Name: 风险蝴蝶捕获繁殖计划，以提高生命历史知识和有效的异地保护技术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: 了解濒危迈阿密蓝蝶的实验室人工繁殖技术，掌握幼虫发育时间与龄期评估方法。本研究为迁地保护计划提供关键的生命史数据支持，助力蝴蝶保护繁育工作。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本研究得到了美国鱼类及野生动物管理局保护恢复计划（F17AP00467）和迪士尼保护基金的资助。佛罗里达自然历史博物馆和佛罗里达大学昆虫学与线虫学系也提供了额外支持。

1. 确保成虫成功求偶与交配
<ol>
	<li>成功羽化后，将健康的成虫蝴蝶释放到温度可控温室内的安全步入式纱网飞行笼中（补充图2）。 
	注意：若需区分特定个体，例如用于分离不同遗传品系、种群来源，或与个体寿命、行为等相关的特定数据采集，可用永久性记号笔在翅膀腹面进行标记。
	<ol>
		<li>虽然飞行笼的具体尺寸可有所变化，但应确保有足够的空间容纳充足的蜜源植物材料，以满足所饲养成虫密度的需求，同时为人员提供可自由站立和转身的空间。</li>
		<li>除温度调控外，应确保温室结构安全，以提供第二层生物 containment，并防止恶劣天气（如大雨、强风）的影响。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将盆栽蜜源植物抬高，使笼内顶部与最高开花部位之间的距离不超过30 cm（补充图2）。这有助于成虫最优化地获取可利用的花蜜资源，提供充足的停落位置，并减少不必要的飞行活动。</li>
	<li>在飞行笼内放置一盆寄主植物。此举可确保即使遗漏了交配对，其产下的卵仍可被收集。</li>
	<li>提供持续的空气流动。这有助于增强求偶行为和提高交配成功率。在温室环境中，使用鼓风机或固定安装的循环风扇最有利于改善通风和空气流动。小型便携式通风设备（如箱式风扇或台式风扇）也可使用。</li>
	<li>将温室内温度维持在27 °C至32 °C之间，以促进成虫的最佳活动状态和交配成功率。笼内温度通过可追溯的记忆型温控监测仪进行监控。</li>
	<li>定期（约每2小时一次）使用手动喷雾泵、塑料储液喷雾器或花园软管向纱网飞行笼喷水雾。</li>
	<li>使用50 dram透明塑料带盖小瓶（材料表）从纱网飞行笼中轻柔地采集单个交配对，每瓶放置一至两对，并转移至室内饲养室或实验室（补充图3）。</li>
</ol>
2. 最大化卵产量
<ol>
	<li>组装产卵室。
	<ol>
		<li>取一个12盎司的 plain white 纸杯，使用 snap blade 工具刀在纸杯两侧相对的位置各做两条水平切口。每条切口应位于杯口下方约1 cm处。</li>
		<li>将一根棉签剪成两半，将每半的杆部插入纸杯两侧的水平切口中，使棉签的棉头部分向杯内延伸约2 cm。</li>
		<li>使用 snap blade 工具刀在纸杯底部做两个&#34;X&#34;形切口。每条斜切口长度约为1 cm。</li>
		<li>取一个9盎司的塑料杯，在底部加入约2 cm的自来水。</li>
		<li>取一段约15 cm长的新鲜幼虫寄主植物顶端嫩枝，将其茎部穿过纸杯底部的一个&#34;X&#34;形切口插入纸杯中。推动茎部穿过切口，使其底部伸出约4–5 cm。</li>
		<li>将装有寄主植物材料的纸杯放入塑料杯中，确保植物茎部浸入水中。</li>
		<li>用1 ml的皮下注射器（0.45 mm × 16 mm）吸取风味运动饮料，润湿纸杯中的两根棉签。这些棉签充当人工花朵。 
		注：甜瓜味和水果宾治味的运动饮料是最佳的花蜜替代品。</li>
		<li>待每对交配完成分离后，将2–3只 gravid 雌蝶放入组装好的杯式结构（即产卵室）中。</li>
		<li>用一块约15 cm × 15 cm的黑色薄纱布片覆盖杯口，并用橡皮筋固定在杯口周围（补充图4）。黑色薄纱可提供最佳的观察视野，便于识别偶尔产在纱布上的卵。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>刺激成蝶活动与产卵。
	<ol>
		<li>将每个产卵室放置在实验台或桌面上，置于一个带有铝制反光罩的8.5英寸（21.59 cm）夹式灯具正下方约19 cm处，灯内安装40 W白炽灯泡（补充图5）。 
		注：白炽灯提供刺激成蝶活动和产卵所需的辐射热。</li>
		<li>在灯具旁放置一个可追溯记忆的温度监测计，并将温度传感器放置在正对夹灯下方的产卵室顶部。 
		注：目标温度范围为27.5 °C–29 °C。</li>
		<li>根据部署的产卵室总数，按需增加额外的夹式灯具。</li>
		<li>将夹式灯具插入一个可编程的15安培24小时室内机械定时插座（双插座，可按30分钟间隔编程）。</li>
		<li>设置定时器，使夹式灯每30分钟开启一次（即重复循环：开启30分钟，关闭30分钟）。 
		注：此光照周期通过提供可重复的光照时段以刺激成蝶活动和产卵，随后给予短暂黑暗休息期，有助于最大化产卵量。</li>
		<li>每隔约2–3小时或根据需要，使用皮下注射器为每个杯中的棉签补充风味运动饮料，并用塑料喷雾瓶定期喷水雾。 
		注：此举可为蝴蝶提供充足的人工花蜜和湿度，使其自由取食，从而在难以使用活体开花植物材料的实验室条件下，延长成虫寿命并提高产卵效率。</li>
		<li>定期检查杯体，并根据需要更换寄主植物为新鲜枝条。</li>
		<li>当卵开始孵化或卵密度过高时，将雌蝶转移至装有新鲜寄主植物的新杯中，并对初孵幼虫启动幼虫培养方案。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 幼虫的护理与维持
<ol>
	<li>重复步骤 2.3–2.6，组装用于幼虫的培养杯。</li>
	<li>当卵开始孵化时，将带有卵和初孵幼虫的寄主植物材料转移至新组装的杯中，将茎穿过第二个孔 &#34;X&#34; 确保植物茎部浸入水中，且叶片接触相邻的新鲜寄主切段。</li>
	<li>当幼虫处于低龄期（初孵至2龄）时，每天检查幼虫杯中寄主植物材料的新鲜程度，并观察是否有霉菌或过多的粪便。 
	注意：幼虫早期不建议每天更换寄主材料，因为操作可能导致生物体受伤和/或不必要地消耗新鲜寄主材料。</li>
	<li>若寄主材料萎蔫或处于其他不良状态，可将另一份新鲜寄主材料放入杯中，使其接触原有叶片，让幼虫自行迁移至新的寄主上。</li>
	<li>幼虫达到3龄后rd 幼虫龄期，每日更换纸杯并添加新鲜寄主材料。</li>
	<li>使用小型驼毛水彩画笔将幼虫从旧的寄主材料或杯壁表面轻轻转移至新杯子中的新鲜寄主材料上。</li>
	<li>将旧的寄主材料放入一个空的矩形塑料食品储存盒中。</li>
	<li>每日重复步骤 3.5–3.7，直至所有含幼虫的杯子均处理完毕。</li>
	<li>完成后，在食物储存容器内的植物废弃物上方添加少量新鲜的寄主材料，并将盖子 loosely 盖上。 
	注意：此步骤可作为安全措施，以防在日常处理过程中遗漏任何幼虫，因为这些幼虫会爬到植物废料上方的新寄主材料上，可在第二天清除。</li>
	<li>将培养杯置于25 °C–28 °C的实验室温度下，以保证幼虫的最佳活动状态和发育（补充图6). 
	注意：在室内条件下，为达到最佳饲养温度，通常需要将饲养杯置于带有铝制反光罩的40 W白炽灯夹灯下方。随后可使用可追溯记忆型监控温度计实时监测温度，并调节灯的高度以达到最佳饲养条件。</li>
</ol>
4. 构建化蛹室
<ol>
	<li>将单面瓦楞纸卷裁剪成大小相等的 3.8 cm × 3.8 cm 正方形。</li>
	<li>取一张正方形放入一个 2 盎司透明塑料分装杯中。</li>
	<li>将杯子放置在透明塑料杯托上（补充图 7）。</li>
</ol>
5. 准备幼虫化蛹
<ol>
	<li>在每日的种群处理过程中，识别即将化蛹的成熟幼虫。 
	注意：此类幼虫体色将变为均匀的暗黄褐色，失去体节上的V形斑纹，并常常离开寄主四处爬行。</li>
	<li>使用小型驼毛水彩画笔或镊子轻轻取出每只成熟幼虫，并将其放入一个化蛹室中。</li>
	<li>将透明塑料盖紧密扣合在化蛹室上。</li>
	<li>重复步骤5.1–5.3，直至所有准备化蛹的幼虫均被转移至化蛹室，必要时添加新的塑料托盘（补充图8）。</li>
</ol>
6. 蛹的维持
<ol>
	<li>对于每盘蛹室，记录首次化蛹的日期以及所需的其他相关信息（例如，遗传品系、实验批次等）。</li>
	<li>按日期整理各盘，并将其放置于实验室内的安全位置（补充图8）。</li>
	<li>每日监测各盘成虫羽化情况。 
	注意：实验室环境条件（如温度）将显著影响发育时间。</li>
	<li>在成虫羽化前（通常在首次化蛹后10天内），取下各个蛹室的盖子，将整盘放入一个34.29 cm x 34.29 cm x 60.96 cm的可折叠网状弹出式饲养笼中（补充图9）。 
	注意：蛹牢固附着在瓦楞纸方块的沟槽内，有助于成虫顺利羽化（补充图10）。</li>
	<li>对后续人工饲养世代，重复从步骤1.1开始的整个实验流程。</li>
</ol>
7. 评估未成熟阶段的发育时间及龄期数量
<ol>
	<li>将单个幼虫置于解剖显微镜下。使用小型骆毛水彩画笔小心移动和分离幼虫，以避免对生物体造成损伤。</li>
	<li>将画笔的一根毛蘸取无毒发光涂料（材料表），然后小心地在幼虫背部（背侧）放置一小滴涂料。选择一种与幼虫背景色和图案色形成鲜明对比的涂料颜色（补充图11）。注意避免将涂料涂在幼虫头部。</li>
	<li>待涂料干燥后（约30秒左右），将每只幼虫分别放入一个2盎司透明塑料分装杯中，杯内放置约1–3片新鲜的末端寄主植物叶片，并在杯体和杯盖上标注唯一的识别编号（补充图12）。</li>
	
