Name: 2-脱氧核苷在裸体小鼠中治疗鼠胚胎胸腺的肾下囊移植 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: 学习使用2'-脱氧鸟苷处理E18.5小鼠胸腺并进行肾下囊移植的方法。该技术可在裸鼠体内研究胸腺上皮细胞功能及T细胞成熟过程，为免疫学研究提供可靠的实验方案。

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本工作得到了暨南大学为S.J.提供的启动经费以及中国广州市科技计划项目（资助号：201704020209，授予S.J.）的支持。我们感谢Amy Botta（加拿大安大略省多伦多市约克大学生物系，邮编M3J 1P3）对稿件的校对和编辑工作。

本方案遵循暨南大学动物护理伦理委员会的指导原则。
注意：所用材料列于材料表中。
1. 分离胚胎胸腺
<ol>
	<li>实验前对所有手术器械进行高压灭菌，并用70%乙醇对实验台/超净台进行消毒。</li>
	<li>使用二氧化碳对妊娠雌性小鼠（成功交配后18.5天）进行麻醉并实施安乐死，然后用70%乙醇擦拭腹部区域。 
	注意：本实验中采用 Insm1+/lacZ 雌鼠与 Insm1+/lacZ 雄鼠进行交配。&#160;在从子宫中分离胚胎前，对每只胚胎实施经胎盘注射戊巴比妥，并在分离后进行断头处理。</li>
	<li>使用剪刀从膀胱处开始，沿子宫双角方向，在腹部剪出一个&#34;V&#34;形切口。</li>
	<li>用剪刀剪断子宫系膜以及宫颈/阴道，取出子宫并置于盛有冰冷磷酸盐缓冲液（PBS）的培养皿中，冰上保存。接着，从一侧子宫角到另一侧剪开子宫前壁，暴露包裹在蜕膜中的胚胎。用精细镊子剥离蜕膜组织，剪断脐带以释放胚胎。将所有胚胎置于新的冰上培养皿中，直至开始胸腺分离。</li>
	<li>用70%酒精擦拭一只胚胎，并将其放置于新的培养皿中。从此步骤起，确保维持无菌操作条件。</li>
	<li>用剪刀紧贴下颌处剪下胚胎头部，并用纸巾吸除血液。随后，将胚胎仰卧固定在同一培养皿中。 
	注意：我们剪取每只胚胎尾部的一小段组织，用于 Insm1 和 lacZ 基因型鉴定。</li>
	<li>用剪刀沿腋前线水平剪开胸部侧壁，然后剪开膈肌以打开胸腔。此时胸腺应可见为位于气管前方、紧邻心脏的两个白色叶状结构。</li>
	<li>将弯头镊置于胸腺后方，轻轻将胸腺剥离取出。务必检查胸腺完整性，确认其包含两个相连的叶。</li>
	<li>用1×PBS清洗胸腺，并在体视显微镜下修剪去除结缔组织和血管。</li>
</ol>
2. 分离胚胎胸腺的培养
<ol>
	<li>向24孔板的每个孔中加入500 µL培养基（RPMI1640 + 15%胎牛血清（FBS）+ 100 U/mL青霉素和100 µg/mL链霉素）。将清洗干净的胸腺组织转移至孔中，每孔放置一个胸腺。图1展示了在培养基中分离的胸腺组织。</li>
	<li>向含有胸腺组织的每个孔中加入2'-脱氧鸟苷，使其终浓度为1.25 mM。</li>
	<li>将分离的胸腺组织培养八天，每两天更换一次培养基和2'-脱氧鸟苷。</li>
</ol>
3. 在肾包膜中建立包膜下腔隙
<ol>
	<li>准备针头和剪切后的输液管（图2）：使用剪刀在头皮静脉针的管部以45°角进行斜切。</li>
	<li>称量裸鼠体重，随后通过戊巴比妥钠（1.5%）注射液按75 µg/g体重剂量进行麻醉。</li>
	<li>当捏足趾无反射时，将小鼠置于手术台上，采取右侧卧位。</li>
	<li>使用0.5%聚维酮碘棉签，从内向外对术区皮肤进行两次消毒。</li>
	<li>使用剪刀在左侧肾区（最后一根肋骨与髂嵴之间）沿脊柱方向做一5–9 mm的皮肤切口。接着剪开皮下组织和肌肉，打开腹腔，暴露肾脏。</li>
	<li>暴露肾脏后，一手用镊子将肌肉和脂肪组织从脊柱侧切口边缘提起，另一手轻轻挤压肾脏使其外露（也可用双手手指共同挤压使肾脏外露）。</li>
	<li>为确保手术过程中肾包膜保持湿润，用生理盐水（0.9% NaCl）润湿肾脏表面。</li>
	<li>在肾包膜上制造一个小切口，使用步骤3.1中准备好的针尖在肾脏右下侧轻轻划破肾包膜。切口长度应为肾脏宽度的1/2–2/3；注意不要划伤肾脏实质。</li>
	<li>将步骤3.1中准备好的输液管沿肾包膜切口插入，沿肾脏长轴方向轻柔地分离肾包膜与肾脏，直至深入肾包膜内3–4 mm。回撤输液管，即形成肾包膜下腔隙。</li>
</ol>
4. 移植小鼠胚胎胸腺
<ol>
	<li>用生理盐水将步骤 2.3 中培养的胸腺清洗两次，以去除培养基。</li>
	<li>将步骤 3.1 中准备好的带夹输液管在其与注射器连接处连接至注射器。缓慢将准备好的胸腺吸入输液管中。</li>
	<li>将带夹输液管轻轻插入肾包膜并到达肾上极。将胸腺送入肾包膜下；在缓慢撤出输液管的同时，轻柔推动注射器活塞。</li>
	<li>使用酒精灯轻微加热步骤 3.1 中准备的针头。确认整个胸腺已进入包膜下间隙后，用加热的针头烧灼切口以封闭。</li>
	<li>烧灼后，将肾脏复位至腹腔内。缝合腹膜和肌肉层。</li>
	<li>采用改良的间断垂直褥式缝合法关闭皮肤切口（至少打三个结，并剪除多余缝线）。</li>
	<li>使用聚维碘酮棉签对切口进行消毒。为缓解疼痛，术中进行氟尼辛（2 µg/g 体重）皮下注射，并在术后连续给药 3 天。</li>
	<li>在小鼠完全从麻醉中恢复之前，将其置于红外灯下保持温暖。</li>
	<li>将胸腺在受体小鼠肾包膜内保留 8 周后，取出移植的胸腺，并按照先前所述方法进行表型分析5,8,9。</li>
</ol>

