Name: 通过四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤 （CCl4） 通过奥罗胃管暴露 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-04-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: 了解通过四氯化碳经口胃管暴露诱导大鼠急性肝损伤的实验方法。该技术利用Sprague-Dawley大鼠模型研究急性肝损伤病理生理机制及肝保护策略，为肝脏疾病治疗研究提供可靠平台。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

作者们衷心感谢内盖夫本-古里安大学健康科学学院索罗卡医疗中心病理科的 Bertha Delgado，她在实验室工作以及组织学分析中提供了帮助。

实验遵循《赫尔辛基宣言》和《东京宣言》的建议，以及欧洲共同体实验动物使用指南进行。实验经内盖夫本-古里安大学动物护理委员会批准。
注意：CCl4 模型已在先前的研究中建立并使用17。实验方案的时间线见表1。
1. 实验操作前大鼠的准备
注意：选择体重为 300−350 g 的成年雄性 Sprague Dawley 大鼠。
<ol>
	<li>获得机构动物护理和使用委员会（IACUC）对实验的批准。</li>
	<li>将大鼠饲养在室温（22 °C ± 1 °C）条件下，保持12小时光照与12小时黑暗的循环周期。自由供应大鼠饲料和饮水。</li>
	<li>所有实验均在上午6:00至中午12:00之间进行。</li>
	<li>剃除大鼠毛发，并用酒精对皮肤进行消毒。</li>
</ol>
2. 血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶和总胆红素基线水平的测定
<ol>
	<li>麻醉
	<ol>
		<li>准备持续异氟烷给药系统以诱导麻醉。确保蒸发器系统已充满异氟烷。</li>
		<li>使用2%异氟烷对大鼠进行麻醉。通过观察其对外部刺激的运动反应和足底反射，确认大鼠已完全麻醉。 
		注意：麻醉诱导和维持可使用1−5%异氟烷。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用22 G导管插入股静脉。</li>
	<li>在基线时采集0.5 mL血液样本。确保采集的血量不超过IACUC指南规定的限制。</li>
	<li>进行血液生化分析，包括血清GOT、GPT和TB的测定，方法如前所述18。 
	注意：肝酶和TB水平检测在索罗卡医学中心的生化实验室进行。使用化学分析仪通过荧光法对血液样本进行分析（材料表）。</li>
</ol>
3. 大鼠急性肝损伤的诱导
警告：暴露于高浓度的四氯化碳（CCl4）中，包括通过蒸气吸入或皮肤吸收，可能对中枢神经系统产生不良影响，并导致肝和肾的退行性病变。长期暴露可引起昏迷或死亡。
<ol>
	<li>通过将四氯化碳（CCl4）与橄榄油按1:1比例混合，配制50%的CCl4溶液（材料表）。 
	注：该溶液应根据IACUC关于非药用级化合物的指南进行配制。</li>
	<li>通过经口胃管给予CCl4，体内诱导肝毒性。
	<ol>
		<li>将一根16 G的经口胃管（插入深度3英寸）经口腔插入大鼠体内。</li>
		<li>使用注射器将以下稀释液之一注入大鼠胃内，使其暴露于不同剂量的CCl4：每千克体重1 mL（轻度急性肝损伤，ALI）、每千克体重2.5 mL（中度ALI）或每千克体重5 mL（重度ALI）的50%溶液。对于假手术对照组，仅给予每千克体重5 mL的橄榄油。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 24 小时后血清 GOT、GPT 和 TB 水平的测定
<ol>
	<li>麻醉
	<ol>
		<li>准备持续异氟烷给药系统以诱导麻醉。确保蒸发器系统内已充满异氟烷。</li>
		<li>使用2%异氟烷麻醉大鼠。通过观察大鼠对外界刺激的运动反应和足底反射，确认其已完全麻醉。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>在四氯化碳（CCl4）暴露后24小时采集血样。</li>
	<li>进行血液生化分析，包括测定血清谷草转氨酶（GOT）、谷丙转氨酶（GPT）和总胆红素（TB）。</li>
</ol>
5. 用于组织学检查的肝脏采集
<ol>
	<li>通过将吸入的气体混合物更换为20% O2/80% CO2处死大鼠。确保CO2按照IACUC指南以预定速率输送。</li>
	<li>通过检查无心跳迹象确认死亡，并依据IACUC指南采用第二种方法进行二次确认。</li>
	<li>将大鼠置于解剖板上，背侧朝下，腹侧朝上。剃除大鼠腹部的毛发。</li>
	<li>使用手术刀从肛门至下颌沿腹中线全长切开皮肤。分离皮肤后，用手术刀从肛门至剑突软骨切开腹壁，暴露腹腔内脏器。</li>
	<li>使用剪刀和镊子通过分离韧带和附着组织游离肝脏。从肝门开始，小心进行肝切除，逐一分离所有肝叶的附着结构。解剖并切断所有韧带和血管。</li>
	<li>将肝脏转移至培养皿中。用4%缓冲甲醛溶液（材料表）固定肝脏，至少固定24小时。</li>
</ol>
6. 组织学检查
<ol>
	<li>样品制备
	<ol>
		<li>固定后，使用切片机将样品切成 5 μm 厚的连续切片。</li>
		<li>用软毛刷将切片轻轻放置在载玻片上，每张载玻片放一片。</li>
		<li>按照先前所述方法进行 H&amp;#38;E 染色19。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用 20 mm 物镜（材料表）在显微镜下以 200 倍放大倍数观察切片。 
	注意：肝脏切片应由对治疗方案不知情的专职病理学家进行评分。评分为 0 表示无肝脏异常，1–2 分表示轻度肝损伤，3–4 分表示中度肝损伤，5–6 分表示重度肝损伤20,21,22。</li>
</ol>