	<li>每天仔细检查每只幼虫。取出叶片并放置于白色表面，利用解剖显微镜检查杯体、透明杯盖及叶片，观察是否存在幼虫蜕皮（蜕下的皮）和/或头壳。</li>
	<li>若发现幼虫蜕皮，应将其从杯中取出，并放入已标记对应杯号及日期的微量离心管中（见下文步骤8.1–8.6）。</li>
	<li>每次蜕皮后重新为幼虫涂标记，并记录蜕皮日期。</li>
	<li>使用数字卡尺每日测量每只幼虫的总身体长度（从头部至最后一腹节）。测量三次，记录三次测量的平均值，并注明日期和时间。对于早期龄期幼虫，测量时应使用放大镜或解剖显微镜，以确保测量准确。</li>
	<li>将幼虫放回对应的塑料分装杯中。</li>
	<li>根据需要添加新鲜寄主材料，并清除所有虫粪及旧的寄主残渣。若发现杯中有霉菌生长，应丢弃该杯并更换新杯，同时在新杯上正确标注相应的唯一识别编号。</li>
	<li>重复步骤7.5–7.9，直至所有幼虫进入末龄并开始前蛹期。当幼虫停止进食、体色变为均匀的暗黄褐色、失去体表的V形斑纹且常离开寄主植物时，应尽量减少干扰。</li>
	<li>在杯内放入一小片瓦楞纸（见步骤4.1）。</li>
	<li>每只幼虫完全化蛹后，参照上述步骤7.8测量其总长度，并记录化蛹日期。此为每只个体的最后一次蜕皮。</li>
	<li>每天检查蛹的情况，记录每只成虫羽化的日期及其性别。</li>
	<li>使用数字卡尺测量每只蝴蝶的翅弦长。可用镊子轻轻夹持蝴蝶进行测量。若蝴蝶活动过于频繁难以测量，可暂时将其放入冰箱冷藏30秒或更短时间内，然后再次尝试。</li>
</ol>
8. 收集幼虫蜕皮
<ol>
	<li>当观察到幼虫蜕皮后，用 0.2 µl 甘油填充一个微量离心管。在管盖顶部和侧面标记幼虫编号、蜕皮日期及头壳（H.C.）。 
	注意：某些鳞翅目幼虫通常会摄食其蜕下的外皮，但头壳应会保留下来。</li>
	<li>将幼虫蜕皮及其相关的头壳放入透明塑料小杯盖中，并加入数滴乙醇。</li>
	<li>将幼虫蜕皮置于透明塑料小杯盖中，滴加数滴乙醇，然后在解剖显微镜下进行观察。若幼虫头壳已与蜕皮分离，可在尖头昆虫镊子尖端滴一滴甘油，轻轻接触头壳，将其粘起，随后放入对应的微量离心管中。</li>
	<li>若头壳仍附着于幼虫蜕皮上，可使用尖头镊子和昆虫针将其从蜕皮中分离。</li>
	<li>分离后，使用甘油法拾取头壳。若乙醇过多，可用小片纸巾吸除部分液体，但需小心避免误将头壳一同移除。</li>
	<li>将头壳放入已标记且盛有甘油的样品管中，盖紧管盖。</li>
</ol>

