Name: 原人类单核细胞的隔离、转染和文化 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: 学习从HIV感染者和健康对照者中分离、培养和转染原人类单核细胞的优化方案。该方法有助于研究单核细胞功能及其在免疫反应中的关键作用，为理解HIV相关免疫功能障碍的分子机制提供可靠技术支持。

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作者感谢HIV临床/肿瘤生物样本库核心实验室提供患者样本，以及细胞免疫代谢核心实验室提供流式细胞术分析。本项目由美国国立卫生研究院（NIH）P20GM121288和P30GM114732基金资助。

以下所述所有方法均已获得路易斯安那州立大学新奥尔良健康科学中心机构审查委员会的批准。所有血液样本均在获得知情同意后采集。
注意：整个操作过程均须在生物安全二级（BSL2）实验室的无菌条件下进行，操作生物材料时应格外小心。具体而言，每一步操作均应在生物安全柜内采用无菌技术完成。每次涉及血液、血液制品、细胞或细胞产物移液的操作后，必须在正确丢弃前，使用生物安全柜内废液容器中的10%次氯酸钠溶液冲洗所有塑料制品（即刻度移液管、移液器吸头和离心管）。
1. 通过免疫磁珠阴性选择法分离人原代单核细胞
<ol>
	<li>在四个 10 mL 的乙二胺四乙酸（EDTA）真空采血管中（每管 10 mL 血液），采集 40 mL 新鲜的人全血（来自 HIV+ 患者或健康对照者）。在生物安全柜内采用无菌操作技术，将全部 40 mL 血液转移至一个 50 mL 圆锥形聚丙烯管中。</li>
	<li>根据所选人单核细胞分离试剂盒的说明书（材料表），向血液管中加入试剂盒提供的 2 mL 单核细胞分离混合液。将试剂盒中提供的磁珠涡旋振荡 30 秒，然后向血液管中加入 2 mL。
	<ol>
		<li>若可用血液少于 40 mL，则按比例减少所加试剂用量。使用塑料 25 mL 移液管反复吹打混匀溶液，并在室温（RT）下孵育 5 分钟。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将血液混合物均分为四份，分别加入四个 50 mL 管中，每管加入含 1 mM EDTA 的无菌磷酸盐缓冲液（PBS）30 mL。使用塑料 25 mL 移液管反复吹打混匀。</li>
	<li>将各管置于磁力架上静置 10 分钟，以去除与抗体结合的磁珠。同时使用四个磁力架，每个管一个，以确保各样本的孵育和分离时间一致。</li>
	<li>将各管仍置于磁力架上，用移液器小心吸取管中心的液体成分，注意避免吸取红细胞（不超过初始体积 10 mL 的 10%），并将液体转移至四个新的 50 mL 管之一中。</li>
	<li>向每个 50 mL 管中加入 500 µL 经涡旋振荡的磁珠。使用 25 mL 移液管反复吹打混匀，并在室温下孵育 5 分钟。然后将各管放入磁力架中静置 5 分钟。</li>
	<li>将各管仍置于磁力架上，小心吸取管中心的液体成分，转移至四个新的 50 mL 管之一中。立即将每个新的 50 mL 管再次放入磁力架中静置 5 分钟。</li>
	<li>小心将各管中心的液体成分转移至四个新的 50 mL 管之一中。将所有新的 50 mL 管在 300 x g 条件下离心 5 分钟。吸除上清液，并将四个管中的细胞沉淀重悬于总共 10 mL 无菌 PBS 中。</li>
	<li>使用血细胞计数板通过台盼蓝排斥法计数细胞。 
	注：通常从 40 mL 全血中可获得 8–20 × 106 个细胞。</li>
</ol>
2. 原代人单核细胞的培养
<ol>
	<li>使用37 °C水浴，将添加了1%青霉素-链霉素（青/链）的无血清RPMI 1640培养基预热，并在生物安全柜中继续采用无菌操作技术，将分离得到的单核细胞以1 × 106 个细胞/mL的浓度重悬于该培养基中。</li>
	<li>将1 mL重悬细胞加入6孔板的每孔或35 mm培养皿中（最终细胞数量应为1 × 106 个细胞/板），置于37 °C、含5% CO2的培养箱中。静置0.5–1.0小时，使细胞贴壁。</li>
	<li>使用37 °C水浴预热热灭活（HI）胎牛血清（FBS）。向每孔中加入100 µL FBS（终浓度为10%）。向细胞中加入生长因子以促进巨噬细胞分化。
	<ol>