<ol><li>Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+and+negative+selection+of+the+T+cell+repertoire%3A+what+thymocytes+see+%28and+don%27t+see%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don't see).</a> Nature Reviews Immunology. 14, 377-391 (2014).</li>
<li>Hogquist, K. A., Baldwin, T. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+tolerance%3A+learning+self-control+in+the+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Central tolerance: learning self-control in the thymus.</a> Nature Reviews Immunology. 5, 772-782 (2005).</li>
<li>Spits, H., Touraine, J. L., Yssel, H., de Vries, J. E., Roncarolo, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+host-reactive+and+MHC-restricted+T+cells+in+a+transplanted+severe+combined+immunodeficient+%28SCID%29+patient+suggest+positive+selection+and+absence+of+clonal+deletion%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Presence of host-reactive and MHC-restricted T cells in a transplanted severe combined immunodeficient (SCID) patient suggest positive selection and absence of clonal deletion.</a> Immunological Reviews. 116, 101-116 (1990).</li>
<li>Nagamine, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+APECED+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the APECED gene.</a> Nature Genetics. 17, 393-398 (1997).</li>
<li>Yanagihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intronic+regulation+of+Aire+expression+by+Jmjd6+for+self-tolerance+induction+in+the+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Intronic regulation of Aire expression by Jmjd6 for self-tolerance induction in the thymus.</a> Nature Communications. 6 (8820), (2015).</li>
<li>Jenkinson, W., Jenkinson, E., Anderson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+2-dGuo-Treated+Thymus+Organ+Cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures.</a> Journal of Visualized Experiments. (18), (2008).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22T-Cell+Development%3A+Methods+and+Protocols%22">T-Cell Development: Methods and Protocols</a>. Bosselut, R., Vacchio, M. S. , Methods in Molecular Biology, vol. 1323 (2016).</li>
<li>Anderson, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Projection+of+an+immunological+self+shadow+within+the+thymus+by+the+aire+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Projection of an immunological self shadow within the thymus by the aire protein.</a> Science. 298 (5597), 1395-1401 (2002).</li>
<li>Takaba, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fezf2+Orchestrates+a+Thymic+Program+of+Self-Antigen+Expression+for+Immune+Tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Fezf2 Orchestrates a Thymic Program of Self-Antigen Expression for Immune Tolerance.</a> Cell. 163 (4), 975-987 (2015).</li>
<li>Morillon, Y. M. 2nd, Manzoor, F., Wang, B., Tisch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+transplantation+of+different+aged+murine+thymic+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and transplantation of different aged murine thymic grafts.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52709(2015).</li>
<li>Caetano, S. S., Teixeira, T., Tadokoro, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+the+mouse+thymus+using+2-photon+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of the mouse thymus using 2-photon Microscopy.</a> Journal of Visualized Experiments. (59), e3504(2012).</li>
<li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+Withdrawal+I%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal+Research%22%5BJournal%5D)">Blood Withdrawal I.</a> Lab Animal Research. , JoVE. Cambridge, MA. (2019).</li>
<li>Gierl, M. S., Karoulias, N., Wende, H., Strehle, M., Birchmeier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zinc-finger+factor+Insm1+%28IA-1%29+is+essential+for+the+development+of+pancreatic+beta+cells+and+intestinal+endocrine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">The zinc-finger factor Insm1 (IA-1) is essential for the development of pancreatic beta cells and intestinal endocrine cells.</a> Genes & Development. 20 (17), 2465-2478 (2006).</li>
<li>Tao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haploinsufficiency+of+Insm1+Impairs+Postnatal+Baseline+%CE%B2-Cell+Mass%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Haploinsufficiency of Insm1 Impairs Postnatal Baseline β-Cell Mass.</a> Diabetes. 67 (12), 2615-2625 (2018).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