<ol><li>Thomas, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butterfly+communities+under+threat%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Butterfly communities under threat.</a> Science. 352 (6296), 216-218 (2016).</li>
<li>Swengel, S. R., Schlicht, D., Olsen, F., Swengel, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Declines+of+prairie+butterflies+in+the+Midwestern+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Conservation%22%5BJournal%5D)">Declines of prairie butterflies in the Midwestern USA.</a> Journal of Insect Conservation. 15 (1-2), 327-339 (2011).</li>
<li>Habel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butterfly+community+shifts+over+two+centuries%5BTitle%5D)+AND+%22Conservation+Biology%22%5BJournal%5D)">Butterfly community shifts over two centuries.</a> Conservation Biology. 30 (4), 754-762 (2016).</li>
<li>Gilburn, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+neonicotinoid+insecticides+driving+declines+of+widespread+butterflies%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Peer+J%22%5BJournal%5D)">Are neonicotinoid insecticides driving declines of widespread butterflies?</a> Peer J. 3, e1402(2015).</li>
<li>Sánchez-Bayo, F., Wyckhuys, K. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worldwide+decline+of+the+entomofauna%3A+A+review+of+its+drivers%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Conservation%22%5BJournal%5D)">Worldwide decline of the entomofauna: A review of its drivers.</a> Biological Conservation. 232, 8-27 (2019).</li>
<li>Daniels, J. C., Magdich, M., Tolson, P. Butterfly recovery planning: Determining how to contribute. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDaniels%2C+JC+%22Butterfly+Conservation+in+North+America%3A+Efforts+to+Help+Save+Our+Charismatic+Microfauna%22">Butterfly Conservation in North America: Efforts to Help Save Our Charismatic Microfauna</a>. Daniels, J. C. , Springer Science+Business Media B.V. New York. 1-21 (2015).</li>
<li>U.S. Fish and Wildlife Service. Environmental Conservation Online System. Listed Animals. , https://ecos.fws.gov/ecp (2019).</li>
<li>Schultz, C. B., Russell, C., Wynn, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration%2C+reintroduction+and+captive+propagation+efforts+for+at-risk+butterflies%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Israel+Journal+of+Ecology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Restoration, reintroduction and captive propagation efforts for at-risk butterflies: a review.</a> Israel Journal of Ecology and Evolution. 54, 41-61 (2008).</li>
<li>Grow, S., Allard, R., Luke, D. The role of AZA-accredited zoos and aquariums in butterfly conservation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGrow%2C+S+%22Butterfly+Conservation+in+North+America%3A+Efforts+to+Help+Save+Our+Charismatic+Microfauna%22">Butterfly Conservation in North America: Efforts to Help Save Our Charismatic Microfauna</a>. Daniels, J. C. , Springer Science+Business Media B.V. New York. 23-34 (2015).</li>
<li>Crone, E. E., Pickering, D., Schultz, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+captive+rearing+promote+recovery+of+endangered+butterflies%3F+An+assessment+in+the+face+of+uncertainty%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Conservation%22%5BJournal%5D)">Can captive rearing promote recovery of endangered butterflies? An assessment in the face of uncertainty.</a> Biological Conservation. 139, 103-112 (2007).</li>
<li>Sanchez, S. J., Daniels, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+butterfly+conservation+initiative%3A+Developing+a+new+conservation+vision+through+compound+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22News+of+the+Lepidopterists%27+Society%22%5BJournal%5D)">The butterfly conservation initiative: Developing a new conservation vision through compound eyes.</a> News of the Lepidopterists' Society. 49 (3), 75-77 (2007).</li>
<li>Wardlaw, J. C., Elmes, G. W., Thomas, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+studying+Maculinea+butterflies%3A+I.+Rearing+Maculinea+caterpillars+with+Myrmica+ants+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Conservation%22%5BJournal%5D)">Techniques for studying Maculinea butterflies: I. Rearing Maculinea caterpillars with Myrmica ants in the laboratory.</a> Journal of Insect Conservation. 2 (1), 79-84 (1998).</li>
<li>Mattooni, R., Longcore, T., Krenova, Z., Lipman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+rearing+the+endangered+Palos+Verdes+blue+butterfly+%28Glaucopsyche+lygdamus+palosverdesensis%3ALycaenidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Research+on+the+Lepidoptera%22%5BJournal%5D)">Mass rearing the endangered Palos Verdes blue butterfly (Glaucopsyche lygdamus palosverdesensis:Lycaenidae).</a> Journal of Research on the Lepidoptera. 37, 55-67 (1998).</li>
<li>Pearce-Kelly, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+captive+rearing+of+threatened+Orthoptera%3A+a+comparison+of+the+conservation+potential+and+practical+considerations+of+two+species%27+breeding+programmes+at+the+Zoological+Society+of+London%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Conservation%22%5BJournal%5D)">The captive rearing of threatened Orthoptera: a comparison of the conservation potential and practical considerations of two species' breeding programmes at the Zoological Society of London.</a> Journal of Insect Conservation. 2 (3-4), 201-210 (1998).</li>
<li>Wells, C. N., Edwards, L., Hawkins, R., Smith, L., Tonkyn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rearing+method+for+Agrynnis+%28Speyeria%29+diana+%28Lepidoptera%3A+Nymphalidae%29+that+avoids+diapause%5BTitle%5D)+AND+%22Psyche%22%5BJournal%5D)">A rearing method for Agrynnis (Speyeria) diana (Lepidoptera: Nymphalidae) that avoids diapause.</a> Psyche. , 1-6 (2011).</li>
<li>Grosboll, D. N. Captive Rearing the Endangered Mardon Skipper (Polites mardon) and Taylor's Checkerspot (Euphydryas editha taylori) Butterflies: Initial Results (Lepidoptera, Nymphalidae). Proceedings of the species at risk, pathways to recovery conference. , Species at Risk Pathways to Recovery Conference Organizing Committee. Victoria. 1-6 (2004).</li>
<li>Barclay, E., Arnold, M., Andersen, M., Shepherdson, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarclay%2C+E+%22Husbandry+manual%3A+Taylor%27s+checkerspot+%28Euphydryas+editha+taylori%29%22">Husbandry manual: Taylor's checkerspot (Euphydryas editha taylori)</a>. , 1st edition, Oregon Zoo. Portland, Oregon. (2009).</li>
<li>Johnson, J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJohnson%2C+J+%22Captive+Rearing+of+the+Laguna+Mountains+Skipper+%28Pyrgus+ruralis+laguanae%29%3A+Final+Report%22">Captive Rearing of the Laguna Mountains Skipper (Pyrgus ruralis laguanae): Final Report</a>. , (2010).</li>
<li>Linders, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Captive+rearing+and+translocation+of+Taylor%27s+checkerspot+in+South+Puget+Sound%3A+2011-2012%5BTitle%5D)+AND+%222012+Annual+Progress+Report+to+the+ACUB+Technical+Review+Committee%22%5BJournal%5D)">Captive rearing and translocation of Taylor's checkerspot in South Puget Sound: 2011-2012.</a> 2012 Annual Progress Report to the ACUB Technical Review Committee. , (2012).</li>