		<li>通过向培养基中添加25 ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）诱导巨噬细胞向M1样表型极化；通过添加50 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）诱导巨噬细胞向M2样表型极化28。 
		注意：GM-CSF和M-CSF均可促使单核细胞分化为普通巨噬细胞表型（M0），同时分别使细胞向M1或M2表型极化7,28,30。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 转染培养中的人原代单核细胞
<ol>
	<li>使用含有聚合物转染试剂的试剂盒（材料表），将miRNA模拟物、抑制剂或siRNA转染至单核细胞中。
	<ol>
		<li>根据转染试剂盒的制造商说明书（并在生物安全柜内持续采用无菌技术），首先将选定的miRNA模拟物/抑制剂或siRNA用缓冲液稀释至终浓度为1.83 µM。每转染1 × 106个细胞，准备10 µL稀释后的模拟物/抑制剂。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>取1 µL提供的聚合物加入一个新的1.5 mL微量离心管中，立即加入90 µL提供的缓冲液（每转染共得91 µL转染试剂），涡旋振荡3–5秒。</li>
	<li>将90 µL转染溶液加入含有10 µL稀释后miRNA模拟物/抑制剂或siRNA的离心管中，轻轻吹打混匀，室温孵育15分钟。</li>
	<li>将100 µL转染复合物加入铺有1 × 106个单核细胞的一孔（或培养皿）中。37 °C孵育4小时后，更换为3 mL完全培养基（含1%青霉素-链霉素和10%热灭活FBS的RPMI 1640培养基），并添加GM-CSF或M-CSF。</li>
</ol>
4. M1/M2 分化与活化
<ol>
	<li>单核细胞在接种于培养皿后立即开始分化为广谱M0型巨噬细胞。接种后的第三天，在生物安全柜内采用无菌技术操作，更换培养基为3 mL新鲜的RMPI 1640培养基（添加1%青霉素-链霉素、10%热灭活FBS，以及25 ng/mL GM-CSF以促进向M1样极化，或50 ng/mL M-CSF以促进向M2样极化）。将细胞在37 °C、5% CO2的培养箱中继续培养，自初始接种起共培养6天。</li>
	<li>为促进已启动的细胞向M1型巨噬细胞表型进一步极化，于培养第6天更换细胞培养基，加入含有5%热灭活FBS、1%青霉素-链霉素、100 ng/mL来源于E. coli的脂多糖（LPS）和20 ng/mL干扰素γ（IFN-γ）的新鲜培养基，以激活细胞。</li>
	<li>为促进已启动的细胞向M2型巨噬细胞表型进一步极化，于培养第6天更换细胞培养基，加入含有5%热灭活FBS、1%青霉素-链霉素、10 ng/mL M-CSF和20 ng/mL白细胞介素4（IL-4）的新鲜培养基，以激活细胞。</li>
	<li>24小时后，收集细胞用于RNA、蛋白质或流式细胞术分析。
	<ol>
		<li>当细胞准备收集时，用PBS在培养皿中洗涤细胞两次（室温用于RNA提取，冰上预冷用于蛋白质提取）。由于已分化的巨噬细胞已牢固贴附于培养皿表面，可直接在培养皿中裂解细胞，以获取用于RNA和蛋白质分析的样品。</li>
		<li>若需收集用于流式细胞术分析的样品，向培养皿中加入含2 mM EDTA的PBS，于37 °C孵育10分钟，轻轻刮下细胞，并将悬液收集至1.5 mL微量离心管中，随后按照标准操作流程进行后续处理。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. 流式细胞术
<ol>
	<li>用 PBS 清洗细胞，以去除培养基。离心收集 100,000 个细胞（每种流式细胞术条件），并将细胞沉淀重悬于含有 2 µL 人源 FcR 结合抑制剂的 100 µL PBS 中。室温孵育 15 分钟。</li>
	<li>加入 50 µL 染色缓冲液和适量推荐的抗体（此处使用 CD80、CD83、CD163 和 CD209）。</li>
	<li>轻轻混匀，在 4 °C 避光孵育 30 分钟。</li>
	<li>用 PBS 洗涤两次，将染色后的细胞重悬于 150 µL PBS 中，然后上机进行流式细胞仪检测。</li>
</ol>