胚胎胸腺肾包膜下移植是研究胸腺上皮细胞功能及T细胞在体内成熟过程的重要方法。尽管已有若干关于胚胎胸腺器官培养与移植的实验研究6,7，本方案为较晚期胸腺组织的小鼠胚胎胸腺培养及肾包膜下移植提供了一种简便的替代操作流程。
本方案通过引入多项不同改进，优化了既往的实验流程6,7,10,11。首先，我们采用E18.5胚胎期的胸腺进行移植，而非以往常用的E14-E16期胸腺。其优势在于，此发育后期阶段的胸腺已具备相对成熟的胸腺结构和上皮细胞群体。尽管新生或成年小鼠也可作为成熟胸腺的替代来源，但当基因操作（如Jmjd6或Insm1基因突变）导致围产期致死表型时<sup class="xre...

胸腺是中枢免疫器官，在胸腺中，胸腺细胞经历阳性选择和阴性选择，最终发育为成熟的T细胞1,2。异常的阳性选择或阴性选择分别会导致免疫缺陷或自身免疫性疾病3,4。因此，胸腺器官移植是研究供体胸腺中T细胞选择过程的重要方法。当分析由基因突变介导的胸腺上皮细胞功能时，该方法尤为重要，因为这些基因突变会导致胚胎致死表型5。
为了研究受体T细胞在移植胸腺中的成熟过程，必须清除胸腺内供体来源的淋巴细胞。为此，通常选择胚胎第14、15或16天（E14、E15、E16）的胸腺6,7。更成熟阶段的胸腺也可通过2'-脱氧鸟苷处理有效清除供体淋巴细胞。然而，此前尚未有文献详细描述清除淋巴细胞及使用较晚阶段胸腺进行培养的具体实验方案8,9。尽管已有多个研究报道了胸腺移植的操作流程10,11，但仍需对这些方案进行进一步优化和改进。
我们的实验方案分为两个部分：（i）通过在含有2'-脱氧鸟苷的培养基中培养，从发育晚期（E18.5）胸腺中耗竭T淋巴细胞；（ii）将培养后的胸腺移植至受体。在本实验流程中，我们建立了一种简便的方法，可将较大组织（E18.5胸腺）植入肾包膜下，同时降低肾脏损伤的风险。尽管本方案聚焦于发育晚期的胸腺，但也可直接或经适当修改后用于不同发育阶段胸腺或其他类似大小组织的移植。

