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Immunology and Infection
在无脊椎动物病理学研究中发现血淋巴收集和接种转移到大黄微加分中
在无脊椎动物病理学研究中发现血淋巴收集和接种转移到大黄微加分中
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

在无脊椎动物病理学研究中发现血淋巴收集和接种转移到大黄微加分中

Full Text
7,323 Views
10:59 min
June 1, 2019

DOI: 10.3791/59899-v

Jéssica Fiorotti1, Patrícia S. Gôlo1,2, Allan Felipe Marciano1, Mariana G. Camargo1, Isabele C. Angelo1,3, Vânia R. E. P. Bittencourt1,2

1Post-Graduate Program in Veterinary Sciences,Federal Rural University of Rio de Janeiro, 2Department of Animal Parasitology,Federal Rural University of Rio de Janeiro, 3Department of Epidemiology and Public Health,Federal Rural University of Rio de Janeiro

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

对滴虫血淋巴的分析是一个重要的信息来源, 说明一些病原体是如何引起疾病的, 以及滴答声对这种感染的免疫反应。本研究旨在说明如何接种真菌繁殖和从根茎微加高的雌性中采集血淋巴。

虱子是造血的异位,红头孢菌微加,俗称牛虱对热带地区的牲畜有巨大的负面经济影响。此外,人们越来越担心环境条件恶化,以及因不当使用化学杀菌剂和虱子种群对传统寄生虫的抵抗力增加而引起的公共卫生忧虑,这刺激了对替代控制方法的研究,例如使用致病致病真菌。这些内托帕根通过它们的角质层积极感染节肢动物宿主,并殖民他们的身体。

节肢动物对真菌感染可能有不同的反应。节肢动物免疫系统分为体液反应和细胞反应。体液反应涉及血凝过程和抗菌分子的产生,而血细胞调解细胞免疫反应。

大多数关于节肢动物免疫反应的研究都报告使用昆虫,而滴答声反应仍然较少被探索。此外,病原体接种和滴答声血淋巴收集是更好的广泛技术,必须更好地了解节肢动物的免疫反应。因此,此视频地址技术-用于拍摄接种,血淋巴收集和处理。

由于滴答声血细胞收获面临一些限制,如细胞中断,低血淋巴值获得,和低浓度的恢复细胞。直接感染细胞配置和分析。滴答声收集后,洗涤女性。

使用自来水,在 500 毫升玻璃杯接收器中浸入 0.5% 次氯酸钠溶液中三分钟。在角质层卫生方面,将女性分为同质组,每组为20名女性。执行每个组的三个复制。

在接种过程中使用了代谢罗伯茨气孔。在塑料石蜡膜表面加入五微升的液体,将高毛孔悬浮液悬浮在一起。为了加快接种过程,塑料石蜡膜表面可以添加多个气泡,每个气泡对应五微升。

使用一毫米超细胰岛素注射器和0.3毫米针头将悬浮液并接种到滴答声中。在使用注射器之前,请记住从注射器中带走所有的空气。接种5微升真菌悬浮到滴答声和风度之间的虱子雌性。

针切口后,框架上可能存在少量血lymph。注意不要给空气接种。使用一毫升超细胰岛素注射器与 0.3 毫米针头耦合,用腿部大腿和女性身体之间的真菌悬浮液给女性接种。

当在腿部大腿和滴答女性的身体之间进行骨质接种时,插入针头后大腿上可能会出现少量血淋巴。注意不要给空气接种。使用有翼输液的橡胶部分设置 0.3 米机毛细管和滤清器尖端执行血氧收集。

使用 0.3 毫米针破坏女性后皮。中断后,对滴答声身体的动脉部分施加温和的压力。观察从中断站点中汇集的几乎透明的液体。

通过吸油液通过过滤尖端吸吮液体来收集血氧,并结合到有翼输液装置的橡胶部分和 0.3 毫米毛细管。在卡子的固定过程中,不要按压滴答声,因为这可能破坏中滴,污染血度。等待,直到温和的压力可以排出液体没有污染。

固定滴答声。剪一条前腿。一条或多条腿可以剪,同一条腿也可以剪一次。

对滴答声的后体部分施加温和的压力。观察切割侧的透明液体气泡,然后用毛细管收集。在调动过程中,不要按滴答声的身体,因为这可能破坏中滴和污染血红素。

等待,直到温和的压力可以排出液体没有污染。在血与升收集后,将它存入 1.5 mililits 微管中,以前填充了 30 微升蛋白酶鸡尾酒和 82 微升盐水缓冲液。在整个血与中收集过程中,将微管放在冰上。

离心样品和血细胞的软颗粒将在血淋巴离心后形成。对于血与素定量,通过计算微管内的总量并贴现蛋白酶鸡尾酒和盐水缓冲液的体积来量化获得的血与量。小心地取出上一级无细胞血压,轻轻重新悬浮细胞。

通过在纽鲍尔腔中放置10微升再悬浮的血细胞来量化血细胞。对于重新悬浮的细胞,使用了培养媒体。切割滴答声的前腿,对滴答声的后体部分施加温和的压力,观察切割部位上出现透明的液体气泡。

直接在干净的显微镜幻灯片上涂抹血降滴。之后,使用适当的方法来染色细胞。腿部大腿和滴答声女性身体之间的接种也可以损害滴答声内脏器官,如中角和麦芽管。

当滴答声中,在后血松集合的针头中断时,获得的液体是红色的,不是透明的。这表示血与福收集不正确。在这种情况下,血红蛋白应被丢弃,因为它被污染。

当虱子自然感染高负载的病原体时,或在接种病原体导致的死亡过程后的最后步骤中,也可以观察到血与活的污染。在后体收集后获得的血与量大于通过腿部收集获得的体积。尽管污染的易用性在第一个收集方法中较高。

血细胞浓度在后细胞集合中也显著增加。当正确的血细胞收集进行良好的涂片可以获得一个很好的涂片,有可能区分不同的血细胞染色后。本视频提供了有关将病原体(特别是致病真菌)接种到虱子中并收集其血淋巴素的方法的信息。

这里提出的技术需要非常低的技术资源在我们的经典步骤研究滴答声生理学,滴答声病理学和滴答声的免疫反应。正确收获节肢动物细胞和无细胞血质作用,对于为后续研究提供可靠的信息至关重要。因此,了解在执行这些技术时观察到的最常见错误也很重要。

此外,本研究的建议应确定通过变形或切割腿部收集血肢的更合适的地点,同时考虑获得的体积和污染概率的差异。

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免疫学与感染 第148期 真菌感染 滴虫血细胞 免疫反应 节肢动物 模型宿主 免疫学

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