Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

Yuxuan Xiao; John M. Lamar

doi:10.3791/60582

使用阵列库的中等通量筛选和基于双 Luciferase 的分录报告器识别转录因子稳压器

JoVE Journal
Cancer Research

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JoVE Journal Cancer Research

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

使用阵列库的中等通量筛选和基于双 Luciferase 的分录报告器识别转录因子稳压器

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11:32 min

March 27, 2020

DOI: 10.3791/60582-v

Yuxuan Xiao¹, John M. Lamar¹

¹Department of Molecular & Cellular Physiology,Albany Medical College

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

为了识别新的转录因子调节器，我们开发了一种使用基于双透明酶的转录报告器测定筛选排列的慢病毒或逆转录病毒RNAi库的方法。这种方法提供了一种快速且相对便宜的方法，在单个实验中筛选数百名候选人。

该协议可用于筛选排列的扁病毒或逆转录病毒测定库，以确定癌细胞中转录因子的新调节器。该技术的主要优点是，它快速、中吞吐量和价格低廉，并且使用大多数调查人员通常都能接触到的设备和试剂。为了扩大和纯化库中的每一个扁病毒载体，首先在96井深井板的每个井中加入1.3毫升的Luria肉汤，每毫升安皮西林100微克。

每口井都接种两微升甘油，在37摄氏度和每分钟225转下进行夜间孵育。第二天，将每种细菌培养成单独的1.5毫升微离心管进行离心。根据制造商的说明，使用适当的细菌迷你试剂盒来净化每个病媒。

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