管状结构组织工程的核心/壳印刷支架

管状结构的制造是血管网络组织工程的一种很有希望的方法，它仍然是体外厚组织培养的主要挑战之一。核心/外壳技术的主要优点是只需一步就简单生产空心丝架，缩短制造时间，并可能允许直接使用电池进行打印。制备具有适当粘弹性特性的水凝胶配方，保持核心/壳材的连续平衡流动，对于稳定脚手架的 3D 打印至关重要。

首先，用新鲜准备的水凝胶填充无菌的 5 mL 注射器。填充第二个 5 mL 注射器，配备 27 量表钝端针头，并配备新准备的交联溶液。组装芯/壳喷嘴。

插入 G27 钝端针作为核心组件，并使用螺钉固定针头。内针应从外芯壳喷嘴突出约 1 mm。将注射器与交联溶液连接到喷嘴中的 G27 针头，然后将注射器装入乙醇消毒 3D 打印机的挤出机支座之一。

将带水凝胶的注射器安装到第二个挤出机中，然后将其连接到喷嘴。使用 Luer 锁将短管连接到芯/壳喷嘴的侧 Luer 输入。小心地手动调整路线，直到喷嘴接触表面，然后将喷嘴缩回到等于外喷嘴直径的距离。

导入生成的基架 g 代码，然后按"播放"以启动打印过程。打印后，小心地用印刷基架取出基板，将辅助交联溶液倒在整个脚手架上。在室温下孵育脚手架一分钟。

要从基板上拆下脚手架，请侧拉脚手架。如果脚手架与基板粘附在基材上，请在两种材料之间插入一个锋利的边缘来分离它们。将脚手架转移到新容器。

UV 对脚手架两侧进行消毒，每侧消毒 30 分钟。然后将脚手架放入无色细胞培养基中，在37摄氏度下用5%的二氧化碳孵育脚手架至少24小时。第二天，在摄氏37度下，用0.25%的三辛从体外培养中收获胡韦克斯，五分钟。

当细胞分离时，停止用3mL新鲜细胞培养培养的酶反应，通过离心收集细胞。在含有酚红色的新培养基中重新悬浮颗粒，将细胞稀释至每毫升浓度的3.4倍至第五个内皮细胞。将细胞装入装有 27 表针的无菌 5 mL 注射器中，并在脚手架中定位入口点。

将针头与脚手架灯丝的直部对齐，以低角度小心地刺穿脚手架。确认针头位于通道的空心灯丝内，轻轻按下柱塞，将约 1-2 mL 的细胞悬浮液注入脚手架。悬架的流动应该通过半透明的脚手架可见。

当整个脚手架充满细胞悬浮液时，将脚手架淹没在新鲜的细胞培养基中，然后将脚手架返回到细胞培养箱长达 10 天。对于孵化结束时的活/死成像，使用 PBS 冲洗脚手架，并使用钝端针头小心地将活/死溶液注入脚手架。确认解决方案已填满整个脚手架，并在 37 摄氏度下放置脚手架 30 分钟。

在孵化结束时，用 PBS 冲洗脚手架，并小心地将脚手架转移到玻璃滑梯上。然后，可以在荧光显微镜下在脚手架上观察染色细胞。在刚印刷和后处理脚手架的横截面中，可以在灯丝内观察到清晰可见的空心通道。

即使像证明的37摄氏度的细胞培养基在细胞培养基中孵育了72个小时后，长丝仍然在整个脚手架长度中保留了空心结构。在这里，在脚手架内培养48小时后，对内皮细胞进行代表性活/死测定。活细胞可以通过明亮的绿色荧光信号来识别。

该技术是空心管式脚手架一步制造的基础，可使用结合在生物油墨中的电池直接打印进行升级。