<li>Linders, M., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Captive+rearing+and+translocation+of+Taylor%27s+checkerspot+butterfly+%28Euphydryas+editha+taylori.%29%3A+South+Puget+Sound%2C+Washington%2C+2012%E2%80%932013%5BTitle%5D)+AND+%222013+Annual+Report+to+the+US+Fish+and+Wildlife+Service+%28Cooperative+Agreement+F12ACI00835%29%2C+Joint+Base+Lewis-McChord+Fish+and+Wildlife+Program+and+JBLM-ACUB+Technical+Review+Committee%22%5BJournal%5D)">Captive rearing and translocation of Taylor's checkerspot butterfly (Euphydryas editha taylori.): South Puget Sound, Washington, 2012–2013.</a> 2013 Annual Report to the US Fish and Wildlife Service (Cooperative Agreement F12ACI00835), Joint Base Lewis-McChord Fish and Wildlife Program and JBLM-ACUB Technical Review Committee. , (2013).</li>
<li>Department of Conservation and Research, Toledo Zoo. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Propagation+Handbook+for+the+Karner+Blue+Butterfly+Lycaeides+melissa+samuelis%22">Propagation Handbook for the Karner Blue Butterfly Lycaeides melissa samuelis</a>. , Fourth edition, (2006).</li>
<li>Johnson, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Captive+Rearing+of+Lange%27s+Metalmark+Butterfly%2C+2011-2015%5BTitle%5D)+AND+%22United+States+Fish+and+Wildlife+Service%2C+CVPIA+Habitat+Restoration+Program+%28F11AP00168%29%22%5BJournal%5D)">Captive Rearing of Lange's Metalmark Butterfly, 2011-2015.</a> United States Fish and Wildlife Service, CVPIA Habitat Restoration Program (F11AP00168). , (2016).</li>
<li>Andersen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAndersen%2C+MJ+%22Oregon+Silverspot+Butterfly+Husbandry+Manual%22">Oregon Silverspot Butterfly Husbandry Manual</a>. , Oregon Zoo. Portland, Oregon. (2010).</li>
<li>Washington Department of Fish and Wildlife. Threatened and Endangered Wildlife in Washington: 2012 Annual Report. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Listing+and+Recovery+Section%2C+Wildlife+Program%2C+Washington+Department+of+Fish+and+Wildlife%22">Listing and Recovery Section, Wildlife Program, Washington Department of Fish and Wildlife</a>. , Olympia. (2013).</li>
<li>McGowan, P. J. K., Traylor-Holzer, K., Leus, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IUCN+guidelines+for+determining+how+ex+situ+management+should+be+used+in+species+conservation%5BTitle%5D)+AND+%22Conservation+Letters%22%5BJournal%5D)">IUCN guidelines for determining how ex situ management should be used in species conservation.</a> Conservation Letters. 10 (3), 361-366 (2017).</li>
<li>Pearce-Kelly, P., et al. The conservation value of insect breeding programmes: Rationale, evaluation tools and example programme case studies. Insect Conservation Biology: Proceedings of the Royal Entomological Society's 23nd Symposium. Stuart, A. J. A., New, T. R., Lewis, O. T., et al. , 57-75 (2007).</li>
<li>U.S. Fish and Wildlife Service. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Policy+Regarding+Controlled+Propagation+of+Species+Listed+Under+the+Endangered+Species+Act%5BTitle%5D)+AND+%22United+States+Federal+Register%22%5BJournal%5D)">Policy Regarding Controlled Propagation of Species Listed Under the Endangered Species Act.</a> United States Federal Register. 65 (183), 56916-56922 (2000).</li>
<li>IUCN/SSC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+on+the+use+of+ex+situ+management+for+species+conservation.+Version+2.0%5BTitle%5D)+AND+%22IUCN+Species+Survival+Commission%22%5BJournal%5D)">Guidelines on the use of ex situ management for species conservation. Version 2.0.</a> IUCN Species Survival Commission. , Gland, Switzerland. (2014).</li>
<li>Sutherland, W. J., Pullin, A. S., Dolman, P. M., Knight, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+need+for+evidence-based+conservation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Ecology+%26+Evolution%22%5BJournal%5D)">The need for evidence-based conservation.</a> Trends in Ecology & Evolution. 19 (6), 305-308 (2004).</li>
<li>Daniels, J. C., Nordmeyer, C., Runquist, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+standards+for+at-risk+butterfly+translocations%5BTitle%5D)+AND+%22Diversity%22%5BJournal%5D)">Improving standards for at-risk butterfly translocations.</a> Diversity. 10, 67(2018).</li>
<li>Saarinen, E. V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Population+genetics+of+the+endangered+Miami+blue+butterfly+Cyclargus+thomasi+bethunebakeri.%3A+implications+for+conservation%22">Population genetics of the endangered Miami blue butterfly Cyclargus thomasi bethunebakeri.: implications for conservation</a>. , University of Florida. Gainesville. (2009).</li>
<li>Becker, T. Propagation and repatriation of the regal fritillary butterfly. , http://titag.org/2016/2016papers/beckerregal.pdf (2019).</li>
<li>R Core Team. R A Language and Environment for Statistical Computing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22R+Foundation+for+Statistical+Computing%22">R Foundation for Statistical Computing</a>. , Vienna, Austria. (2016).</li>
<li>Schultz, C. B., Dzurisin, J. D., Russell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Captive+rearing+of+Puget+blue+butterflies+%28Icaricia+icarioides+blackmorei%29+and+implications+for+conservation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Conservation%22%5BJournal%5D)">Captive rearing of Puget blue butterflies (Icaricia icarioides blackmorei) and implications for conservation.</a> Journal of Insect Conservation. 13 (3), 309-313 (2009).</li>
<li>Frankham, R., Loebel, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+problems+in+conservation+genetics+using+captive+Drosophila+populations%3A+Rapid+genetic+adaptation+to+captivity%5BTitle%5D)+AND+%22Zoo+Biology%22%5BJournal%5D)">Modeling problems in conservation genetics using captive Drosophila populations: Rapid genetic adaptation to captivity.</a> Zoo Biology. 11 (5), 333-342 (1992).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本文阐述了这一经过验证的迁地保护繁育方案在濒危蝴蝶大规模繁育中的有效性，并说明了如何将其调整用于科学研究，以帮助填补关键的行为学、生活史或生态学数据空白。例如，通过加深对平均总发育时间（卵至成虫）、各生活阶段平均持续时间以及交配最适温度等方面的了解，可用于优化该方案并提高整体项目的成功率。目前绝大多数现有方案仅详细描述了生物体的饲养方法，而未涉及数据收集、科学研究，或如何利用这些研究成果来指导并可能改进迁地保护方法。
本方案需要每日进行生物饲养管理。通过保持清洁的饲养环境、避免生物过度拥挤以及提供高质量的幼虫寄主植物材料，可使生物的健康状况和繁殖能力达到最佳。在大多数情况下，我们使用一次性饲养用品和容器（例如纸杯和塑料杯），通常定期更换，往往每日更换，且从不重复使用这些材料。这种方法既经济高效，又减少了对饲养材料进行更费力消毒的需求。然而，对于常用工具，如昆虫镊子、水彩画笔、小型弹出式飞行笼，以及所有饲养表面（如桌面和实验台面），则需定期使用5%的次氯酸钠溶液进行消毒。具体的消毒频率在很大程度上取决于使用频率、生物的物候阶段及其他变量，应根据每个迁地保护项目的具体需求进行调整。我们还发现，使用白色牛皮纸覆盖所有饲养表面非常有用。它提供了一种廉价且易于铺设的洁净基底，白色背景有助于发现任何逃逸的个体。在进行日常饲养操作时，所有实验室人员均应始终佩戴一次性检查手套，以最大限度减少污染，并保护人员免受因接触植物或生物可能引起的皮肤刺激。如果任何实验室人员家中饲养需使用外用跳蚤防治药物的宠物，这一点尤为重要。即使微量的活性成分残留也可能对圈养生物造成危害。
此外，应注意尽量减少生物个体的过度拥挤。幼虫密度过高可能导致生物健康状况迅速下降，甚至在某些分类群（尤其是灰蝶科）中出现同类相食现象。根据该物种生活史部分所述，可能需要定期分离幼虫以减少饲养容器内的数量，甚至对个体幼虫进行单独隔离。每个容器中的理想数量因具体分类群以及各项异地保育项目的限制因素（如可用预算、实验室设施和饲养人员总数）而有较大差异。同样建议在盛放幼虫的容器之间留出足够的空间，以尽量减少生物个体在容器间的迁移。最后，对于规模较大的人工种群，强烈建议将种群分置于一个或多个不同的实验室设施中。这种保护性策略有助于降低因疾病或其他不可预见因素导致整个种群毁灭性损失的风险。
幼虫寄主植物的质量和可获得性直接影响畜牧业生产，并显著影响幼虫的发育速度和种群整体健康状况。然而，目前很少有已发表的报告或研究强调这一幕后需求，或讨论最佳的育苗实践方法。成功的迁地保护项目规划必须充分考虑植物的数量供应、生产及养护管理。由于许多幼虫还需要或偏好特定的植物部位（例如顶端嫩芽、花蕾和花序、果实等），因此必须有效调控以确保植物处于适当的物候阶段。
还需考虑适当的种群 demographics 和遗传管理，并尽量减少圈养可能带来的任何负面影响。我们建议制定一项遗传管理计划，该计划可包括定期引入新的遗传物质、最大化遗传多样性并防止近亲繁殖的策略，定期评估关键生物体的适合度变量，并在一定程度上监测遗传状况，以便与现存种群进行比较并检查圈养种群的健康状况。定期将圈养个体的特征与创始种群的个体进行比较也是必要的34,35。
这些方案代表了经过验证的最佳实践方法，可为各类研究人员和保护实践者提供帮助，使其能够直接应用或调整我们的方法，用于各自的研究以及濒危蝴蝶或其他昆虫的迁地保护与恢复项目。文中具体阐述的人工繁育方案可能最适用于其他灰蝶科、相关分类单元或体型较小的物种。然而，其中许多组成部分，例如确保成功求偶与交配、利用人工花蜜维持成虫生存、最大化产卵量以及幼虫常规护理等，在理论上可更广泛地应用于或调整至更多样的分类单元。如前所述，尽管应强调方案的灵活性，但参考其他已建立的方法学有助于提供有价值的见解，并为调整与创新提供可行的起点。本文所提出用于评估多种生活史特征的方法，例如幼虫发育时间及幼虫龄期数量，理论上也广泛适用于其他保护性繁育项目及濒危物种。我们鼓励其他研究者在条件允许时，协助填补关键的生态学数据空白，并发表经过审定的方案与项目成果。

