Name: 监测PD-1-阻断抗体绑定到T细胞派生从外周血滴 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: 了解如何使用流式细胞术检测外周血T细胞中PD-1阻断抗体的结合状态。该方法仅需微量血样即可快速识别与抗肿瘤效应和免疫相关不良事件相关的特定免疫细胞亚群。

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本工作获得了日本促进科学振兴会科学研究费补助金（JP17K16045）以及日本医疗研究开发机构（JP18cm0106335 和 19cm0106310）向 S.K. 提供的资助。

采样在常规临床操作过程中进行。所有人体样本均在受试者签署知情同意书后获取，符合《赫尔辛基宣言》的要求，并获得日本大阪大学医学研究生院伦理审查委员会（15383 和 752）的批准。
1. 全血样本制备与染色
<ol>
	<li>使用含乙二胺四乙酸（EDTA）的采血管采集全血样本。 
	注意：可使用常规针头或采血针进行采血。</li>
	<li>将20 µL全血样本转移至5 mL圆底聚苯乙烯流式细胞术管中。 
	注意：为减少细胞与管壁的非特异性结合，可在加入样本前向管中加入1 mL含2%胎牛血清（FBS）的磷酸盐缓冲液（PBS），涡旋振荡10秒。</li>
	<li>加入20 µL含2% FBS的PBS溶液。</li>
	<li>加入10 µL人源特异性Fc受体阻断试剂。充分混匀，并于室温孵育15分钟。</li>
	<li>加入500 µL红细胞裂解缓冲液。充分混匀，并于室温孵育10分钟。</li>
	<li>加入4 mL含2% FBS的PBS溶液，于4 °C以400 × g（1,500 rpm）离心5分钟。用移液器吸除上清液。</li>
	<li>重复步骤1.6所述的洗涤和吸除操作。</li>
	<li>将细胞重悬于100 µL含2% FBS的PBS溶液中，并均分为两管，每管50 µL。</li>
	<li>加入表面标志物抗体（表1）。充分混匀，避光孵育20分钟，室温进行。 
	注意：在分析T细胞免疫状态时，可根据流式细胞仪的性能增加检测标志物的数量。</li>
	<li>按照步骤1.6的方法洗涤样本两次。</li>
	<li>将细胞重悬于200 µL含2% FBS的PBS溶液中。</li>
</ol>
2. 流式细胞术分析
<ol>
	<li>将试管插入流式细胞仪，并基本按照推荐方案获取细胞9。</li>
	<li>记录10,000个事件作为淋巴细胞门控（图1A），并将流式数据导出为.fcs文件用于分析。</li>
	<li>在分析软件中打开文件。在前向散射光（FSC）（A）对侧向散射光（SSC）（A）的图上显示细胞，并圈定淋巴细胞群（图1A）。</li>
	<li>利用FSC（H）对FSC（W）和SSC（H）对SSC（W）选择单细胞（图1B），并在CD3对CD8或CD3对CD4图上显示，分别圈定CD8 T细胞和CD4 T细胞（图1C）。</li>
	<li>选择已圈定的细胞群，并在PD-1对人IgG4图上显示，根据同型对照确定结合了PD-1阻断抗体的CD8和CD4 T细胞（图1D）。</li>
</ol>

