收集9天后TBI，与FTT分析从这种动物。在这里，我们还看到偶尔间歇性信号下降和电池故障导致信号丢失的代表图像。

重要的是确保杜拉不被破坏，并在颅骨切除术后保持完好无损，并确保Luer锁轮毂牢固地密封在头骨上。同样重要的是，确保电极线与放置在头骨中的记录螺钉进行良好接触。最后，确保头骨无灰尘和干燥，以确保骨水泥长期粘附在头部。