<ol><li>Hoofnagle, J. H., Carithers, R. L., Shapiro, C., Ascher, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+hepatic+failure%3A+Summary+of+a+workshop%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Fulminant hepatic failure: Summary of a workshop.</a> Hepatology. 21 (1), 240-252 (1995).</li>
<li>Rakela, J., Lange, S. M., Ludwig, J., Baldus, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+hepatitis%3A+Mayo+clinic+experience+with+34+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clinic+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Fulminant hepatitis: Mayo clinic experience with 34 cases.</a> Mayo Clinic Proceedings. 60 (5), 289-292 (1985).</li>
<li>Riordan, S. M., Williams, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+hepatic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Treatment of hepatic encephalopathy.</a> New England Journal of Medicine. 337, 473-479 (1997).</li>
<li>Bernuau, J., Rueff, B., Benhamou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+and+subfulminant+liver+failure%3A+Definitions+and+causes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Liver+Disease%22%5BJournal%5D)">Fulminant and subfulminant liver failure: Definitions and causes.</a> Seminars in Liver Disease. 6 (2), 97-106 (1986).</li>
<li>Lidofsky, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+for+fulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation for fulminant hepatic failure.</a> Gastroenterology Clinics of North America. 22 (2), 257-269 (1993).</li>
<li>Auzinger, G., Wendon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intensive+care+management+of+acute+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+critical+care%22%5BJournal%5D)">Intensive care management of acute liver failure.</a> Current opinion in critical care. 14 (2), 179-188 (2008).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+regenerating+liver+after+partial+hepatectomy+from+carbon+tetrachloride+hepatotoxicity+in+rats%3A+Roles+of+mitochondrial+uncoupling+protein+2+and+ATP+stores%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+Diseases+and+Sciences%22%5BJournal%5D)">Protection of regenerating liver after partial hepatectomy from carbon tetrachloride hepatotoxicity in rats: Roles of mitochondrial uncoupling protein 2 and ATP stores.</a> Digestive Diseases and Sciences. 54 (9), 1918-1925 (2009).</li>
<li>Tuñón, M. J., Alvarez, M., Culebras, J. M., González-Gallego, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+animal+models+for+investigating+the+pathogenesis+and+therapeutic+strategies+in+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterologyl%22%5BJournal%5D)">An overview of animal models for investigating the pathogenesis and therapeutic strategies in acute hepatic failure.</a> World Journal of Gastroenterologyl. 15 (25), 3086-3098 (2009).</li>
<li>van de Kerkhove, M. P., Hoekstra, R., van Gulik, T. M., Chamuleau, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+animal+models+of+fulminant+hepatic+failure+in+artificial+and+bioartificial+liver+support+research%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Large animal models of fulminant hepatic failure in artificial and bioartificial liver support research.</a> Biomaterials. 25 (9), 1613-1625 (2004).</li>
<li>Butterworth, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+hepatic+encephalopathy%3A+ISHEN+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Experimental models of hepatic encephalopathy: ISHEN guidelines.</a> Liver International. 29 (6), 783-788 (2009).</li>
<li>Zhang, B., Gong, D., Mei, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+regenerating+liver+after+partial+hepatectomy+from+carbon+tetrachloride+hepatotoxicity+in+rats%3A+Role+of+hepatic+stimulator+substance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Protection of regenerating liver after partial hepatectomy from carbon tetrachloride hepatotoxicity in rats: Role of hepatic stimulator substance.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 14 (10), 1010-1017 (1999).</li>
<li>Ugazio, G., Danni, O., Milillo, P., Burdino, E., Congiu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+protection+against+carbon+tetrachloride+toxicity.+I.+prevention+of+lethal+effects+by+partial+surgical+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Mechanism of protection against carbon tetrachloride toxicity. I. prevention of lethal effects by partial surgical hepatectomy.</a> Drug and Chemical Toxicology. 5 (2), 115-124 (1982).</li>
<li>Taniguchi, M., Takeuchi, T., Nakatsuka, R., Watanabe, T., Sato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+process+in+acute+liver+injury+and+regeneration+induced+by+carbon+tetrachloride%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Science%22%5BJournal%5D)">Molecular process in acute liver injury and regeneration induced by carbon tetrachloride.</a> Life Science. 75 (13), 1539-1549 (2004).</li>
