利用视觉刺激技术评价小鼠视力

我们的协议是小鼠的视觉测试。它既坚固又易于复制。虽然有许多小鼠视觉测试可用，但即将进行的实验是测试图像形成路径的少数方法之一，而图像形成路径不是视觉反射通路。

虽然许多其他视觉行为分析需要动物手术的广泛培训，但隐约可见的技术几乎不需要实验训练。首先，使用铝制框架和 PVC 面板构建矩形开放式盖外壳，在隐约可见的视觉刺激演示期间将鼠标放在一起。铺一张纸，覆盖整个外壳地板，以确保在试验之间轻松清理。

然后，在外壳的一角添加一个不透明的避难所，入口朝向竞技场的中心，以便于进入和出口。将带广角镜头的摄像机固定到外壳旁边的桌子支架上，以便捕获鼠标的行为。接下来，在机柜顶部设置计算机监视器。

准备一个隐约的模式，使用实验软件编码一个不断扩大的黑圈。将刺激设置为以两度为视角开始，并在 250 毫秒内扩展到 50 度，并设置代码以 1 秒的间隔重复刺激 10 次。首先选择一只老鼠做实验，以及三只盲鼠，以确保对隐约刺激的反应是真正视觉引导的行为。

将健康的小鼠放在外壳中，让它在刺激开始前自由探索周围环境7至15分钟。在刺激前 10 秒，在相机上开始视频捕获。一旦鼠标离开避难所，在开放的竞技场上自由移动，开始隐约可见的视觉刺激。

最后，将鼠标放回原笼。通过喷洒 70% 乙醇喷洒墙壁和避难所，将其擦拭并更换，并在脏污时更换纸张地板衬里，为下一只鼠标清洁外壳。如果在动物转移和外壳清洁过程中移动，将避难所重新定位到相同的初始位置。

在计算机上，将 AVI 格式的每只鼠标的视频剪辑保存在不进行文件压缩的情况下，以确保在传输到分析软件期间不会丢失数据。然后，使用分析软件在刺激演示之前、期间和之后跟踪动物在竞技场上的运动。计算鼠标与避难所的速度和距离。

如果竞技场的图像因视频角度而失真，请先在计算前更正 x 和 y 协调。最后，比较即将启动的刺激开始前和之后的参数，以确定小鼠对刺激的反应。无论是通过冻结，逃离，或证明没有改变的行为。

使用具有手动跟踪功能的商业分析软件对捕获的视频剪辑进行分析。使用跟踪功能，在隐约的刺激之前、期间和之后的视频每帧中识别鼠标的位置。飞行时，速度突然加快，与避难所的距离也相应缩短。

相比之下，当老鼠结冰时，速度接近零毫米/秒。与隐约可见的控制相比，速度降低了，在此期间，到圆顶的距离没有改变。重要的是要记住，在刺激开始之前获得运动基线，或者无法确定对刺激的定量反应。

进行多项测试以进行精确视觉评估非常重要。瞳孔光反射是常用的方法之一，它确保小鼠有健康的眼睛。迫在眉睫的反应机制尚未完全了解。

这项技术可能为神经科学家探索移动物体识别和恐惧反应的机制提供机会。