<table><tbody><tr><td>0.5% 聚维酮碘</td><td>上海利康消毒高科技有限公司</td><td>20171113</td><td></td></tr><tr><td>0.9% 氯化钠注射液</td><td>山东齐鲁制药有限公司</td><td>2C17112101</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 无菌注射器</td><td>Solarbio</td><td>YA1090</td><td></td></tr><tr><td>2&amp;rsquo;-脱氧鸟苷</td><td>MEC</td><td>HY-17563</td><td>溶于DMSO中配制成1M溶液，使用时按1:800稀释（终浓度1.25 mM）</td></tr><tr><td>24孔细胞培养板</td><td>Corning Incorporated</td><td>Costar 3524</td><td></td></tr><tr><td>4-0 外科缝合针带线</td><td>中国宁波成功显微外科器械厂</td><td>YY0166-2002</td><td></td></tr><tr><td>60 mm 细胞培养皿</td><td>Corning Incorporated</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>70% 乙醇</td><td>LIRCON</td><td>20181221</td><td></td></tr><tr><td>APC抗小鼠CD8a抗体</td><td>Biolegend</td><td>100711</td><td>1:100</td></tr><tr><td>弯头精细镊子，JZ 10 cm</td><td>上海医疗器械（集团）有限公司</td><td>JD1060</td><td>使用前需灭菌</td></tr><tr><td>注射用头孢美唑钠</td><td>四川禾信制药有限公司</td><td>17062111 079</td><td>6 mg溶于0.5 ml 0.9% NaCl溶液中，按7.5 μl/g体重给药</td></tr><tr><td>解剖剪刀，JZ 10 cm</td><td>上海医疗器械（集团）有限公司</td><td>JC2303</td><td>使用前需灭菌</td></tr><tr><td>胎牛血清（FBS）</td><td>GIBCO</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>精细镊子，JZ 10 cm</td><td>上海医疗器械（集团）有限公司</td><td>JD1050</td><td>使用前需灭菌</td></tr><tr><td>流式细胞仪</td><td>BD</td><td>FACSCanto II</td><td></td></tr><tr><td>氟尼辛葡甲胺</td><td>MACLIN</td><td>F810147</td><td>1 mg溶于1 ml 0.9% NaCl溶液中，按2 μl/g体重给药</td></tr><tr><td>镊子，Dumont #5</td><td>World Precision Instruments</td><td>14098</td><td>使用前需灭菌</td></tr><tr><td>红外灯</td><td>OTLAN</td><td>MT-810</td><td></td></tr><tr><td>持针器，JZ 14 cm</td><td>上海医疗器械（集团）有限公司</td><td>J32010</td><td>使用前需灭菌</td></tr><tr><td>PE抗小鼠CD4抗体</td><td>Biolegend</td><td>100511</td><td>1:100</td></tr><tr><td>青霉素-链霉素混合液</td><td>GIBCO</td><td>15140122</td><td>1:100</td></tr><tr><td>戊巴比妥钠盐</td><td>Sigma</td><td>P3761</td><td>用PBS配制成1.5%溶液，按75 μg/g体重给药</td></tr><tr><td>RPMI1640培养基</td><td>GIBCO</td><td>C14-11875-093</td><td></td></tr><tr><td>头皮静脉针</td><td>上海 kindly 医疗器械有限公司</td><td>XC001</td><td></td></tr><tr><td>弹簧剪刀</td><td>VANNAS</td><td>S11014-12</td><td>使用前需灭菌</td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>OLYMPUS</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>无菌15 cm 棉签</td><td>广州浩正</td><td>20150014</td><td></td></tr><tr><td>无菌纱布 5 cm × 7 cm-8P</td><td>广州浩正</td><td>20172640868</td><td></td></tr><tr><td>无菌PBS (1×)</td><td>GENOM</td><td>GNM20012</td><td></td></tr><tr><td>组织镊，JZ 12.5 cm</td><td>上海医疗器械（集团）有限公司</td><td>J41010</td><td>使用前需灭菌</td></tr></tbody></table>