<li>Gordis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolites+of+carbon+tetrachloride%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolites of carbon tetrachloride.</a> Journal of Clinical Investigation. 48 (1), 203-209 (1969).</li>
<li>Albrecht, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+RNA+synthesis+in+experimental+hepatogenic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Cerebral RNA synthesis in experimental hepatogenic encephalopathy.</a> Journal of Neuroscience Research. 6 (4), 553-558 (1981).</li>
<li>Terblanche, J., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+fulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+Diseases+and+Sciences%22%5BJournal%5D)">Animal models of fulminant hepatic failure.</a> Digestive Diseases and Sciences. 36 (6), 770-774 (1991).</li>
<li>Gruenbaum, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+DNA+as+a+potential+marker+to+predict+carbon+tetrachloride-induced+acute+liver+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology+International%22%5BJournal%5D)">Cell-free DNA as a potential marker to predict carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats.</a> Hepatology International. 7 (2), 721-727 (2013).</li>
<li>Juricek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytical+evaluation+of+the+clinical+chemistry+analyzer+Olympus+AU2700+plus%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemia+Medica%22%5BJournal%5D)">Analytical evaluation of the clinical chemistry analyzer Olympus AU2700 plus.</a> Biochemia Medica. 20 (3), 334-340 (2010).</li>
<li>Feldman, A. T., Wolfe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+processing+and+hematoxylin+and+eosin+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue processing and hematoxylin and eosin staining.</a> Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+dehydrocavidine+on+carbon+tetrachloride-induced+acute+hepatotoxicity+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Protective effects of dehydrocavidine on carbon tetrachloride-induced acute hepatotoxicity in rats.</a> Journal of Ethnopharmacology. 117 (2), 300-308 (2008).</li>
<li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatoprotective+effects+of+coptidis+rhizoma+aqueous+extract+on+carbon+tetrachloride-induced+acute+liver+hepatotoxicity+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Hepatoprotective effects of coptidis rhizoma aqueous extract on carbon tetrachloride-induced acute liver hepatotoxicity in rats.</a> Journal of Ethnopharmacology. 124 (1), 130-136 (2009).</li>
<li>Wills, P. J., Asha, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+lygodium+flexuosum+%28L.%29+sw.+extract+against+carbon+tetrachloride-induced+acute+liver+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Protective effect of lygodium flexuosum (L.) sw. extract against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats.</a> Journal of Ethnopharmacology. 108 (3), 320-326 (2006).</li>
<li>Senior, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+for+hepatotoxicity%3A+What+is+the+predictive+value+of+liver+%22function%22+tests%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Monitoring for hepatotoxicity: What is the predictive value of liver "function" tests.</a> Clinical Pharmacology & Therapeutics. 85 (3), 331-334 (2009).</li>
<li>Karmen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+note+on+the+spectrometric+assay+of+glutamic-oxalacetic+transaminase+in+human+blood+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">A note on the spectrometric assay of glutamic-oxalacetic transaminase in human blood serum.</a> Journal of Clinical Investigation. 34 (1), 131-133 (1955).</li>
<li>Hubner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+liver+damage+caused+by+direct+action+of+carbon+tetrachloride+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Archiv+fur+Pathologische+Anatomie+und+Physiologie+und+fur+Klinische+Medizin%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural liver damage caused by direct action of carbon tetrachloride in vivo and in vitro.</a> Virchows Archiv fur Pathologische Anatomie und Physiologie und fur Klinische Medizin. 339 (3), 187-197 (1965).</li>
<li>Newsome, P. N., Plevris, J. N., Nelson, L. J., Hayes, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+fulminant+hepatic+failure%3A+A+critical+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Animal models of fulminant hepatic failure: A critical evaluation.</a> Liver Transplantation. 6 (1), 21-31 (2000).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

