2019年10月20日
本方案描述了一种从小鼠体内分离带有眼睑、眼表、前段和后段且相对完整的眼球的方法。
我们的实验室专注于眼部发育及相关疾病研究。本方案描述了一种从解剖后的小鼠头部依次去除颅骨和眶骨的方法,使眼睑、眼表、晶状体以及视网膜完整保留在同一组织块中。该技术将有助于对眼表教学感兴趣的临床眼科医生。我是Dianlel Guo,将介绍此技术中可能遇到的难点,即在解剖面部骨骼时如何避免损伤眼球。该解剖方法的主要优势在于能够很好地保持眼表上皮层的完整性,使得眼表不同区域可在单一切片中通过组织学或免疫染色进行观察。务必彻底清除软组织上残留的小骨片和碎屑,否则会在组织切片中造成划痕或伪影。在处死小鼠后,使用一把直剪刀切断头部,并从顶间骨前端开始沿矢状中线向鼻部方向将头部分为左右两半。将每半个头部分别放入洁净的培养皿中,用锋利的剪刀剪除下颌和舌头。在视交叉位置之前切断视神经,使其与脑组织分离,并清除附着于颅骨壁上的所有脑组织,包括嗅球。此时,剩余组织应包含与眼球相连的所有颅骨和眶骨结构。用PBS清洗剩余部分,以去除血液和毛发碎屑。将组织置于含有4%多聚甲醛的50毫升离心管中,在室温下旋转固定,进行预固定处理。预固定完成后,迅速用PBS冲洗解剖后的头部组织三次,进一步去除断裂的毛发和固定剂残留。将组织转移至直径10厘米的培养皿中,按照文本方案中图一指示的平面将颅骨切割为三个部分。眼球及其眼眶隐藏于筛骨、额骨和上颌骨下方的颅骨中部。使用两把4号直镊小心剥离筛骨,充分暴露额骨和上颌骨。随后,将颅骨表面按解剖区域划分为四个部分。将弯镊尖端水平插入各个区域,依次去除上颌骨和额骨。此后,位于其下的泪骨和颧骨将被暴露出来。去除这两块骨骼及其周围与眼球相连的皮下肌肉和脂肪组织。将带有眼睑和皮肤的眼球修剪成体积较小的方形组织块,以减少组织体积,并便于包埋时组织的定向。将眼球及相关组织重新放入4%多聚甲醛中,于4°C继续固定过夜。
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本方案重点介绍一种在保留眼睑和眼表完整的情况下分离小鼠眼球的方法,以保持其解剖结构,适用于解剖学研究。该技术特别适用于希望在不损伤 delicate 组织的前提下检查眼表的眼科医生。
保持眼表上皮层的完整性,可实现对疾病模型中睑结膜、球结膜和角膜上皮的平行评估。该方法通过允许对相互关联的组织中的致病性变化进行同步评估,有助于机制层面的风险排除。在需要完整组织结构进行组织学和免疫染色分析的临床前研究中,该方法可提高预测的可信度。
该方法通过实现完整组织样本的制备,用于组织学和免疫染色检测,支持假设验证与通路解析,从而整合到发现生物学工作流程中。