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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本方案展示了利用HIV感染者的原代细胞作为研究单核细胞和巨噬细胞的模型。接受cART治疗的HIV+患者可长期携带病毒，且可能伴有其他与免疫系统受损相关的共感染。为了研究HIV慢性感染状态下免疫调节的变化，细胞直接取自患者。由于已证实miRNA在细胞发育和分化过程中发挥重要作用，本方案重点在于调控这些原代细胞中miRNA的表达（图2、图3、图4）。采用相同的操作流程，该方案对siRNA同样具有良好的效果（图3、图4）。鉴于成熟巨噬细胞具有潜在的吞噬活性，除设置空白对照和乱序siRNA对照外，还使用了一种对照（在图3和图4中表示为siR*或miR*），即在该对照中省略转染试剂。实验数据证实，转染试剂对于si...

人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）感染会导致严重的免疫功能障碍，从而引发机会性感染和获得性免疫缺陷综合征（AIDS）。尽管接受cART治疗的HIV感染者通常表现为病毒载量较低和CD4+ T细胞计数正常，但这些个体的免疫系统功能仍可能受损，导致免疫反应异常，这与癌症发生风险增加相关1。目前，接受cART治疗的HIV患者中免疫功能障碍的机制仍 largely 未知。因此，对患者来源的免疫细胞进行表征，并研究其生物学特性与功能，是当前HIV研究的关键组成部分。
单核细胞和巨噬细胞是免疫反应的关键调节因子，在HIV感染中发挥着基础性作用2,3,4,5。巨噬细胞具有异质性和可塑性，通常可分为经典活化型（M1）和替代活化型（M2）。尽管在设定实验条件时这种分类是必要的，但巨噬细胞的极化状态可被多种细胞因子逆转6,7,8,9。尽管已有若干研究探讨了HIV感染对单核细胞和树突状细胞的影响，但单核细胞介导的免疫应答在分子层面的细节仍 largely 未知6,7,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19。在调控免疫细胞功能的诸多因素中，microRNA（miRNA）是一类短链非编码RNA，可通过转录后机制调控基因表达，已被证实参与调控多种重要细胞通路（如生长、分化、发育和凋亡）20。这些分子被描述为调控巨噬细胞功能极化所必需的转录因子的重要调节因子21。已有研究探讨了接受cART治疗的HIV感染者单核细胞中miRNA的潜在作用，但该领域仍需大量深入研究22,23,24,25,26。本文介绍了一种优化的方法，用于将miRNA和siRNA转染至来自HIV感染者及健康对照者的原代人单核细胞中。
本方案依赖于 commercially available 试剂和试剂盒，因为在处理临床样本时，技术流程的一致性有助于消除不必要的实验变量。此外，本方法提供了一些重要提示（例如接种的细胞数量，或使用无血清培养基进行短时间孵育以促进细胞贴壁）。另外，本方案中使用的极化条件源自已发表的研究27,28,29。