越来越多的研究表明，全球蝴蝶种群正在经历广泛而严重的衰退1,2,3,4,5，其中包括绝大多数濒危物种。为减缓此类衰退而设计的保护项目通常采用多种策略相结合的方式，包括种群监测、栖息地管理与恢复、科学研究、人工繁育以及个体迁移6。仅在美国及其属地范围内，就有共计30个蝴蝶分类单元被《濒危物种法案》（ESA）列为受威胁或濒危物种，其中21个已制定获批的草案或最终恢复计划。对于这些分类单元，超过一半已确定的恢复策略建议实施人工繁育，或明确指出应评估开展人工繁育的可行性7。近年来，针对蝴蝶的迁地保护工作显著增加8,9，并有望成为支持恢复工作的一项关键工具10。目前，众多机构、组织和政府部门正参与至少11个列入ESA的蝴蝶分类单元（即 Cyclargus thomasi bethunebakeri, Euphydryas editha quino, Euphydryas editha taylori, Heraclides aristodemus, Hesperia dacotae, Lycaeides melissa samuelis, Oarisma poweshiek, Pyrgus ruralis lagunae 和 Speryeria zerene hippolyta）以及其他多个濒危分类单元（例如 Callophrys irus, Euphydryas phaeton, Speyeria idalia 和 Eumaeus atala）的迁地保护工作11。尽管已有大量坚实且成功的保护实践，但各项目之间以及保护从业人员之间的常规交流仍然不足，缺乏思想、数据、有效方法和成果的共享。此类知识共享至关重要，有助于最大限度减少重复劳动，提升整体最佳实践水平，并增强保护成效。目前，针对濒危蝴蝶分类单元的提前孵化、人工饲养、繁殖或养护方案中，公开发布的操作规程极为有限，且其中许多缺乏足够的叙述性细节和/或图示说明。这些资料通常仅提供概括性信息，缺少详细的分步操作指导及配套图像，导致难以复制，或难以评估其在其他分类单元中的适用性12,13,14,15。许多现有规程在某些方面存在局限：它们仅存在于灰色文献中，或详细程度不一、出版时间久远，或仅作为研讨会论文集、机构/资助方报告或内部手册中的部分内容出现16,17,18,19,20,21,22,23,24。
对于大多数保护项目而言，圈养繁殖主要用于支持保护性迁移，包括再引入、种群强化（即增补）以及引种25,26。这些活动应作为整体恢复策略的组成部分，有计划地实施，以帮助防止某一列入保护名录的物种、亚种或种群灭绝。然而需要注意的是，这只是此类迁地保护项目可能发挥的多种作用之一。其他作用还包括维持保险种群（即避难种群）、临时性个体救助、支持与恢复相关的研究和/或培训，以及促进与保护相关的教育和公众意识提升27,28。无论迁地保护项目具有单一明确目标还是多重目标，保护实践者都应尽可能充分利用机会收集数据，以填补关键的信息空白。这一点尤为重要，因为在野外种群数量显著下降之前，绝大多数受威胁分类单元通常缺乏充分的研究。由此获得的有关目标分类单元在行为、生态或生活史等方面更深入的知识，有助于推动有效的物种保护与管理29。
本文详细描述了为联邦濒危物种迈阿密蓝蝶（Cyclargus thomasi bethunebakeri）（补充图1）所开发的人工繁育方案，该方案是更大规模保护与恢复计划的一部分。在此情况下，人工繁育项目具有三个明确的功能：1）作为现有野生种群一旦消失时的保险种群；2）作为研究种群，旨在填补已知的生态学与生活史知识空白，从而为恢复和/或管理提供科学依据；3）生产具有生存能力的个体，用于在该分类单元历史分布范围内的保护性迁移。该方案经过充分验证并已被证明有效，已持续使用并不断优化超过十年。因此，我们认为所描述的技术与方法代表了一种可行的模式，可直接应用于或易于调整后适用于其他迁地保护的濒危蝴蝶项目，特别是涉及灰蝶科（Lycaenidae）或相关类群的项目。尽管我们并不认为所描述的方案优于其他方案，但我们认为其中部分方法具有更广泛的应用潜力，有助于提升繁殖效率、个体护理水平或操作效率。这一点尤其重要，因为我们的大部分繁殖工作是在室内实验室条件下进行的，空间有限，这与涉及 Euphydryas editha taylori 和 Speryeria zerene hippolyta17,23 的保护项目类似。许多其他方案常使用盆栽植物用于产卵或幼虫饲养，这有时会带来一系列复杂问题，例如天敌控制、环境控制（如湿度、温度）、个体监测、数据收集、植物病虫害以及空间占用等21,22。最后，本文所述方案重点介绍人工繁殖的方法。许多其他濒危蝴蝶保护项目则采用提前孵化（head-starting）或人工饲养策略，其代表性方案也反映了这些差异。尽管这些差异通常较小，但我们认为这有助于拓宽可供其他项目参考的信息资源。这一点至关重要，因为大多数迁地保护项目均为开创性尝试，旨在促进稀有且常缺乏研究的分类单元的恢复。现有方案可作为极佳的起点，为提供宝贵见解、减少重复劳动以及推动创新发挥重要作用。由于&#34;蝴蝶物种间在行为、生活史特征及生态需求方面存在广泛差异，加之各保护项目的设施条件、预算、实践者专业水平&#34;及其他内在因素常有显著不同，即使对于亲缘关系较近的类群，依赖单一方法通常也具有局限性且不合理30。因此，必须强调根据特定物种或项目的需求灵活优化或开发新方案，这对成功至关重要。此外，我们还描述了在人工饲养条件下收集个体发育指标的实验室技术，包括幼虫龄期数量、各发育阶段持续时间、总发育时长以及幼虫和蛹的体长。这些技术在鳞翅目昆虫生活史研究中具有广泛适用性，可用于优化迁地保护方案或补充野外数据。