<ol><li>Gong, J., Chehrazi-Raffle, A., Reddi, S., Salgia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+PD-1+and+PD-L1+inhibitors+as+a+form+of+cancer+immunotherapy%3A+a+comprehensive+review+of+registration+trials+and+future+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+ImmunoTherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Development of PD-1 and PD-L1 inhibitors as a form of cancer immunotherapy: a comprehensive review of registration trials and future considerations.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 8(2018).</li>
<li>Borghaei, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab+versus+Docetaxel+in+Advanced+Nonsquamous+Non-Small-Cell+Lung+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nivolumab versus Docetaxel in Advanced Nonsquamous Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (17), 1627-1639 (2015).</li>
<li>Brahmer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab+versus+Docetaxel+in+Advanced+Squamous-Cell+Non-Small-Cell+Lung+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nivolumab versus Docetaxel in Advanced Squamous-Cell Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (2), 123-135 (2015).</li>
<li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated%2C+PD-L1-positive%2C+advanced+non-small-cell+lung+cancer+%28KEYNOTE-010%29%3A+a+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li>
<li>Postow, M. A., Sidlow, R., Hellmann, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune-Related+Adverse+Events+Associated+with+Immune+Checkpoint+Blockade%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Immune-Related Adverse Events Associated with Immune Checkpoint Blockade.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (2), 158-168 (2018).</li>
<li>Weber, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+Profile+of+Nivolumab+Monotherapy%3A+A+Pooled+Analysis+of+Patients+With+Advanced+Melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Safety Profile of Nivolumab Monotherapy: A Pooled Analysis of Patients With Advanced Melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (7), 785-792 (2017).</li>
<li>Champiat, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+immune+checkpoint+blockade+dysimmune+toxicities%3A+a+collaborative+position+paper%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Management of immune checkpoint blockade dysimmune toxicities: a collaborative position paper.</a> Annals of Oncology. 27 (4), 559-574 (2016).</li>
<li>Brahmer, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+I+study+of+single-agent+anti-programmed+death-1+%28MDX-1106%29+in+refractory+solid+tumors%3A+safety%2C+clinical+activity%2C+pharmacodynamics%2C+and+immunologic+correlates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Phase I study of single-agent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (19), 3167-3175 (2010).</li>
<li>Bommareddy, P. K., Lowe, D. B., Kaufman, H. L., Rabkin, S. D., Saha, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-parametric+flow+cytometry+staining+procedure+for+analyzing+tumor-infiltrating+immune+cells+following+oncolytic+herpes+simplex+virus+immunotherapy+in+intracranial+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Methods%22%5BJournal%5D)">Multi-parametric flow cytometry staining procedure for analyzing tumor-infiltrating immune cells following oncolytic herpes simplex virus immunotherapy in intracranial glioblastoma.</a> Journal of Biological Methods. 6 (2), 112(2019).</li>
<li>Osa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+implications+of+monitoring+nivolumab+immunokinetics+in+non-small+cell+lung+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Clinical implications of monitoring nivolumab immunokinetics in non-small cell lung cancer patients.</a> JCI Insight. 3 (19), 59125(2018).</li>
<li>Zelba, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+quantification+of+T-cells+expressing+PD-1+in+patients+on+anti-PD-1+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology%2C+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Accurate quantification of T-cells expressing PD-1 in patients on anti-PD-1 immunotherapy.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (12), 1845-1851 (2018).</li>
<li>Simoni, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bystander+CD8%28%2B%29+T+cells+are+abundant+and+phenotypically+distinct+in+human+tumour+infiltrates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Bystander CD8(+) T cells are abundant and phenotypically distinct in human tumour infiltrates.</a> Nature. 557 (7706), 575-579 (2018).</li>
<li>Chiu, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+general+method+for+quantifying+IgG-based+therapeutic+monoclonal+antibodies+in+human+plasma+using+protein+G+purification+coupled+with+a+two+internal+standard+calibration+strategy+using+LC-MS%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Development of a general method for quantifying IgG-based therapeutic monoclonal antibodies in human plasma using protein G purification coupled with a two internal standard calibration strategy using LC-MS/MS.</a> Analytica Chimica Acta. 1019, 93-102 (2018).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本文报道了一种利用流式细胞仪检测结合于外周血一滴血来源T细胞上的PD-1阻断抗体的方法，该方法最初为检测纳武利尤单抗（nivolumab）而开发10。尽管该技术操作极为简便，但为获得准确结果，需注意两个关键点。其一是检测PD-1分子时，应选用能与纳武利尤单抗和帕博利珠单抗（pembrolizumab）竞争结合的合适抗体，此问题已在先前研究中得到评估11。其二是表面染色前必须彻底完成红细胞裂解。只要为每次实验设立同型对照以确定IgG4阳性细胞群的设门范围，其频率便不受影响。然而，根据本方案，若红细胞裂解不充分，则可能导致淋巴细胞门内T细胞计数减少以及各表面标志物荧光强度降低。此外，红细胞裂解步骤必须在表面染色之前进行，否则抗IgG4抗体（HP6025）无法正常发挥作用。
该方法的局限性在于，与PD-1阻断抗体结合的T细胞群体中既包含介导治疗效应的特异性T细胞克隆，也包含引起免疫相关不良事件（irAEs）的克隆；然而，这些特异性克隆在抗体结合群体中的频率相当低。因此，我们仍需利用某些标志物（...