<table><tbody><tr><td>0.5M EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>BD Vacutainer 塑料采血管（含K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;EDTA）</td><td>BD Biosciences</td><td>366643</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant 染色缓冲液</td><td>BD Horizon</td><td>563794</td><td>流式细胞术</td></tr><tr><td>CD14 PerCP</td><td>Invitrogen</td><td>46-0149-42</td><td>流式细胞术-偶联抗体</td></tr><tr><td>CD163 BV711</td><td>BD Horizon</td><td>563889</td><td>流式细胞术-偶联抗体</td></tr><tr><td>CD209 BV421</td><td>BD Horizon</td><td>564127</td><td>流式细胞术-偶联抗体</td></tr><tr><td>CD80 FITC</td><td>BD Horizon</td><td>557226</td><td>流式细胞术-偶联抗体</td></tr><tr><td>CD83 APC</td><td>BD Horizon</td><td>551073</td><td>流式细胞术-偶联抗体</td></tr><tr><td>Easy 50 EasySep 磁力架</td><td>StemCell Technologies</td><td>18002</td><td></td></tr><tr><td>EasySep 直接人单核细胞分离试剂盒</td><td>StemCell Technologies</td><td>19669</td><td></td></tr><tr><td>EIF4EBP1 单克隆抗体</td><td>Cell Signaling</td><td>9644</td><td>用于Western blot的单克隆抗体</td></tr><tr><td>EIF4EBP1 siRNA</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-29594</td><td></td></tr><tr><td>经热灭活的定义型胎牛血清</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.03HI</td><td></td></tr><tr><td>Gallios 流式细胞仪</td><td>Beckman Coulter</td><td>B43618</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH 单克隆抗体</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-47724</td><td>用于Western blot的单克隆抗体</td></tr><tr><td>HuFcR 结合抑制剂</td><td>eBiosciences</td><td>14-9161-73</td><td>流式细胞术-封闭缓冲液</td></tr><tr><td>Kaluza 分析软件</td><td>Beckman Coulter</td><td>B16406</td><td>用于分析流式细胞术数据的软件</td></tr><tr><td>来自 &lt;em&gt;Escherichia coli&lt;/em&gt; O55:B5 的脂多糖</td><td>Sigma</td><td>L4524</td><td></td></tr><tr><td>miRCURY LNA microRNA 模拟物 hsa-miR-146a-5p</td><td>Qiagen</td><td>YM00472124</td><td></td></tr><tr><td>MISSION miRNA 阴性对照</td><td>Sigma</td><td>HMC0002</td><td>与近红外染料偶联的随机序列miRNA</td></tr><tr><td>Nunc 35 mm 细胞培养皿</td><td>Thermo Scientific</td><td>150318</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>20012027</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>重组人GM-CSF</td><td>R&amp;D Systems</td><td>215-GM-050</td><td></td></tr><tr><td>重组人IFN-&amp;gamma;</td><td>R&amp;D Systems</td><td>285-IF-100</td><td></td></tr><tr><td>重组人IL-4</td><td>R&amp;D Systems</td><td>204-IL-010</td><td></td></tr><tr><td>重组人M-CSF</td><td>R&amp;D Systems</td><td>216-MC-025</td><td></td></tr><tr><td>含L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基</td><td>Corning</td><td>10040CVMP</td><td></td></tr><tr><td>随机对照siRNA</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-37007</td><td></td></tr><tr><td>Viromer Blue 转染试剂盒</td><td>Lipocalyx</td><td>VB-01LB-01</td><td></td></tr><tr><td>WST-1 细胞增殖检测试剂</td><td>Roche</td><td>5015944001</td><td>比色法检测细胞活力</td></tr></tbody></table>

原代人单核细胞的分离、转染与培养

Isolation, Transfection, and Culture of Primary Human Monocytes

尽管20世纪90年代中期已引入联合抗逆转录病毒治疗（cART），人类免疫缺陷病毒（HIV）仍然是一个重大的健康问题。虽然抗逆转录病毒治疗能有效降低全身病毒载量并恢复正常的CD4+ T细胞计数，但它并不能重建完全功能正常的免疫系统。接受cART治疗的HIV感染者可能出现免疫系统功能障碍，其特征包括免疫系统持续活化、免疫细胞过早衰老或慢性炎症。这些状况，加上与HIV感染相关的共病因素，使疾病变得更为复杂，难以在细胞和动物模型中准确重现。为了研究这些患者体内免疫功能障碍背后的分子机制，本文介绍了一种在体外培养和操作人原代单核细胞的实验体系。具体而言，该方案适用于培养和转染来自接受cART治疗的HIV感染者以及HIV阴性对照者的原代CD14+单核细胞。该方法包括单核细胞及其衍生巨噬细胞的分离、培养和转染。尽管使用了商业化试剂盒和试剂，本方案还提供了关键操作提示以及优化条件，以确保单核细胞在使用miRNA模拟物、抑制剂以及siRNA进行转染时能够有效贴壁并实现高效转染。

