一种用于大分子X射线晶体学且背景散射极低的多功能样品支架

这种样品支架可用于晶体生长和收集X射线衍射数据。该样品支架专为在MX领域广泛使用的24孔板上使用而设计。非常重要的一点是，无需进行任何操作步骤。

具备此处所述这些特点的样品台此前并不存在。亲眼看到某个事物总是比仅仅阅读相关描述要好得多。通过观看视频，潜在用户可以立即理解这种新型样品台的特点与复杂细节。

首先，使用一块湿润的无绒布创建一个洁净无尘的表面。从盒子中取出一个样品架，将其黄色箔面朝上，轻轻放置在清洁的表面上，以避免背面的环烯烃共聚物（COC）箔膜受到损坏或意外穿孔。在黄色箔膜上设置结晶液滴，操作方式与常用盖玻片上的操作相同。

使用移液器轻轻滴加液滴，避免刺破或穿透铝箔。在2型和3型样品架上，建议最多滴加两滴；在1型样品架上，最多可滴加三滴。

将样品架翻转，放置在已预先涂油的24孔Linbro型培养板的一个孔腔中。利用样品架上的定位辅助结构，将其引导至最佳位置。确保样品架位置正确，以避免不必要的蒸发。

将结晶板置于透射光显微镜下，无论是否使用偏振器，均应无干扰地监测晶体生长过程。在透射光显微镜下进行冷冻保护操作。使用细针头轻轻刺穿外层 COC 薄膜。

确保内层黄色箔纸保持 untouched。穿刺位置应紧邻待操作的液滴。将一根细纸灯芯插入刺出的孔中。

小心地将灯芯向前推进，直至其接触到黄色的聚酰亚胺箔。保持灯芯与带孔箔片接触。灯芯将吸走所有多余的溶液。

完全去除液体所需的时间取决于溶液的黏度以及母液的成分。待所有液体被抽吸干净后，轻轻收回纸芯。请记住液滴的位置，因为在移除母液后该液滴可能不再可见。

使用标准移液器通过同一孔洞，借助挤出式吸头加入少量冷冻保护液。为重新封闭自愈合的环烯烃共聚物（COC）膜，用受保护的手指轻轻按压孔洞约一秒钟，然后在穿刺处滑动。轻微压力结合升高的温度有助于封闭不太大的穿刺孔。

将配体溶解于反应管中的母液，配制成所需浓度。以12,000 ×g离心10分钟，以去除不溶性颗粒。如有需要，使用温度可控的离心机。

使用长型挤出式移液枪头，将最多三微升含配体溶液轻轻加入环烯烃共聚物（COC）箔膜与聚酰亚胺薄膜之间的缝隙中；随后撤出枪头。为重新密封具有自愈性能的COC箔膜，用受保护的手指轻压穿孔处约一秒钟，然后沿穿刺路径滑动手指。将实验样品孵育一段时间，以允许物质在膜间充分扩散。

浸润时间很大程度上取决于扩散溶液及其组分的黏度。可重复进行配体浸润步骤，以依次浸润不同的配体。为减少溶剂散射，在数据收集前应去除多余的溶液。

确保光束线环境稳定且湿度受控，并处于预先设定的条件。若需在室温下进行原位衍射数据采集，使用镊子在指定位置轻轻抬起透明的环烯烃共聚物（COC）箔膜并将其剥离。随后轻轻取出样品支架，并立即将其插入预先准备好的磁性样品支架底座中。

此步骤无需使用胶水。轻轻按压，以确保样品架在底座内正确就位。对于带有可拆卸外环的样品架，握住外环并施加轻微压力，在指定的断裂点处将其折下。

样品现已准备好进行中心定位和衍射数据收集。将样品架安装到光束线测角仪上，并确保样品架位置正确。根据测角仪的几何结构，样品架可旋转至多160度，而在衍射实验过程中不会产生任何阴影。

使用纸捻轻轻接触黄色聚酰亚胺膜的背面，以去除多余的母液。样品现在已准备好进行中心定位和衍射数据收集。按照室温下的操作准备进行原位低温衍射数据收集，然后将样品浸入液氮中，并转移至与SPINE兼容的小瓶中。

样品架类型2和3的几何结构允许其转移至标准SPINE样品瓶中，可用于机器人辅助的样品装载。样品架类型1和类型2设计为可适配24孔Linbro风格板中的一个孔。每个单独的样品架在外缘两侧均设有定位辅助结构，以确保在孔边缘上的最佳定位。

使用24孔Linbro型板和1型样品架，将液滴在293开尔文温度下与500微升母液平衡。在透射光学显微镜下（无论是否使用偏振器），五小时后观察到40至50微米的晶体。将含有鸡蛋清溶菌酶晶体的样品架置于HZB-MX 14.3号光束线的湿度控制气流中。

此处显示了一张典型的衍射图像。在衍射图像上无法检测到升高的背景散射。必须避免聚酰亚胺箔的污染。

此外，准确放置样品架并小心操作晶体至关重要。样品架可用于处理极为脆弱的晶体，这是微小分子晶体学中最关键的步骤之一。使用样品架可显著降低样品被破坏的可能性。