突变黑色素细胞干细胞引发小鼠黑色素瘤的时空控制

黑色素瘤在全世界被广泛诊断，发病率不断增加。这些协议允许仔细控制黑色素瘤开始的早期阶段，促进研究其发展。通过控制黑色素细胞干细胞活化的时间和位置，我们有能力辨别干细胞种群内部的变化及其新菌株黑色素瘤的启动。

演示程序将是大喜姆金和卢叶安，研究生从实验室。在开始手术前两到三天，使用电动修剪器从每只麻醉的七周大小鼠的后侧皮肤上剃光。在实验当天，使用棉签在裸露的皮肤上涂抹一层薄薄的脱毛霜。

均匀涂面霜后，使用干净的棉签去除奶油，然后用湿布轻轻擦拭，去除残留的奶油。然后将每只鼠标返回到其主笼，并进行监控，直到完全恢复。对于 UV-B 辐照，用 UV-B 保护材料覆盖后层皮肤，以便仅暴露所需的区域，并用防紫外线盖覆盖 UV 室。

然后打开 UV-B 灯，在适当的实验时间内照射鼠标，然后将鼠标返回到空笼，并进行监控，直到完全恢复。要分离皮肤样本，请使用电动修剪器从安乐死辐照小鼠的后皮区域去除任何头发，并使用无绒组织轻轻刷刷裸露的皮肤以清除该区域。用锋利的剪刀在尾巴的上方做一个小切口，并将大钝剪刀插入切口，以分离次皮结缔组织。

使用锋利的剪刀，小心地沿着感兴趣的皮肤区域的边缘切割，以分离组织样本，并将切除的皮肤组织放在干净的纸巾上。然后用沉闷的钳子伸展皮肤，使皮肤粘附在毛巾上，并绷紧。所有样品都收获后，将皮肤样品和纸巾背放在紧挨着折痕的一块折叠滤纸上，注意样品光滑，不要折叠或皱褶。

用订书针合上滤纸的两侧，然后修剪纸张。然后在室温下将样品完全淹没在10%中性缓冲的甲醛中，在室温下洗涤组织3至5小时，然后用两次5分钟的洗涤在去电化水中清洗。第二次洗涤后，小心地从皮肤组织中去除任何残留物质，并修剪样品的边缘，使它们不会锯齿状。

接下来，在每个样品中进行三次下垂切口，使条带的宽度不超过 5 毫米，并进行横向切口，使样本宽度不超过 20 毫米。将含有最佳切割温度或 OCT 介质的低温模具放在纵向，并在 OCT 顶部放置四到五块皮肤。当所有碎片都到位时，使用两对细钳将每块皮肤的长边带到低温模具的底部，使样品垂直于 OCT 内，并垂直于模具底部。

然后将模具填充到第二唇的附加 OCT，然后将模具放在一块干冰的平坦表面上，使用钳子调整在转移过程中可能转移的任何皮肤片，因为块开始根据需要冻结。当小鼠在产后七周时，它们的后皮是泰源。在泰洛根期间，毛囊和黑色素细胞干细胞已知处于静止休息状态，剃须后皮肤应无显著毛长。

然而，化学脱毛可以诱导毛囊干细胞活化，在感兴趣的区域内诱导显著的头发生长。由于化学脱皮可以显著诱导毛囊和黑色素细胞干细胞的激活，黑色素瘤易发性黑色素细胞干细胞在活动状态可以形成肿瘤和显微黑色素瘤启动可以在化学脱皮后两周内观察到。UV-B辐照也可以诱导肿瘤从静态，肿瘤易发性黑色素细胞干细胞启动。

重要的是，UV-B诱导黑色素细胞干细胞从卵泡干细胞利基直接移植到卵泡表皮间。此外，UV-B可在整个室间表皮中诱导黑色素细胞干细胞原源性皮肤黑色素瘤的形成。与后皮类似，UV-B 诱导黑色素瘤的起始可以在其他皮肤区域（如耳皮）明显观察到。

事实上，与控制耳皮相比，在抗紫外线布覆盖下，暴露于UV-B的耳皮由于黑色素瘤的启动负担较高，表现出更高的色素沉着。不同剂量的UV-B对小鼠皮肤和黑色素细胞活性可能有不同的影响。因此，在开始实验之前确定和优化辐照剂量非常重要。