采用所述方法，分离了来自 HIV 感染个体和健康供体的原代人单核细胞。本文展示的所有数据均来自正在接受 cART 治疗且病毒载量较低（<20 拷贝/mL）或检测不到、CD4+ T 细胞计数正常的 HIV+ 受试者。细胞分离后立即进行染色，并通过流式细胞术分析以确认细胞群体的纯度。结果显示，>97% 的细胞 CD14 染色呈阳性（数据未显示）。对于巨噬细胞的极化，采用了一项已发表的方案28。原代人单核细胞在 GM-CSF 或 M-CSF 存在下培养 6 天。在第 6 天，将细胞激活为 M1 或 M2 型巨噬细胞。激活后 24 小时，收集细胞并进行染色，用于流式细胞术分析巨噬细胞标志物。
图1展示了M1活化的对照组来源（图1A</s...

本文介绍了一种优化的实验方案，用于从HIV感染者和健康对照个体中分离、培养、转染并诱导人原代单核细胞分化。

人类免疫缺陷病毒（HIV）尽管自20世纪90年代中期引入联合抗逆转录病毒治疗（cART）以来，仍然是一个重大的公共卫生问题。

HIV 感染会导致免疫功能障碍，即使在接受抗逆转录病毒治疗且病毒不可检测的个体中也是如此。该方法可用于研究单核细胞的功能，单核细胞是免疫反应的关键调节因子。我们已优化了该技术，用于人原代单核细胞的分离、培养和转染。我们采用此方法来研究 HIV 感染个体中免疫功能障碍的分子机制，但该方法也可应用于涉及单核细胞的其他任何免疫学研究。如果您是首次处理人血样本，请务必遵循适当的生物安全规程，并将所有样本视为可能具有传染性的材料。在四个 10 毫升的 EDTA 真空采血管中收集共计 40 毫升新鲜人全血后，应在生物安全柜中采用无菌操作技术，将全部血液转移至一个 50 毫升的圆锥形聚丙烯管中。根据所选人单核细胞分离试剂盒的说明书，向血液样本管中加入2毫升试剂盒中的单核细胞分离混合液，并将试剂盒中的磁珠涡旋振荡30秒。向血液中加入2毫升磁珠，使用25毫升血清移液管小心地将磁珠与血液混匀。室温孵育5分钟后，将血液平均分至四个50毫升离心管中，每管加入30毫升含1毫摩尔EDTA的无菌PBS缓冲液。使用塑料25毫升血清移液管再次混匀，并将试管放入磁力架中。10分钟后，用移液管从每根试管中央吸取液体，注意吸取的红细胞体积不得超过1毫升，然后将管内液体转移至四个新的50毫升试管之一中。向每根试管中额外加入500微升经涡旋混匀的磁珠，并轻轻混匀细胞悬液。将试管重新放入磁力架中静置5分钟，然后小心地将每支试管中央的液体转移至四支新的50毫升离心管中。待所有细胞悬液均完成转移后，将每支新的50毫升离心管再次放入磁力架中静置5分钟，随后小心地将管内液体转移至第三组四支新的50毫升离心管中。接着通过离心收集细胞，并将全部四个细胞沉淀重悬于总共10毫升的无菌PBS中，用于细胞计数。计数后，在生物安全柜中，将分离得到的单核细胞重悬于含有抗生素、37摄氏度的无血清RPMI 1640培养基中，细胞密度为每毫升1×10⁶个细胞，并将1毫升重悬细胞接种至35毫米培养皿中。随后将培养皿放入细胞培养箱中孵育30至60分钟，使细胞贴附于培养皿底部。为诱导获得类似M1表型的巨噬细胞，向每个培养皿中加入100微升含有25纳克/毫升GM-CSF的胎牛血清。为了诱导巨噬细胞呈现类似M2的表型，向每孔中加入含有50纳克/毫升M-CSF的100微升胎牛血清。对于使用microRNA模拟物、抑制剂或小干扰RNA转染单核细胞的操作，按照转染试剂盒的制造商说明书，将选定的RNA用缓冲液稀释至终浓度为1.83微摩尔，在每次转染体积为1×10⁵个细胞时，使用10微升稀释后的模拟物或抑制剂。为配制转染试剂，取1微升提供的聚合物加入1.5毫升微量离心管中，并立即加入90微升试剂盒提供的缓冲液，以获得每次转染所需的总共91微升试剂。将试剂涡旋振荡3至5秒，然后用移液器将90微升转染溶液加入含有10微升稀释RNA的离心管中。轻轻混匀后，室

isolation-transfection-and-culture-of-primary-human-monocytes

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科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

原人类单核细胞的隔离、转染和文化

在本视频中，我们演示了通过免疫磁珠负向分离法从全人血中分离单核细胞。分离得到的单核细胞可用于后续下游分析。...