PD-1阻断抗体已成为治疗多种癌症（包括非小细胞肺癌（NSCLC））的标准选择1,2,3,4。对于部分对传统细胞毒性化疗无反应的癌症患者，这类抗体显示出显著的治疗效果。然而，免疫检查点抑制剂（ICIs），包括PD-1阻断抗体，可能引发一类独特且多样的不良事件，称为免疫相关不良事件（irAEs）5。尽管irAEs几乎可累及所有组织，但最常出现在胃肠道、内分泌腺、皮肤和肝脏，可引起瘙痒、皮疹、恶心、腹泻以及甲状腺功能异常6,7。通常情况下，大多数irAEs出现在开始使用ICIs治疗后的1至2个月内。但在某些情况下，其发生时间可晚于治疗开始后1年，甚至在治疗停止后出现6,7。此外，irAEs可导致多种症状，可能难以与其他疾病相鉴别。因此，及时诊断irAEs并给予适当治疗具有挑战性。irAEs可影响全身各种组织，其发生与循环免疫细胞（尤其是结合了PD-1阻断抗体的T细胞）密切相关。因此，在临床实践中，建立一种简便且微创的方法来监测抗体靶向的T细胞具有重要意义。
在此，我们建立了一种简单的方法，利用接受纳武利尤单抗或帕博利珠单抗治疗的癌症患者外周全血一滴，评估PD-1阻断抗体与T细胞的结合情况。通过该方法，我们能够分别监测以下各项：1）抗体与T细胞结合的持续时间；2）治疗性抗体对T细胞PD-1分子的占据程度；3）T细胞的活化状态及免疫学特征。该方法是对先前报道技术的一种改进8。所需血液量几乎与血糖检测相当，且该方法无需单个核细胞富集，也无需与PD-1阻断抗体共培养。我们证实，该方法亦可用于冻存样本，包括外周血单个核细胞（PBMCs）以及胸腔积液、心包积液、支气管肺泡灌洗液和脑脊液中的细胞，提示该策略可能适用于多中心研究。该方法有助于免疫相关不良事件（irAEs）的早期诊断，帮助确定适当的免疫抑制治疗方案以控制其症状，并识别在PD-1抑制剂治疗后启动后续治疗的最佳时机。

<table><tbody><tr><td>10倍红细胞裂解缓冲液（多物种）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>00-4300-54</td><td>50 mL</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 抗人 CD4 抗体</td><td>BioLegend</td><td>300518</td><td>克隆株 RPA-T4</td></tr><tr><td>BD FACS Canto II 流式细胞仪</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 抗人 CD8a 抗体</td><td>BioLegend</td><td>301048</td><td>克隆株 RPA-T8</td></tr><tr><td>杜尔贝科磷酸盐缓冲液</td><td>nacalai tesque</td><td>14249-95</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Falcon 圆底聚苯乙烯管</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>352058</td><td>5 mL</td></tr><tr><td>人源 FcR 封闭试剂</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-059-901</td><td>2 mL</td></tr><tr><td>FLOWJO</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gibco 胎牛血清</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12676029</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>小鼠 IgG1 单克隆抗体 - 同型对照</td><td>abcam</td><td>ab81200</td><td></td></tr><tr><td>小鼠单克隆抗人 IgG4 Fc 抗体</td><td>abcam</td><td>ab99825</td><td>克隆株 HP6025</td></tr><tr><td>Pacific Blue 小鼠抗人 CD3 抗体</td><td>BD</td><td>558117</td><td>克隆株 UCHT1</td></tr><tr><td>PE-Cy7 小鼠抗人 CD279（PD-1）抗体</td><td>BD</td><td>561272</td><td>克隆株 EH12.1</td></tr><tr><td>PE-Cy7 小鼠 IgG1 &amp;kappa; 同型对照</td><td>BD</td><td>557646</td><td></td></tr></tbody></table>

监测来自一滴外周血的t细胞上结合的pd-1阻断抗体

Monitoring PD-1-Blocking Antibodies Bound to T Cells Derived from a Drop of Peripheral Blood

免疫检查点抑制剂，包括阻断PD-1的抗体，已显著改善多种癌症的治疗效果。由于这些免疫疗法在血液中具有持久的浓度，其药理作用持续时间较长，甚至在停止注射后仍可维持。本文中，我们建立了一种简单的流式细胞术检测方法，用于评估PD-1阻断抗体纳武利尤单抗（nivolumab）和帕博利珠单抗（pembrolizumab）在T细胞上的结合状态。该检测方法类似于血糖检测，仅需一滴外周血即可完成。相较于测定血液中抗体浓度，直接可视化抗体在T细胞上的结合情况更为可靠。此外，如有需要，我们还可对结合了PD-1阻断抗体的T细胞上多种不同的免疫相关标志物进行潜在分析。因此，这是一种简便且微创的策略，可用于分析癌症患者体内PD-1阻断抗体的药理作用。

