免疫球蛋白 G N-甘油分析通过超高性能液色谱分析

超高性能液相色谱是建立对IgG n-甘油进行精确分析的技术，由于其灵敏度，并且具有提供甘油特定信息的能力。血浆中蛋白质的测量可能很吸引人。在医学。

也与糖基中的 IgG 和含有种群的此类和生物相关。你知道不纯状态用于测试甘油中的 IgG。实际上，它可以测试蛋白质的n-甘丹。

这需要在两种纯状态的交界蛋白中应用于蛋白质 OR 实验过程相对简单，而实验过程需要标准化。端到端的实验过程需要三天时间才能操作，实验步骤需要记忆才能掌握实验技能。要准备样品，请解冻冷冻血浆样品。

然后，在80倍G下离心10分钟。将蛋白质G单片板留在室温下30分钟。将 100 微米的样品转移到两毫升收集板的每个井中。

将超纯水添加为一个控制样品。用一个 X PBS 按体积比稀释样品 1 到 7 个体积。用 200 微升超纯水清洁 0.45 微米亲水多丙烯滤板。

重复清洁两次。将稀释的样品转移到过滤板中，并使用压力为 266.6 至 399.9 Pascal 的真空泵将样品过滤到集体板中。要准备蛋白质G单片板，首先丢弃储存缓冲液。

用两毫升超纯水清洁单片板，一个 X PBS 的两毫升，一毫升 0.17 摩尔甲酸，两毫升 10 X PBS，以及两毫升一个 X PBS 的两毫升。使用真空泵清除以下液体。使用多通道移液器，将过滤的样品转移到蛋白质 G 单片板中，用于 IgG 结合和清洁。

然后，添加两毫升一个 X PBS 来清洁单片板。使用真空泵拆下 PBS，再重复清洁两次。用一毫升0.17摩尔甲酸过滤IgG，用真空泵将样品过滤到收集板中。

然后，在收集板中加入170微升的一个碳酸氢铵摩尔铵。使用 280 纳米最佳波长的吸收光谱仪检测 IgG 浓度。将提取的IgG放入烤箱中，在60摄氏度下干燥3小时。

根据手稿中描述的浓度确定要观测的量，并在零下 80 摄氏度中保存。收集干燥的IgG，并储存化学品，包括1.33%SDS、4%的IgGePal和5%的PBS在室温下。用250微升超纯水稀释250单位酶，以准备内多利糖酶F酶。

要使 IgG 变性，请添加 30 微升 1.33%SDS，然后通过涡流混合。将样品放入65摄氏度的烤箱中10分钟。然后，将其从烤箱中取出，让它冷却15分钟。

将 10 微升 4% 的 IgePal 添加到同一样本中，并将其放在摇晃的培养箱上 5 分钟。加入 20 微升 5 X PBS 和 30 至 35 微升 0.1 摩尔氢氧化钠，将 pH 调节至 8.0，然后通过涡旋混合。加入四微升的内糖糖酶F酶，通过涡流混合。

然后，在37摄氏度的水浴中孵育18至20小时。第二天，将释放的陀螺放在60摄氏度的烤箱中晾干两个半小时到三个小时。将释放甘油保存在零下80摄氏度，直到进一步测量。

使用 24.5 微升的 DMSO、10.5 微升醋酸、0.7 毫克的 2 个氨基苯甲胺和 6 毫克氰酸氢钠准备两种氨基苯甲酰胺标记试剂。接下来，在黑暗的房间里，添加两个氨基苯胺标签试剂的35微升，给甘油贴上标签。将标记的 glcan 转移到振荡器 5 分钟，然后在 65 摄氏度下将其转移到烤箱中 3 小时。

之后，将其转移到室温30分钟。IgG n-糖酶，我们将用标签，以便通过荧光检测检测不纯状态。预处理0.2微米GHP滤盘，200微升70%乙醇，200微升超纯水，200微升96%亚硝酸盐在4摄氏度。

然后，使用真空泵清除废物。为了净化两种标有甘油的氨基苯胺，在样品中加入700微升100%乙酰胺，并将其转移到摇摇培养箱中5分钟。在摄氏4度下以134倍G离心5分钟。

将超滤板转移到 0.2 微米 GHP 滤芯板上两分钟，并使用真空去除滤芯。在4摄氏度下用200微升96%乙酰胺清洗两种标有甘油的氨基苯胺，并使用真空泵清除滤液5至6次。用100微升超纯水三次标记两个氨基苯胺。

将标有甘油的两种氨基苯胺转移到烤箱中，在60摄氏度下干燥三个半小时。将标有 n 甘油的甘油保存在零下 80 摄氏度，直到进一步测量。首先，打开软件来控制移动阶段。

用 50%溶剂 B 和 50%溶剂 C 清洗 UPLC 仪器，流量为每分钟 0.2 毫升，使用 30 分钟。然后，用25%的溶剂 A 和 75%的溶剂 B 以每分钟 0.2 毫升的流速洗涤 20 分钟。然后，添加每分钟 0.4 毫升的流速。

以 2 比 1 体积比的体积，用 25 微升的混合物（100%乙酰酸酯和超纯水）溶解标有 n-甘油的甘油。然后，在4摄氏度下以134次G离心5分钟，并使用干管将10微升的超高升装入 UPLC 仪器。以每分钟 0.4 毫升的流速分离标签的 n-甘油，线性梯度为 75%至 62%乙酰三叶草 25 分钟。

然后，在 60 摄氏度的 UPLC 上执行由德克斯特校准梯甘肽柱进行分析。分别检测330纳米和420纳米的X引文和发射波长的n-甘油荧光。如图所示，根据峰值位置和保留时间，将IgG n-甘油分析为24个初始IgG甘油峰值。

通过质谱检测，n-甘油结构有24种类型可供选择。为了检验该方法的可重复性和稳定性，对标准样品进行了六次并行测试。比例相对较小的甘油峰表现出超过10%变异系数的高测量误差。

在这件作品中，重要的是要形成IgG n-糖原结构的确立，特别是对于建立终端来说，代替3.3IgG n-糖酶的发现是IgG的重要性。甘油来自已知是不同的。随着甘油原体学的发展，结合甘油来探索信息，这样它就可以作为今天诊断的潜力。

在此技术开发之后，它提供了一种新的途径来探索