在本实验方案中，使用四氯化碳（CCl4）作为肝毒素在大鼠中诱导急性肝损伤（ALI）。急性肝损伤的特征是肝实质细胞的丧失，以及肝脏代谢和合成功能的继发性失调。药物、病毒、毒素、自身免疫性疾病、代谢性疾病和血管性疾病均可导致肝细胞死亡，继而引发的炎症反应参与了急性肝损伤的发病机制。
肝脏的初始损伤会引发细胞因子的产生、趋化因子的释放，进而导致炎性细胞浸润肝脏。急性肝损伤（ALI）评估中常用的三种生物标志物是GPT、GOT和TB水平。GPT和GOT是通过活性水平测定的酶，而TB水平则通过血清浓度来评估肝功能。当血清酶活性升高时，表明肝细胞或胆管上皮细胞受损23。快速分光光度法最早由Arthur Karmen于1955年报道24，该方法推动了血清酶活性检测在临床中的广泛应用。自此以后，GOT和GPT的检测也被用于识别肝细胞损伤。其中GPT使用更为频繁，同时检测GOT通常会得到重复性结果。根据受损细胞中GOT和GPT释放速率与清除速率之间活性水平的升高情况，可大致估算细胞损伤...

肝脏受到毒性损伤的频率日益增加，尤其是由酒精和药物滥用所致。急性肝损伤（ALI）具有较高的死亡率，已引起临床关注1,2。毒性损伤可激活肝脏中的细胞死亡信号通路，导致肝细胞发生凋亡、坏死或焦亡。ALI 在肝衰竭的发生发展中起关键作用，肝衰竭的特征是严重的肝功能障碍，包括肝性脑病和蛋白质合成能力受损等并发症3,4。尽管近期研究加深了我们对伴随肝衰竭发生的生理与病理变化的认识，但尚未完全阐明影响细胞死亡机制的病理分子特征。此外，目前尚无药物可用于逆转 ALI 患者的进行性恶化。当前唯一具有显著疗效的治疗方法是肝移植5,6。
为了研究急性肝损伤（ALI）的机制和病理生理学，并测试不同的肝保护策略，研究人员采用多种动物模型来诱导ALI。理想的ALI动物模型应通过一种可靠、经过验证、成本低廉且易于操作的方法，模拟疾病的病理过程。实验模型的示例包括肝毒性物质、手术操作（如全肝或部分肝切除）、完全或暂时性去血管化，以及感染性操作7,8,9。已知的肝毒性物质包括半乳糖胺、对乙酰氨基酚、硫代乙酰胺、偶氮甲烷和CCl4。其中，尽管CCl4尚未被充分表征，但其应用最为广泛10,11,12,13。
CCl4 是一种无色有机液体化合物，具有甜味，在较低温度下几乎不燃。暴露于高浓度的 CCl4 可对中枢神经系统造成损害，包括肝脏和肾脏功能退化。CCl4 通过在肝脏中的生物转化诱导急性肺损伤（ALI），该过程产生活性氧。这一反应由细胞色素 P450 酶 2E1 介导，生成具有活性的代谢产物，并通过大分子结合、增强脂质过氧化以及破坏细胞内钙稳态导致细胞损伤14。此外，CCl4 模型还可用于刺激星形胶质细胞在 RNA 合成水平的活动15。这种肝毒素已通过腹腔内、门静脉内、口服和胃内途径给药16。
在本实验方案中，我们详细描述了通过经口胃管给予四氯化碳（CCl4）在大鼠中诱导急性肝损伤（ALI）的方法。该方法可诱导出显著且可重复的急性肝损伤，适用于ALI发病机制的研究。肝病严重程度的评估通过检测血清谷氨酸-丙酮酸转氨酶（GPT）、谷草转氨酶&#160;（GOT）活性及总胆红素（TB）水平进行，并结合苏木精-伊红（H&amp;#38;E）染色肝组织的明确组织病理学诊断。通过经胃途径暴露于CCl4是一种操作简便、成本低廉、微创且风险较低的方法。