门控策略与流式细胞术分析（图1）可检测来自非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血一滴血样本中T细胞上PD-1阻断抗体的结合情况。在给予PD-1阻断抗体之前，不存在人IgG4阳性的CD8或CD4 T细胞，而PD-1的表达可通过PD-1检测抗体（EH12.1）加以确认（图2A）。在给予纳武利尤单抗（nivolumab）或帕博利珠单抗（pembrolizumab）后，可通过抗IgG4抗体（HP6025）在T细胞上检测到IgG4（nivolumab、pembrolizumab），而PD-1检测抗体EH12.1则无法识别T细胞上的任何PD-1，因为治疗性PD-1抗体干扰了EH12.1的结合。这意味着我们是通过PD-1检测抗体结合缺失来间接测量PD-1阻断抗体的治疗性结合。代表性数据展示了PD-1阻断抗体不同的结合状态（图2A）。纳武利尤单抗和帕博利珠单抗在T细胞上对PD-1的结合与占据随时间推移而下降<s...

我们开发了一种简单的流式细胞术检测方法，用于评估PD-1阻断抗体与T细胞的结合，仅需癌症患者的少量外周血即可完成。

监测来自一滴外周血的T细胞上结合的PD-1阻断抗体

免疫检查点抑制剂，包括阻断PD-1的抗体，已在多种癌症的治疗中显著改善了治疗效果。

由于该方法使用患者的外周血来确定PD-1阻断抗体结合的细胞，因此可以鉴定出负责抗肿瘤效应和免疫相关不良事件的特定细胞亚群。该方法仅需极少量的血液样本，分析过程简便快捷，仅需一台流式细胞仪即可完成。首先，将全血样本采集至含有EDTA的采血管中。在每个5 mL圆底聚苯乙烯流式细胞术管中加入1 mL含2%胎牛血清的PBS溶液，涡旋振荡10秒。然后将20微升全血样本转移至已处理的5毫升圆底试管中。加入20微升含2% FBS的PBS溶液和10微升人源特异性FC受体阻断试剂。充分混匀，并在室温下孵育15分钟。接下来，加入500微升红细胞裂解缓冲液。充分混匀后，在室温下孵育10分钟。加入4毫升含2% FBS的PBS溶液，于4°C、400 × g离心5分钟。用移液法吸除上清液。重复洗涤和吸除操作。将细胞重悬于100微升含2% FBS的PBS中，并分至两个离心管中，每管50微升。加入表面标志物抗体，充分混匀，室温避光孵育20分钟。随后用含2% FBS的PBS洗涤样本两次，方法同前。用200微升含2% FBS的PBS重悬细胞。将试管插入流式细胞仪，按照推荐方案获取细胞。记录10,000个事件作为淋巴细胞门控，并将流式数据导出为FCS文件用于分析。在分析软件中打开文件，点击同型对照文件，通过前向散射光与侧向散射光图（FSC vs SSC）观察细胞，并圈选淋巴细胞群。使用FSCH与FSCW、SSCH与SSCW区分单细胞，并将其显示在CD3与CD8或CD3与CD4的散点图上。分别圈选CD8 T细胞和CD4 T细胞。选择门控细胞，并在PD-1与人IgG4图上显示。然后根据同型对照，选择Q3区域以鉴定与PD-1阻断抗体结合的CD8和CD4 T细胞。本研究中，通过门控策略和流式细胞术分析，检测到PD-1阻断抗体与患者外周血一滴血中获取的T细胞结合。PD-1 与人 IgG4 的图显示了 PD-1 阻断抗体在 T 细胞上的结合状态。橙色点和黑色点分别表示抗 IgG4 抗体和同型对照染色。在给予 PD-1 阻断抗体之前，不存在人 IgG4 阳性的 CD8 或 CD4 T 细胞，并通过 PD-1 检测抗体确认了 PD-1 的表达。在给予纳武利尤单抗或帕博利珠单抗后，可通过抗IgG4抗体在T细胞上检测到IgG4，而PD-1检测抗体EH12.1则无法识别T细胞上的任何PD-1。红色、蓝色和绿色门分别表示完全结合、部分结合和结合丧失。当患者停用纳武利尤单抗和帕博利珠单抗后，PD-1阻断抗体与CD8 T细胞结合的状态有所下降。出现了部分结合，最终完全丧失结合。请务必同时将血样与红细胞裂解液充分混匀。此外，在表面标志物染色前混匀红细胞裂解液是本方法的关键步骤。如果研究人员能够使用先进的流式细胞仪，可利用越来越多的标志物来评估与PD-1阻断抗体结合的T细胞。该策略可用于分析由PD-1阻断抗体引起的不良事件相关的T细胞表型。采集发生不良事件患者的样本对于评估该策略的有效性至关重要。