<table><tbody><tr><td>12 盎司 plain white paper cups（Karat）</td><td>Lollicup</td><td>C-KC16</td><td></td></tr><tr><td>15安培2插口机械式家用即插式倒计时照明定时器</td><td>Lowes</td><td>UTTNI2423</td><td></td></tr><tr><td>1毫升皮下注射器（0.45 毫米 × 16 毫米）</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-829-10F</td><td></td></tr><tr><td>2 盎司透明塑料分装杯杯盖</td><td>派对城</td><td>#791091</td><td></td></tr><tr><td>2 盎司透明塑料分装杯</td><td>派对城</td><td>#791088</td><td></td></tr><tr><td>34.29 cm × 34.29 cm × 60.96 cm 可折叠网格式弹出式饲养笼</td><td>Bioquip</td><td>1466BV</td><td></td></tr><tr><td>8.5&quot; 1瓦白炽灯夹式工作灯</td><td>Lowes</td><td>PTC301L</td><td></td></tr><tr><td>Adoric 电子数显卡尺</td><td>亚马逊公司</td><td>B07QX2SK2F</td><td></td></tr><tr><td>大孩子选择艺术 &amp;amp; Crafts 刷子套装 - 每包12支，多种尺寸</td><td>沃尔玛</td><td>#10965135</td><td></td></tr><tr><td>透明塑料杯托</td><td>前沿科学服务公司</td><td>AG_9040</td><td></td></tr><tr><td>Fisher Scientific Traceable 记忆监控温度计</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-077-8D</td><td></td></tr><tr><td>直头镊子，瑞士风格 #4，不锈钢</td><td>BioQuip</td><td>4531</td><td></td></tr><tr><td>Humco 甘油 6 盎司</td><td>沃尔玛</td><td>#303951037966</td><td></td></tr><tr><td>夜光涂料套装，蓝色、红色、黄色，4 dram</td><td>Bioquip</td><td>1166A</td><td></td></tr><tr><td>佳得乐劲爽西瓜味或佳得乐水果宾治味运动饮料</td><td>沃尔玛</td><td>#568456137</td><td></td></tr><tr><td>Neoteck 数字式二合一温湿度计</td><td>亚马逊公司</td><td>NTK026</td><td></td></tr><tr><td>奥林巴斯 0.6 ml 微量离心管，透明，聚丙烯材质，非无菌</td><td>亚马逊公司</td><td>24-272C</td><td></td></tr><tr><td>塑料储罐喷雾器</td><td>Lowes</td><td>#5318</td><td></td></tr><tr><td>Q-tips 棉签</td><td>沃尔玛</td><td>#551398298</td><td></td></tr><tr><td>带盖矩形塑料保鲜盒（Rubbermaid）</td><td>沃尔玛</td><td>#554320171</td><td></td></tr><tr><td>Showgard 903 印章镊子，4 5/8 英寸铲形尖端</td><td>亚马逊公司</td><td>#787793151378</td><td></td></tr><tr><td>单面瓦楞纸卷</td><td>亚马逊公司</td><td>BXSF12</td><td></td></tr><tr><td>美工刀</td><td>OLFA</td><td>#5023</td><td></td></tr><tr><td>9 盎司一次性塑料杯</td><td>独奏</td><td>SQ950</td><td></td></tr><tr><td>Thorton Plastics 50 dram 透明塑料旋盖瓶（6.25 盎司）</td><td>索顿塑料</td><td>#50</td><td></td></tr><tr><td>9 英寸 × 150 英尺 黑色纱布卷</td><td>Jo Ann Fabrics</td><td>#16029696</td><td></td></tr><tr><td>Zep 32 oz 塑料喷雾瓶</td><td>Lowes</td><td>HDPRO36</td><td></td></tr></tbody></table>