<table><tbody><tr><td>22 G 导管 BD Neoflon TM</td><td>Becton Dickinson Infusion Therapy AB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4% 缓冲甲醛溶液</td><td>Sigma - Aldrich 实验室材料技术</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Microtainer SST TM 管</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>四氯化碳</td><td>Sigma - Aldrich 实验室材料技术</td><td>CAS 56-23-5</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷，USP 100%</td><td>Piramal Critical Care, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Olympus AU2700 生化-免疫分析仪</td><td>Olympus (MN, USA)</td><td></td><td>血液样本分析采用荧光法进行</td></tr><tr><td>Olympus BX 40 显微镜</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>大鼠喂食针</td><td>ORCHID SCIENTIFICS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 和 2 ml 注射器套装 MEDI -PLUS</td><td>山东淄博山川医用器材有限公司</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

通过经口胃管暴露于四氯化碳（ccl4）在大鼠中诱导急性肝损伤

Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride (CCl4) Exposure Through an Orogastric Tube

急性肝损伤（ALI）在肝功能衰竭的发生发展中起着关键作用，其特征为严重的肝功能障碍，包括肝性脑病和蛋白质合成受损等并发症。合适的动物模型对于研究ALI的机制和病理生理过程，以及探索不同的肝保护策略至关重要。由于四氯化碳（CCl4）具有进行化学转化的能力，可通过产生活性氧物种在肝脏中广泛用于诱导ALI。CCl4暴露可通过腹腔注射、吸入或经口胃管给药。本文描述了一种通过口胃管给予CCl4诱导ALI的啮齿类动物模型。该方法成本低、操作简便，且危险性极小。该模型具有高度可重复性，可广泛用于评估潜在肝保护策略的有效性，并检测肝损伤标志物。

ALI 诱导 24 小时后，TB、GOT 和 GPT 水平显著升高（CCl 浓度越高，升高越明显）4 剂量）与假手术对照组相比（p &lt; 0.001) (图1）。TB、GOT 和 GPT 在基线时的水平正常，与假手术对照组相比无显著差异。在 24 小时时，所有三个干预组（1 mL/kg CCl₄4 (1, 1−2), 2.5 mL/kg CCl4 (3, 3−4) 和 5 mL/kg CCl4 (4, 4−5.75)，显著高于假手术对照组 (0, 0−0)（p &lt; 0.05，数据以中位数、25−75% 范围表示）。H&amp;假手术对照组的 E 图像（图2A) 以及暴露于不同 CCl4 剂量（图2B−D) 显示在 CCl 处理 24 小时后的组织病理学变化4 暴露。四氯化碳对肝细胞结构的...

