从前列腺癌的遗传工程小鼠模型生成肿瘤有机体

与传统细胞培养物相比，小鼠器官培养物更类似于体内细胞组织。在癌症研究中，器官比2D细胞系更模拟原始肿瘤，并可用于测试体外潜在的癌症疗法，以开发新的药物治疗。对于雄性小鼠泌尿系统进行整体提取，抓住膀胱两侧的脂肪垫，向上拉，露出睾丸。

仔细解剖每个睾丸远离泌尿生源区域的其余部分。轻轻抬起膀胱，使泌尿生源区域一起升高，露出下面的尿道。握住膀胱时，将剪刀对着背前列腺的底面，以将尿道切除。

整个泌尿生源区域将从腹腔中释放。切除泌尿生源系统后，位于泌尿生源系统后面和脊柱两侧的骨盆淋巴结将暴露。去除淋巴结定向淋巴组织下的直钳并拉起。

接下来，抓住直钳和切口的直肠，拉上直肠，解开整个结肠和小肠，寻找转移性病变的中肠淋巴结。当整个氦气被移除后，继续拉上十二指肠，露出胃。切食道完全切除胃。

如果观察到淋巴结中有任何转移性病变，请仔细解剖这些远离肠道的结，以储存在PBS中。当胃被切除后，脾脏可以从腹部的后侧收获，储存在4%的半成甲醛中。取出肝脏以储存在PBS中。

从脊柱的两侧取出肾脏以及任何含有转移性病变的肾脏淋巴结。要露出胸腔，小心地沿着肋骨笼切割隔膜。胸腔内释放的负压会暴露心脏和肺部。

向上拉胸骨，进一步打开胸腔。扫描胸腔的腹腔沿肋骨笼的转移性病变在胸淋巴结中，如果存在解剖。在仍然拿着胸骨时，切断腹骨笼以进入心脏和肺部，并拉上心脏切到肺部下方。

要完全切除心脏和肺，切断气管内所有前血管。小心地将心脏转移，而不会损坏肺组织或肺转移性病变，将其转移到 PBS 容器中。用于前列腺肿瘤的解剖，将泌尿生源区域置于解剖显微镜下。

使用一对直钳和一对弯曲钳子将泌尿生体区域翻转到其后侧表面。找到可由尿道的粉红色-红色识别的近位前列腺区域。牢牢抓住尿道，让尿生体组织用弯曲的钳子操作。

找到具有开创性的囊泡的底座，以便小心地去除。然后使用钳子的弯曲侧去除血管延迟和尽可能多的脂肪和结缔组织。在仍然牢牢地握住尿道和近角前列腺区域时，使用一把细尖剪刀将膀胱从尿道上取出。

用直钳牢牢抓住近端前列腺区域和尿道，用钳子的弯曲侧抓住前前列腺区域，将组织从膀胱和前列腺的其余部分牢牢拉开。将前前列腺组织放在PBS中，并定位腹前列腺区域。以相同方式切除腹前列腺区域。

如果横向区域可以与后侧区域区分开来，请删除两侧的侧前列腺区域。然后去除后前列腺区域，将近位前列腺区域放在4%的半成甲醛中。切碎后，将肿瘤片放入15毫升的消化缓冲液管中，在37摄氏度下进行一个半小时至两个小时的消化。

在消化结束时，通过离心沉淀消化的组织，并丢弃上流液。轻拂管子以松开细胞颗粒。将细胞重新吸收在一毫升预热的三普辛中，辅以10微摩尔Y-27632 ROCK抑制剂，在37摄氏度下5分钟。

在孵化结束时，用标准的P1000移液器尖端对组织浆液进行五次三化。将管子返回水浴，再进行五分钟的孵化和三角化。对于基质圆顶电镀洗消化的细胞在9毫升的冷介质，然后收集细胞离心。

将细胞重新用一毫升新鲜介质进行计数。数了之后，再次通过离心收集细胞。在适当的基质体积中稀释肿瘤细胞。

小心地将200微升的基质细胞溶液放入每井55摄氏度加热的六井板中。让圆顶在室温下凝固两分钟，然后将盘子倒置在 37 摄氏度的培养箱中 20 分钟。当圆顶完全凝固后，在每一井中加入两毫升前列腺有机体介质，并辅以安激素R1881和 ROCK抑制剂。

将板返回细胞培养箱。荧光解剖图像通过实体前列腺肿瘤显示绿色荧光蛋白或GP表达，表明肿瘤细胞表达Cre。来自同一动物的肝脏和肺部表现出表达GP的转移性肿瘤，证明这些肿瘤起源于原发性前列腺肿瘤。

此小鼠的骨盆淋巴结表示 GFP 而不是番茄，表示此转移性肿瘤已超过淋巴结，且未保留任何正常组织。在第一天，从实体前列腺肿瘤产生的培养小器官开始形成与番茄和GGFP表达细胞存在于肿瘤器官培养。然而，当前列腺肿瘤器官完全形成时，第七天及以后，器官表达GP，但不是番茄，表明器官起源于Cre表达肿瘤细胞，而不是正常的上皮细胞。

在由充满液体的前列腺肿瘤产生的小器官培养的第一天，番茄和GGFP表达细胞都存在于器官培养中。然而，来自充满液体前列腺肿瘤的器官在第七天及以后表达GP或番茄，表明由不表达Cre的细胞形成的器官。为了在收获前列腺组织时保持方向，请时刻注意膀胱和尿道的位置。

器官生成后可用于成像应用、分子生物学分析和药物筛选。