濒危蝴蝶人工繁育项目以增进生活史认知与有效异地保护技术

At-Risk Butterfly Captive Propagation Programs to Enhance Life History Knowledge and Effective Ex Situ Conservation Techniques

提高对濒危蝴蝶迁地保护最佳实践的认识，对于实现成功的保护和恢复项目成果至关重要。对这类人工饲养种群的研究还可提供宝贵数据，有助于填补目标分类群在行为、生活史及生态学方面的关键信息空白。本文描述了一种针对联邦濒危物种贝氏托马斯蓝灰蝶（Cyclargus thomasi bethunebakeri）的人工繁育方案，该方案可作为其他濒危蝴蝶迁地保护项目的参考模型，尤其适用于灰蝶科（Lycaenidae）物种。此外，我们还提供了一套简单明了的记录多种生活史参数的方法，这些参数不仅有助于优化迁地保护技术，也可适用于其他鳞翅目（lepidoptera）昆虫的实验室研究。

本文介绍了两种实验方案：1）针对联邦濒危物种迈阿密蓝蝶（Cyclargus thomasi bethunebakeri）的实验室人工繁育，以及 2）评估其基本生活史信息，例如未成熟阶段的发育时间及幼虫龄期数量。这两种方法均可根据需要调整，适用于其他迁地保护项目。