本方案描述了一种通过四氯化碳（CCl₄）诱导急性肝损伤（ALI）的常见且可行的方法4 通过口服胃管暴露。CCl4 暴露通过在肝脏生物转化过程中产生活性氧物种诱导急性肝损伤（ALI）。该方法用于分析ALI的病理生理学机制，并评估不同的肝保护策略。

通过经口胃管暴露于四氯化碳（CCl4）在大鼠中诱导急性肝损伤

急性肝损伤（ALI）在肝衰竭的发生发展中起着关键作用，其特征为严重的肝功能障碍，包括……

我将介绍我们通过经口胃管暴露四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤的研究工作。选用体重为300至350克的成年雄性Sprague-Dawley大鼠。自由摄取大鼠饲料和水。所有实验均在上午6点至中午12点之间进行。本方案中使用的所有处理和测试程序均已获得以色列内盖夫本-古里安大学动物护理委员会的批准。将大鼠饲养在22°C室温条件下，采用12小时光照与12小时黑暗交替的循环周期。使用22号导管对尾静脉进行插管。在基线时采集血样。血液生化分析包括检测血清谷草转氨酶（GOT）、谷丙转氨酶（GPT）和总胆红素。肝酶及总胆红素水平的检测在索罗卡医疗中心的生化实验室进行。注意：接触高浓度四氯化碳（包括其蒸气或经皮肤吸收）可能影响中枢神经系统，导致肝肾损伤，长期暴露可能引发昏迷或死亡。将四氯化碳与橄榄油按1:1比例混合，配制50%的四氯化碳橄榄油溶液作为载体。通过口服胃管给予四氯化碳，以在体内诱导病理毒性。将口胃管插入大鼠的口腔。使大鼠暴露于不同剂量的四氯化碳。每公斤体重1毫升用于轻度急性肝损伤，每公斤体重2.5毫升用于中度急性肝损伤，或每公斤体重5毫升用于重度急性肝损伤。对于假手术组，仅给予每公斤体重5毫升的橄榄油。在四氯化碳暴露后24小时采集血液样本。血液生化分析包括测定血清谷草转氨酶（GOT）、谷丙转氨酶（GPT）和总胆红素水平。将死亡的大鼠背侧朝下放置于解剖板上，使腹部向上，剃除其腹部的毛发。使用解剖刀从肛门至下巴沿腹侧全长切开。剥离皮肤。用手术刀从肛门至剑突软骨切开腹壁，暴露腹腔内脏器。将肝脏转移至培养皿中。进行苏木精-伊红染色。使用20毫米物镜长度，在200倍显微镜放大倍数下观察切片。肝脏切片应由对治疗方案不知情的专职病理学家进行评分。评分为0表示无肝脏异常，1至2分表示轻度肝损伤，3至4分表示中度肝损伤，5至6分表示重度肝损伤。不同时间点的大鼠分组情况如图所示。在诱导急性肝损伤后24小时，与对照组相比，暴露于四氯化碳的各组大鼠谷草转氨酶（GOT）、谷丙转氨酶（GPT）及总胆红素水平均显著升高，P值小于0.001。在四氯化碳以不同剂量染毒后，所有组别在24小时后均观察到组织病理学改变。在24小时时，三个干预组与对照组之间的组织学评分显著升高，P值小于0.05。本研究团队介绍了通过经口胃管暴露四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤的常用且可靠的物理方法。该方法可用于研究急性肝损伤的病理生理机制，并用于测试不同的保护性干预策略。非常感谢您的关注。

inducing-acute-liver-injury-rats-via-carbon-tetrachloride-ccl4

Research

科研

JoVE Journal

Medicine

医学

通过四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤 （CCl4） 通过奥罗胃管暴露

胆汁流的中断会导致严重的炎症性胆汁淤积性肝损伤，并伴随特征性的时间依赖性形态学改变序列。本文介绍了一种在小鼠中进行总胆管结扎的手术方案，可在21至28天后诱导出显著的纤维化反应。...