裸鼠肾包膜下移植经2'-脱氧鸟苷处理的小鼠胚胎胸腺

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

胸腺是一种重要的中枢免疫器官，在T细胞的发育与分化过程中发挥着关键作用。胸腺移植是研究胸腺上皮细胞功能以及T细胞在体内成熟过程的重要方法。本文将介绍我们实验室所采用的实验方法：将经2'-脱氧鸟苷（用于耗竭供体淋巴细胞）处理的胚胎胸腺移植至无胸腺裸鼠的肾包膜下。该方法操作简便、效率高，无需特殊技能或设备。采用此简单方法获得的结果表明，移植的胸腺能够有效支持受体小鼠T细胞的生成。此外，本文还将进一步阐明该实验方案中的若干关键步骤。

此处展示了包含两个完整叶的 E18.5 胸腺（图 1）。此外，展示了用于剪裁形成输注管斜面的头皮静脉针（图 2）。接下来，还展示了移植至肾包膜内胸腺位置的代表性图像（图 3A），以及受体小鼠体内生长 8 周后的胸腺图像（图 3B）。为了确定 T 细胞是否在移植胸腺的裸鼠中产生，我们通过 CD4 和 CD8 抗体染色及流式细胞术分析，检测了移植胸腺和外周血中的细胞群。外周血从前文所述的眶后窦采集12。我们发现，在移植胸腺的裸鼠中，T 细胞在移植胸腺和外周血中均有生成。然而，在未移植的裸鼠外周血中未检测到 T 细胞（图 4）。为了确定 T 细胞的来源，我们采用本实验室常规使用的基因分型方法并参照前文所述方法13,<sup clas...

我们提供一种简单高效的方法，将经2’-脱氧鸟苷处理的E18.5天胸腺移植至裸鼠的肾包膜下。该方法有助于研究胸腺上皮细胞的功能以及T细胞的成熟过程。

胸腺是一种重要的中枢免疫器官，在T细胞的发育和分化过程中发挥着关键作用。胸腺移植……

胸腺移植是研究胸腺上皮细胞功能及体内T细胞成熟的重要方法。该简单高效的方案可用于分离和培养小鼠18.5天的胸腺，随后将其移植至肾包膜下。此18.5天胸腺移植方案可稍作修改，适用于其他发育阶段的胸腺移植，或类似大小的其他组织移植。此外，该操作流程非常简单。初次使用该技术时，应仔细审阅某些案例印章的细节。本操作包含一系列详细的操作步骤，通过可视化方式展示效果更佳。处死后，用70%乙醇擦拭妊娠18.5天的小鼠，并使用经高压灭菌的器械从膀胱向上沿腹部至每个子宫角做V形切口。用剪刀剪开子宫系膜以及宫颈和阴道区域，将子宫取出并置于含有冰上预冷PBS的培养皿中。从一侧子宫角到另一侧切开子宫前壁，以暴露包埋在蜕膜中的胚胎，并用精细镊子剥离蜕膜组织。剪断脐带，将胚胎释放并转移至冰上的新培养皿中。为获取第一个胸腺，用70%酒精擦拭一个胚胎，然后将其转移至新的培养皿中。断头后，将胚胎仰卧固定在培养皿中，使用无菌剪刀沿腋前线水平剪开侧胸壁。剪开膈肌以打开胸腔。胸腺应呈现为位于气管前方、紧邻心脏的两个白色叶状结构。将弯头镊子小心地插入胸腺后方，轻轻向上提起以获取组织。检查胸腺的完整性，确认其包含两个相连的叶。然后用 PBS 清洗胸腺，再使用体视显微镜去除结缔组织和血管。当所有胸腺组织收集完毕后，将每份洁净的组织转移至24孔板的各个孔中，每孔含有500 µL培养基。向每孔中加入2'-脱氧鸟苷，使其终浓度为1.25毫摩尔/升。然后将分离的胸腺组织置于细胞培养孵育箱中培养8天。在培养的最后一天，用剪刀以45度角剪开输液管部分的头皮静脉针，并确认裸鼠受体动物对足趾夹捏无反应。将小鼠置于手术台上，取右侧卧位，使用0.5%聚维酮碘棉签从内向外对左肾区域的手术部位皮肤进行两次擦拭消毒。使用手术刀在左侧肾区沿脊柱方向做一道5至9毫米长的皮肤切口，切开皮下组织和肌肉，打开腹腔。用一只手使用镊子提起暴露的肾脏脊柱侧切口边缘的肌肉和脂肪组织，另一只手轻轻挤压，使肾脏脱出。为了在手术过程中保持肾包膜湿润，用生理盐水润湿肾脏表面，并使用头皮针在肾脏右下侧约肾脏宽度的1/2至2/3处轻轻划破肾包膜。将灌注管插入包膜切口，沿肾脏长轴方向轻轻剥离肾包膜，深入肾包膜内约三到四毫米。然后撤出灌注管。将胸腺植入所创建的肾包膜下腔隙时，先用新鲜生理盐水冲洗一个培养胸腺两次，并将带夹的灌注管连接至注射器。缓慢将制备好的胸腺吸入经改造的灌注管中，然后轻柔地将灌注管插入肾包膜，直至到达肾上极。将胸腺植入肾包膜时，缓慢回撤套管，同时轻轻按压推进器。使用酒精灯轻微加热头皮针，确认整个胸腺已进入包膜下腔隙后，用加热的针头烧灼切口。将经烧灼处理的肾脏复位至腹腔，并用缝线缝合腹膜和肌肉层。采用改良的间断垂直褥式缝合关闭皮肤切口，至少打三个结，并使用聚维酮碘棉签对切口进行消毒。随后，给予小鼠皮下注射抗生素和镇痛剂，并将其置于红外灯下，密切监