通过免疫磁珠阴性选择法从全血中分离单核细胞

本视频展示了将原代单核细胞诱导分化为巨噬细胞的过程。可通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）将原代人单核细胞分离并诱导为类似M1型的促炎表型，或通过巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）诱导为类似M2型的抗炎表型。...

原代单核细胞体外培养及向巨噬细胞的分化

单核细胞来源的巨噬细胞是先天免疫系统的重要细胞。本文介绍了一种易于使用的 体外...

一个 体外 研究人类巨噬细胞分化与极性异质性的模型

通过流式细胞术分析纳米颗粒与免疫细胞特定亚群的相互作用。...

通过流式细胞术检测荧光纳米颗粒与主要免疫细胞亚群的相互作用

我们介绍一种简单高效的生成人巨噬细胞的方案。通过双密度梯度离心法处理血沉棕黄层，分离单核细胞，随后在特氟龙涂层细胞培养袋中将其分化为巨噬细胞。该方法可最大化巨噬细胞产量，并便于后续实验的细胞收获。...

通过双梯度离心法分离人单核细胞及其在特氟龙涂层细胞培养袋中向巨噬细胞的分化

双梯度离心法，人单核细胞，巨噬细胞分化，特氟龙涂层培养袋，细胞培养，外周血单个核细胞，Ficoll密度梯度，Percoll梯度，单核细胞分离，巨噬细胞

本文介绍一种从小鼠异质性骨髓中大量生成单核细胞的实验方案，适用于转化医学研究。与其他方法相比，该新方法通过避免使用高梯度磁性细胞分选（MACS）等昂贵技术，减少了实验动物的使用数量并降低了成本。...

小鼠骨髓来源单核细胞的分离与静脉注射

本文介绍了一种巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）诱导分化的人单核细胞来源巨噬细胞的细胞培养方案。该方案采用单核细胞的冷冻保存，并将其大规模分化为巨噬细胞。随后，收获的巨噬细胞可根据实验需求以特定的细胞密度接种至培养孔中进行后续实验。...

集落刺激因子培养分化的人单核细胞来源巨噬细胞

本研究比较了两种不同的人单核细胞分离方法，以获得 体外...

通过成像流式细胞术表征人单核细胞来源的树突状细胞：两种单核细胞分离方案的比较

本方案描述了从人血液样本中获取单核细胞来源的巨噬细胞（MDM）的工作流程，一种在不损害细胞活力和行为的前提下，将炎症性半胱天冬酶双分子荧光互补（BiFC）报告系统高效导入人MDM的简便方法，以及一种基于成像的技术，用于在活细胞中检测炎症性半胱天冬酶的激活。...

人单核细胞来源巨噬细胞中炎症性半胱天冬酶诱导接近现象的可视化

本研究阐述了一种建立人单核细胞来源的小胶质细胞样（iMG）细胞的新方法，可用于间接评估脑部炎症。该细胞模型可能有助于针对脑部潜在炎症及相关神经精神疾病的研究。...

用于逆向转化脑科学研究的人源血液诱导小胶质样细胞的构建

我们描述了一种评估药物制剂能否将未经处理的单核细胞来源的树突状细胞转化为耐受性树突状细胞的方法 体外...

一种简单高效的人CD14+单核细胞诱导耐受性树突状细胞以筛选免疫调节剂的方法

学习从HIV感染者和健康对照者中分离、培养和转染原人类单核细胞的优化方案。该方法有助于研究单核细胞功能及其在免疫反应中的关键作用，为理解HIV相关免疫功能障碍的分子机制提供可靠技术支持。

原代人单核细胞的分离、转染与培养

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