小鼠胆管结扎术：通过阻塞性胆汁淤积诱导炎症性肝损伤及纤维化

我们介绍一种在大鼠中建立肝纤维化动物模型的方法，并通过肝脏组织学检查评估纤维化程度。该模型可用于研究肝脏疾病的发展过程，以及检测潜在抗纤维化药物的疗效。...

大鼠二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化模型

本方案在小鼠中诱导急性肺损伤，其病理发生过程与人类观察到的酸性肺炎高度相似。我们通过开放式气管造口术结合环周压力释放，产生最大程度的急性非致死性低pH肺损伤，并考虑了啮齿类与人类在呼吸系统解剖结构上的差异。...

开放气管切开胃酸误吸小鼠急性肺损伤模型可诱导最大程度的急性非致死性肺损伤

建立了一种独特的大鼠肝脏肝门阻断模型，用于研究药物分子在减轻缺血-再灌注损伤中的作用。该模型通过门静脉分支对缺血肝段的门脉供血进行直接插管，从而实现肝脏的直接给药。...

利用大鼠肝门阻断模型进行肝内节段性直接给药的方法

本文介绍了一种通过喂食胆碱缺乏且添加乙硫氨酸（CDE）的饮食来诱导小鼠慢性肝损伤的常用方法。我们展示了健康监测、肝脏灌注、分离与保存的操作过程。为期六周的时间进程可用于评估肝损伤、病理组织学、纤维化、炎症反应以及肝前体细胞的应答情况。...

小鼠胆碱缺乏、乙硫氨酸补充（CDE）饮食慢性肝损伤模型

本文介绍了一种通过直接气管内滴注脂多糖在小鼠中诱导急性肺损伤的逐步操作方法，以及对血液样本、支气管肺泡灌洗液和肺组织进行流式细胞术分析的方法。该方法具有侵入性小、操作简便、可重复性好以及可滴定疾病严重程度等优点。...

通过直接气管内滴注脂多糖在小鼠中诱导急性肺损伤

本研究建立的急性肝衰竭动物模型为潜在疗法的研究提供了一种可行的替代方案。该模型结合了物理性和药物诱导性肝损伤的双重效应，为研究新型疗法的潜力提供了合适的时间窗口。...

结合70%部分肝切除与对乙酰氨基酚建立大鼠急性肝衰竭模型

本实验方案的目标是建立一种低水平毒物暴露的小鼠模型，该模型不会引起明显的肝损伤，而是加剧已存在的肝脏损害。这一范式能更好地模拟人类对毒物的暴露情况，以及在接触被认为安全浓度的毒物后所发生的细微变化。...

氯乙烯与高脂饮食作为环境与肥胖相互作用的模型

重症急性胰腺炎的动物模型可用于研究疾病初始阶段的病理生理变化，有助于观察炎症事件的发展过程。本文提供了一种通过逆行输注牛磺胆酸钠至麻醉C57BL/6小鼠胰管以诱导重症急性胆源性胰腺炎的实验方案。...

C57BL/6小鼠中牛磺胆酸钠诱导的重度急性胰腺炎

急性心肌梗死（AMI）的大鼠模型可用于研究心肌梗死对心脏病理生理学和生理功能的影响。...

大鼠急性心肌梗死模型

了解通过四氯化碳经口胃管暴露诱导大鼠急性肝损伤的实验方法。该技术利用Sprague-Dawley大鼠模型研究急性肝损伤病理生理机制及肝保护策略，为肝脏疾病治疗研究提供可靠平台。

通过经口胃管暴露于四氯化碳（CCl₄）在大鼠中诱导急性肝损伤

探索更多视频