renal-subcapsular-transplantation-2-deoxyguanosine-treated-murine

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

2'-脱氧核苷在裸体小鼠中治疗鼠胚胎胸腺的肾下囊移植

已提出移植分离的胰岛可能成为治疗1型糖尿病的一种潜在方法。本文介绍一种从小鼠胰腺中分离胰岛并将其移植至肾包膜下空间的方法。...

小鼠胰岛分离与肾包膜下移植方法

我们开发了用于胸腺活体成像采集的新型实验工具和方案。该技术将有助于识别胸腺内发生T细胞发育的“微环境”。...

利用双光子显微镜对小鼠胸腺进行活体成像

细胞移植是一种针对以感光细胞丧失为特征的视网膜退行性疾病的治疗策略。本文介绍一种富集可移植感光细胞并将其移植至成年小鼠视网膜下腔的方法。...

成年小鼠视网膜下移植MACS纯化的光感受器前体细胞

本报告详细描述了将不同年龄供体小鼠的胸腺移植到免疫缺陷型受体小鼠肾包膜下的操作方法。该技术旨在模拟T细胞发育及胸腺选择过程。 在体.

不同年龄小鼠胸腺移植物的分离与移植

本文描述了通过分析T细胞前体的生成动力学、表型及数量，来表征胸腺定植前体细胞的体内和体外方法。...

利用小鼠胚胎胸腺定植前体细胞的表征 体内 和 体外 检测方法

小鼠全层皮肤移植是一种研究同种免疫环境下排斥反应的成熟模型。本文中，我们将详细介绍进行BALB/c--&gt;C57BL/6全层皮肤移植的每一步操作流程。...

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我们描述了一种在NOD.SCID（NOD.CB17-Prkdcscid/J）小鼠中进行部分肝切除术（PHx）并通过脾脏移植细胞的实验方案。该方案中，首先进行切口以暴露并切除肝脏左叶，随后另作切口，用于将细胞移植至脾脏内。...

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本文介绍了一种利用超声引导将神经母细胞瘤（NB）和尤文肉瘤（ES）细胞（包括已建立的细胞系和患者来源的肿瘤细胞）注射到具有生物学相关性部位的实验方案，以建立可靠的癌症研究临床前模型。...

利用超声引导组织定向细胞植入法建立具有生物学相关性的转移性肿瘤异种移植模型

我们描述了一种用于执行的实验方案 在子宫内...

静脉内和羊膜腔内 子宫内 小鼠模型中的移植

本实验方案的目的是通过激光扫描显微镜对植入小鼠眼前房的胸腺组织中的胸腺细胞进行纵向活体实时追踪。由于角膜透明且移植物具有血管化特性，可连续记录前体细胞的招募过程以及成熟T细胞的迁出过程。...

实时 体内 通过激光扫描显微镜追踪眼前房中的胸腺细胞

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视网膜变性小鼠模型中经瞳孔引导的经巩膜下视网膜下移植术

学习使用2'-脱氧鸟苷处理E18.5小鼠胸腺并进行肾下囊移植的方法。该技术可在裸鼠体内研究胸腺上皮细胞功能及T细胞成熟过程，为免疫学研究提供可靠的实验方案。

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