改进濒危蝴蝶迁地保护最佳实践的知识，对于实现成功的保护与恢复项目成果至关重要。

该方法是用于实验室大规模繁育濒危蝴蝶的完整迁地保护繁育方案的一部分。它展示了如何将基础饲养技术进行调整，以适应科学研究，从而帮助填补关键的行为、生活史或生态学数据空白。所介绍的评估幼虫发育时间和幼虫龄期数量的具体方法，可广泛应用于其他蝴蝶保护繁育或研究项目中。该技术是记录濒危蝴蝶生活史参数的有效方法，例如幼虫龄期数量、发育阶段持续时间以及各生活阶段的体型大小。我们已优化实验方案，以提高实验室中的工作效率和产出，这在需要短时间内收集数据时尤为重要。该方法要求操作者具备熟练的技巧和细致入微的观察能力，以避免对生物体造成伤害，因为蝴蝶幼虫体型非常小，尤其是初孵幼虫。演示该实验步骤的是来自我们实验室的本科生 Jacob Hornfeldt。首先，使用一支小型骆驼毛水彩画笔，小心地移动并分离一条幼虫，将其置于培养皿中解剖显微镜下。将昆虫笔的一根细毛蘸取与幼虫体色形成对比的无毒发光涂料，然后小心地在幼虫背部滴加一滴微小的涂料。30 秒后，油漆变干。使用一支小型骆马毛水彩画笔，将每只幼虫单独放入一个含有约一至三片新鲜顶端寄主植物材料的 2 盎司透明塑料分装杯中，并在杯子和盖子上标注唯一的标识符。将盖子牢固地盖紧。每天仔细检查每只幼虫。用镊子取下叶片，将其放置在白色表面上。检查培养杯及透明盖子。在解剖显微镜下检查叶片，观察是否存在幼虫蜕皮残留物和头部囊壳。当发现幼虫蜕皮残留物时，将其从杯中取出，并放入含有 0.2 µL 甘油的小瓶中。在瓶盖顶部和瓶身侧面标记幼虫编号、蜕皮日期和头部囊壳信息。将幼虫蜕皮及其相关的头壳置于透明的塑料分装杯盖中，并加入几滴乙醇。在解剖显微镜下观察幼虫蜕皮。如果幼虫头壳已与蜕皮分离，可在尖头昆虫学镊子的尖端滴一滴甘油，然后轻轻用甘油接触头壳。将头壳放入相应的微量离心管中。如果头壳仍附着在幼虫蜕皮上，使用尖头镊子和昆虫针将头壳与幼虫蜕皮分离。分离后，采用甘油法拾取头壳。每次蜕皮后，重新标记幼虫并记录蜕皮日期。每天使用数显卡尺测量每只幼虫从头部到最后一腹节的总体长，测量三次，记录三次测量的平均值以及测量日期和时间。检查相应的塑料杯，确保其中没有霉菌。清除所有虫粪和旧的寄主残渣，并根据需要添加新鲜的寄主材料。将幼虫放回杯中。将杯子置于27至32摄氏度的实验室温度下，以保证幼虫的最佳活动性和发育状态。保持该条件直至所有幼虫发育至末龄并进入预蛹期。当幼虫停止取食、体色变为均匀的暗黄褐色、失去体节上的V形斑纹，并常常离开寄主时，应在杯内放入一小片瓦楞纸。每只幼虫完全化蛹后，测量其总长度并记录化蛹日期。这是每个个体的最后一次蜕皮。每天检查蛹的情况。当它们发育为蝴蝶成虫后，使用镊子夹住成虫蝴蝶，并轻轻向翅膀吹气，以显露翅面上方的颜色。雄性蝴蝶的翅膀整体呈现蓝色，而雌性蝴蝶的蓝色区域较少，并在后翅上具有一个橙色的眼斑。记录每只羽化成虫的羽化日期及其性别。测量每只蝴蝶的翅长时，需用镊子轻轻夹住蝴蝶，并使用数显卡尺进行测量。若蝴蝶活动过于频繁而无法测量，可将其放入冰箱冷藏30秒或更短时间后再次尝试。该方案已推动了针对多个关键数据空白的定向研究，并实现了大量数据的收集，有助于改进实验室最佳繁育与饲养实践。以下是为一个个体收集的四个头壳。大多数幼虫经历四次蜕皮，每个未成熟阶段均少于五天。与雄性相比，雌性在所有未成熟阶段的发育通常更快。尽管该效应的 p 值为 0.625，未达到显著性水平。此步骤非常精细，尤其是当幼虫为刚孵化的初孵幼体时。在此步骤中务必使用显微镜，以确保颜料被准确地涂抹在幼虫背部的适当位置。这些方法可进一步扩展，用于评估发育阶段的存活率、在多种幼虫寄主上的差异表现，同时帮助研究人员更好地解读野外数据。这一简单直接的方法展示了如何通过适当的规划，将基础的生物饲养实践轻松转化为科学研究。所得结果可进一步用于指导甚至优化迁地保护方法，以提高其成功率。

at-risk-butterfly-captive-propagation-programs-to-enhance-life

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

风险蝴蝶捕获繁殖计划，以提高生命历史知识和有效的异地保护技术

利用核糖探针进行蝴蝶蛹翅原位杂交的实验方案

这些操作的总体目标是在研究环境中建立、维持并更新一种食蚜蝇（Eristalis...

用于科学研究的食蚜蝇（Eristalis tenax）的饲养与长期保育

开花植物上的杀菌剂喷洒可能会使独居蜂暴露于高浓度的花粉携带杀菌剂残留物中。通过基于实验室的实验涉及...

体外 饲养独居蜂：评估幼虫风险因素的工具

两栖动物生物学的研究为了解多个分类群生物的生殖、生理、胚胎学和发育过程提供了重要信息。本文全面介绍了可用于研究两栖动物卵巢调控与监测的各种方法学。...

两栖动物卵巢监测与控制的繁殖技术

本文介绍了一种基于野外采集残余卵碎片的蝴蝶种群非侵入性遗传取样简易方案。该方法可用于确认物种身份并量化遗传变异。此方案可轻松推广至更广泛的类群，适用于公众科学项目的参与。...

部署社区科学家对稀有蝴蝶种群进行非破坏性遗传取样

本文介绍了一种在人工饲料和受控实验室条件下饲养菜粉蝶的详细方案，该方案可精确调控幼体阶段的营养状况和毒素暴露。代表性实验结果展示了如何利用该方案检测重金属毒性。...

在受控条件下饲养菜粉蝶（Pieris rapae）：重金属耐受性案例研究

我们提出了一种非侵入性取样方法，可高效地从难以捕捉的小型哺乳动物（如美洲鼠兔）身上收集毛发样本。通过从所采集的毛发中提取DNA，并扩增多种常用于野生动物生态学与保护研究的分子标记物，我们展示了该方法的有效性。...

一种用于从难以捕捉的小型哺乳动物获取高质量DNA的非侵入性毛发采样技术

细胞衰老是一种不可逆的细胞周期停滞状态，可由多种细胞应激因素诱导。本文描述了诱导细胞衰老的实验方案以及检测衰老标志物的方法。...

诱导与定量细胞衰老的技术

本文演示了将荧光微粒快速、微创注射至小型鱼类循环系统的基本原理及方法 体内...

利用肾脏注射法在小型鱼类循环系统中简便高效地施用和可视化微粒

基因编码的 Ca2+ 指示剂（GECIs）彻底改变了原位Ca2+ 进行成像。为了从此类记录中最大限度地回收数据，需对Ca2+ 信号是必需的。本文中的方案有助于Ca的定量分析2+...

时空映射与颗粒分析技术在原位定量细胞内 Ca2+ 信号传导中的应用

了解濒危迈阿密蓝蝶的实验室人工繁殖技术，掌握幼虫发育时间与龄期评估方法。本研究为迁地保护计划提供关键的生命史数据支持，助力蝴蝶保护繁育工作。

濒危蝴蝶人工繁育项目以增进生活史认知与有效异地保护技术

探索更多视频