杏中自体和（内）相容关系的确定结合手授、显微镜和遗传分析

这种方法有助于确定不同物种的授粉要求，并建立品种之间的不相容关系。这种方法的主要优点是，它允许在实验室条件下评估几种不相容性。避免在野外条件下进行的实验中可能发生的许多问题。

这允许识别以及将一些邪教奉献给相应的不相容组。确定品种之间的兼容性关系。这种方法也可用于确定其他果树作物（如樱桃或李子）中的自不相容性和不相容性。

首先在田野里品尝花朵。在气球阶段收集花，这相当于在BBCH尺度上为杏子的第58阶段，以避免以前的授粉。在实验室中，取出花的香，放在一张纸上，在室温下晾干。

24小时后，用细小的26毫米网对花粉颗粒进行筛分。在同一气球发育阶段，将30朵花用于每个自授和交叉授粉，并在消瘦后24小时将手枪放在水中的花束泡沫上，用油漆刷将手枪与来自同一品种的花粉进行授粉。用兼容授粉剂的花粉粉粉给每个品种的另一套手枪， 作为控制。

72小时后，从湿花店泡沫中取下手枪，将手枪固定在3:1乙醇的固定溶液中，在4摄氏度下至少24小时使用醋酸。然后丢弃固定材料并加入75%乙醇，确保样品完全浸入溶液中。样品可以储存在乙醇在4摄氏度，直到使用。

在凝固花粉发芽介质中散开用于控制授粉的相同品种的花粉颗粒，并在24小时后在显微镜下观察。用蒸馏水洗3次，每次洗涤1小时，准备显微镜手枪。最后一次洗涤后，在4摄氏度下将它们留在5%的亚硫酸钠中24小时。

然后用硫酸钠在每厘米一公斤的平方下进行10分钟的解菌，以软化组织。将自动洗除手枪放在玻璃滑梯上，用手术刀取出卵巢周围的三叶肌。然后用盖板把手枪压扁。

在准备剂上涂抹一滴黑色素，在花粉管生长过程中染色无情的沉积，并根据手稿指示用显微镜观察花粉管沿样式。使用商业工具包从春天收集的幼叶中提取基因组DNA。然后根据手稿方向组合试剂，建立PCR。

涡流混合并分配在PCR板的孔中。将 1 微升的 DNA 稀释到每个井中，并使用手稿中概述的热循环程序运行 PCR。一旦反应完成，使用毛细管电泳或阿加罗斯凝胶电泳分析结果。

毛细管电泳将 PCR 产品 1 微升添加到读卡器板的井中，以及 1 滴矿物油，以防止水蒸发。然后通过添加分离缓冲器来准备分离板。使用基因分析仪的商业软件创建新的样品板，并保存板上所有孔的样本名称。

然后选择分析方法，将两个板插入基因分析仪。用蒸馏水填充毛细管阵列。加载线性聚丙烯酰胺凝胶并单击运行。

如果使用凝胶电泳分析PCR结果，则根据手稿指示在电泳运行缓冲液中溶解阿加罗斯，以准备1%的加糖凝胶。然后将4微升的核酸污渍加入凝胶中，轻轻混合。用梳子设置凝胶托盘，减速将凝胶倒在中间，注意避免气泡。

将凝胶留在室温下，直到完全凝固，约30-45分钟。然后放入电泳室。拆下梳子，用 1x TAE 缓冲器盖住它。

用脱氧核糖核酸梯装载凝胶，然后将 PCR 产品与装载染料混合。然后以 90 伏运行凝胶 60-90 分钟，直到蓝色染料线处于凝胶通道的大约 75% 。运行完成后，使用透发光器可视化凝胶。

通过荧光显微镜观察自授和交叉授粉的花粉管生长，以确定每个品种的自我（在）兼容性。当花粉管生长被逮捕时，当至少一个花粉管到达该样式的基础时，培养被认为是自不兼容的。5 个质剂对组合用于使用 PCR 与毛细管或凝胶电泳结合识别 S-等位基因。

首先，使用SRC底原线对扩增第一个S-RNase intron，确定了S-等位基因。然后，RNase 的第二个内子被放大，用三个底原集来区分 S6、S9、S1 和 S7 等位基因。SFB基因的V2和HVB可变区域被放大，使用APRFBC8底法来识别Sc和S8等位基因。

一旦S-等位基因被识别出来，就可以建立与相互不兼容的基因型不同的不相容组。重要的是要记住在毛细管电泳中使用控制，因为它们使用自动碎片分析系统，可以报告碎片大小的更多差异，导致等位基因识别不准确。显微镜观察和基因分析的结合产生了一种非常有用的方法，可以确定杏子的自不相容性，并建立品种之间的不相容关系。

自我不相容现在与杏中当地人的联系。似乎涉及因素的确定。今后的努力必须集中在杏中这种品种的遗传教育上。

这种文献方法的结合为商业果园中适当选择品种和杏育种计划中的模式基因型提供了宝贵的信息。类似的方法可用于其他木本多年生作物。