2020年1月8日
提出一种通过手术切除所有眶部泪腺在兔体内诱导慢性干眼病的新型方法。该方法不同于以往报道的方法,可产生稳定且可重复的水样缺乏型干眼模型,非常适合用于研究泪液生理学与病理生理学以及眼表治疗药物。
我们在兔子中进行完整泪腺切除术的一种安全、可重复的方法,可产生稳定的一过性干眼状态,有助于研究疾病生理学机制以及治疗干预措施的有效性。切除眶部和睑部泪腺可显著提高所诱导干眼模型的一致性和严重程度,并将泪液分泌的代偿性变化限制于眼表组织。位于眶内部分的泪腺组织毗邻一个较大的血管结构。
熟悉解剖结构将极大有助于手术切除,并可帮助预防手术并发症。泪腺系统的切除是一种中等复杂程度的技术,涉及多个切口位置和手术层面,最宜通过视觉演示进行学习。首先行双侧瞬膜切除。
使用微量移液器将 25 微升不含防腐剂的 1% 利多卡因滴入眼内,并在眼睑之间置入开睑器。用 0.3 眼科镊夹住瞬膜顶端,将其牵拉覆盖于角膜表面。然后,使用 26 号针头向结膜下间隙注射约 0.3 毫升含 1:100,000 肾上腺素的 1% 利多卡因。
这将在瞬膜上形成一个中等大小的水疱。取下开睑器,等待约五分钟,使利多卡因和肾上腺素发挥作用。在此期间,对另一只眼睛执行相同的步骤。
准备就绪后,更换金属开睑器,用镊子夹住并将其瞬膜拉伸覆盖于角膜表面,再用斜视剪在瞬膜基底部将其剪除。移除金属开睑器,并在角膜表面涂抹局部抗生素软膏。为切除眶上泪腺(OSLG),使用2%利多卡因与1:100,000肾上腺素按1:1比例混合液加0.5%布比卡因,对切口部位进行浸润麻醉。
然后,使用连接至电外科设备的科罗拉多针,沿手术标记线进行皮肤切口。通常切割和凝固的设置范围为10至15单位,但可根据临床反应进行调整。在皮肤切口处施加对向张力,以分离组织并暴露下方的额肌-皮下肌纤维。
然后,对眼球施加内侧压力,以帮助观察眼睑下泪腺(OSLG),该腺体表现为位于额皮肌纤维内侧或深部的隆起组织。如有必要,将肌纤维移向一侧以暴露其下方的切迹,使用带齿镊子与囊膜剪轻轻牵拉并剪开覆盖在OSLG表面的纤维囊。用镊子夹住OSLG腺体组织,采用交替握持的手法,将其轻柔地经由上方切迹拉出。
使用囊膜切开剪剪断细小的纤维束,使腺体从眼眶内的位置松解。腺体移除后,使用科罗拉多针进行充分的电凝止血,使组织碳化,并尽可能深地在切迹内截断腺体。此碳化区域后续可作为切除睑部上泪腺(PSLG)时的确认标志。
为取出PSLG,使用棉签将上眼睑外翻,使PSLG的膨大端可见。用有齿镊夹住PSLG,同时使用囊膜切开剪在其基底部周围剪切,将其从下方的睑板分离,并从眼睑表面拉出。使用单极电凝控制中度出血。
在分离的组织平面持续施加牵引力以进行解剖,从而可同时移除上泪腺(SLG)的主要排泄管。切除较大的下泪腺(ILG)时,使用科罗拉多显微解剖针切开并分离下眼睑降肌、颧肌的颧部或唇部、眼轮匝肌以及皮肤。使用单极电凝保持止血。
当切口沿皮肤标记逐层深入时,注意观察颧骨或咬肌浅部表面筋膜层的光泽。此时应保持在该组织平面内,并向上延伸至眶缘。辨认并切开包绕ILG的囊膜,随后辨认出ILG的浅褐色组织。
仅可见ILG头部的前部,但可沿其内侧追踪,因其从颧弓下方穿过并移行为尾部。使用肌腱剪沿下眶缘剪开眶隔,暴露ILG尾部更靠后的位置。一旦确定组织平面,即沿整个切口线向后延伸解剖。
操作时需格外小心,避免损伤颈动脉分支为ILG提供的血液供应。完全暴露整个ILG后,将其切除。若尾部终止于眼后角下方,请参阅论文中的切除说明。
由于其体积较大,可先将腺体切成两半,再分别移除头部和尾部。腺体切除后,使用多点间断的5-0聚对苯二甲酸乙二醇酯缝线缝合深层结缔组织平面。随后,使用0.3组织镊和持针器,以连续缝合方式用6-0聚乙醇酸交酯-910缝线缝合浅层肌肉和皮肤。
这种手术方法已成功用于诱导干眼症,且通过一系列临床和实验室指标得到了证实。在为期八周的观察期间,平均泪膜破裂时间较术前水平降低了75%以上。同样,泪液分泌试验(Schirmer's tear test)结果下降了约50%,泪液渗透压升高了10%,这些变化均符合干眼症的特征。
完整切除手术最容易在首先切除眶上泪腺的情况下进行。完全暴露所有泪腺组织边缘非常重要。
本研究提出了一种通过完全切除兔眶部泪腺来诱导慢性干眼病的新型手术方法。该方法可建立稳定且可重复的水样缺乏型干眼模型,有助于开展泪液生理学及治疗干预措施的相关研究。
通过在兔模型中实施完全性泪腺切除术建立可重复的水液缺乏型干眼模型,填补了眼科临床前研究中的一项关键空白。该模型可用于针对泪液分泌和眼表稳态相关治疗候选药物的机制性风险评估。其稳定性可持续八周,适用于新药发现和转化研究中的纵向疗效研究。
该模型适用于从靶点验证到临床前有效性测试的整个发现过程,尤其适用于靶向泪腺功能或泪膜稳定性的生物制剂和小分子药物。