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医学

监测PD-1-阻断抗体绑定到T细胞派生从外周血滴

本文介绍一种在人外周血单个核细胞中诱导同种抗原特异性无应答的简单技术。该技术可应用于临床，以产生非同种反应性供体细胞。输注这些细胞可改善异基因造血干细胞移植后的免疫重建，并降低毒性反应。...

通过共刺激信号阻断的同种抗原刺激诱导人外周血单个核细胞中同种抗原特异性无应答性

本视频展示了一种基于流式细胞术的技术，使用两种荧光染料对人类外周血单个核细胞（PBMCs）中的 CD4+ 和 CD8+ T 细胞、γδ T 细胞、B...

一种用于鉴定外周血单个核细胞中免疫细胞亚群的流式细胞术检测方法

本文介绍了一种从脐带血中分离前体B细胞亚群的实验方案。可从这些细胞中提取足量且高质量的核酸，并用于后续基于DNA或RNA的检测分析。...

从脐带血中分离前体B细胞亚群

我们开发了一种 体外 用于研究免疫调节通路在HIV特异性CD4...

体外检测免疫调节通路对HIV特异性CD4 T细胞效应功能影响的实验方法

本文介绍了一种简单的方法，用于分离和流式细胞术分析胶质瘤浸润的外周血单个核细胞，该方法可获得随时间变化的定量数据，反映进入早期脑肿瘤微环境的免疫细胞数量及其活化状态。...

胶质瘤浸润性外周血单个核细胞的分离与流式细胞术分析

本方案描述了一种利用平面脂质双层研究原代多克隆人T细胞形成突触界面能力的技术。我们采用该技术展示了来源于淋巴结和外周血的人原代T细胞在突触形成能力上的差异。...

外周血和淋巴组织来源的人原代T细胞突触界面评估

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通过免疫荧光法对非小细胞肺癌患者循环肿瘤细胞进行半自动PD-L1表征与计数

本方案详细介绍了在临床试验现场可实际应用的高质量外周血单个核细胞（PBMC）和血浆生物样本的制备方法，可用于转化生物标志物分析。...

临床试验现场单次采血制备外周血单个核细胞团块及血浆用于生物标志物分析

细胞因子释放试验参考试剂的使用有助于实现更可重复和标准化的结果 体外...

使用参考试剂验证细胞因子释放检测的稳健性以预测单克隆抗体安全性

检查点抑制剂是开发抗癌疗法的重要靶点。本报告介绍了一种新型基于PDL1肽的癌症疫苗PDL1-Vaxx，该疫苗可诱导产生中和性多克隆抗体，阻断PD-1/PDL1复合物的形成。本研究还详细描述了用于分析该活性的荧光微球检测方法的开发与验证过程。...

基于磁性荧光微球的双报告系统流式分析PDL1-Vaxx多肽疫苗诱导的抗体对PD-1/PD-L1相互作用的阻断效应

本方案描述了一种利用表面等离子共振技术检测PD-1/PD-L1抑制剂的阻断实验。该方法采用两步固定策略和定制的缓冲体系，精确测量响应单位，从而便于评估化合物或生物制剂的阻断率。此外，该方法还支持对PD-1/PD-L1抑制剂进行高通量筛选。...

利用表面等离子共振技术鉴定PD-1/PD-L1抑制剂

了解如何使用流式细胞术检测外周血T细胞中PD-1阻断抗体的结合状态。该方法仅需微量血样即可快速识别与抗肿瘤效应和免疫相关不良事件相关的特定免疫细胞亚群。

监测来自一滴外周血的T细胞上结合的PD-1阻断抗体

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