Name: 使用全载免疫作用化学和三维重建对咽弓动脉的可视化与分析 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: 学习全载免疫荧光、组织透明化和三维重建技术，用于小鼠胚胎咽弓动脉的可视化与内皮细胞定量分析。该方法有助于研究血管发育及先天性心脏病的突变机制。

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感谢Brianna Alexander、Caolan O'Donnell和Michael Warkala对本文稿的仔细审阅与编辑。本研究工作得到了美国国立卫生研究院心肺血液研究所（National Heart, Lung and Blood Institute of the NIH）的资助，项目编号为R01 HL103920、R01 HL134935、R21 OD025323-01，资助对象为SA；AJR受到NHLBI HL103920-08S1以及国家关节炎与肌肉骨骼和皮肤病研究所培训基金T32052283-11的支持。

<ol><li>Hiruma, T., Nakajima, Y., Nakamura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+pharyngeal+arch+arteries+in+early+mouse+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Development of pharyngeal arch arteries in early mouse embryo.</a> Journal of Anatomy. 201 (1), 15-29 (2002).</li>
<li>Hutson, M. R., Kirby, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+systems+for+the+study+of+heart+development+and+disease+Cardiac+neural+crest+and+conotruncal+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Model systems for the study of heart development and disease Cardiac neural crest and conotruncal malformations.</a> Seminars in Cell & Developmental Biology. 18 (1), 101-110 (2007).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelium+in+the+pharyngeal+arches+3%2C+4+and+6+is+derived+from+the+second+heart+field%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Endothelium in the pharyngeal arches 3, 4 and 6 is derived from the second heart field.</a> Developmental Biology. 421 (2), 108-117 (2017).</li>
<li>Jerome, L. A., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DiGeorge+syndrome+phenotype+in+mice+mutant+for+the+T-box+gene%2C+Tbx1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">DiGeorge syndrome phenotype in mice mutant for the T-box gene, Tbx1.</a> Nature Genetics. 27 (3), 286-291 (2001).</li>
<li>Lindsay, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tbx1+haploinsufficieny+in+the+DiGeorge+syndrome+region+causes+aortic+arch+defects+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tbx1 haploinsufficieny in the DiGeorge syndrome region causes aortic arch defects in mice.</a> Nature. 410 (6824), 97-101 (2001).</li>
<li>Weninger, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualising+the+Cardiovascular+System+of+Embryos+of+Biomedical+Model+Organisms+with+High+Resolution+Episcopic+Microscopy+%28HREM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Development+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Visualising the Cardiovascular System of Embryos of Biomedical Model Organisms with High Resolution Episcopic Microscopy (HREM).</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 5 (4), 58(2018).</li>
<li>Phillips, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax9+is+required+for+cardiovascular+development+and+interacts+with+Tbx1+in+the+pharyngeal+endoderm+to+control+4th+pharyngeal+arch+artery+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Pax9 is required for cardiovascular development and interacts with Tbx1 in the pharyngeal endoderm to control 4th pharyngeal arch artery morphogenesis.</a> Development. 146 (18), (2019).</li>
<li>Vlaeminck-Guillem, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ets+family+member+Erg+gene+is+expressed+in+mesodermal+tissues+and+neural+crests+at+fundamental+steps+during+mouse+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">The Ets family member Erg gene is expressed in mesodermal tissues and neural crests at fundamental steps during mouse embryogenesis.</a> Mechanisms of Development. 91 (1-2), 331-335 (2000).</li>
<li>Ertürk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+imaging+of+the+unsectioned+adult+spinal+cord+to+assess+axon+regeneration+and+glial+responses+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional imaging of the unsectioned adult spinal cord to assess axon regeneration and glial responses after injury.</a> Nature Medicine. 18 (1), 166-217 (2012).</li>
<li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li>
<li>Richardson, D. S., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clarifying+Tissue+Clearing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Clarifying Tissue Clearing.</a> Cell. 162 (2), 246-257 (2015).</li>
<li>Becker, K., Jährling, N., Saghafi, S., Weiler, R., Dodt, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+Clearing+and+Dehydration+of+GFP+Expressing+Mouse+Brains%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical Clearing and Dehydration of GFP Expressing Mouse Brains.</a> PLoS One. 7 (3), e33916(2012).</li>
<li>Ertürk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nature Protocols. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li>
<li>Kuwajima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ClearT%3A+a+detergent-+and+solvent-free+clearing+method+for+neuronal+and+non-neuronal+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">ClearT: a detergent- and solvent-free clearing method for neuronal and non-neuronal tissue.</a> Development. 140 (6), 1364-1368 (2013).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

以三维形式可视化小鼠胚胎中的内皮细胞，为研究其发育过程提供了新的见解3。本文介绍了一种可用于实现胚胎高分辨率三维成像、血管连接性可视化以及咽弓动脉（PAA）形成定量分析的实验方案。该方案可用于研究基因改变或环境损伤对PAA发育的影响。本方案中使用针对VEGFR2和ERG的抗体来观察PAA的形成并定量内皮细胞（EC）数量；然而，也可使用其他抗体来可视化和分析咽弓动脉发育的其他方面，例如神经嵴细胞的募集或平滑肌细胞的分化。如果将该方法应用于胚胎发生的较早阶段，需注意本方案中检测的一些抗原（如ERG）可能尚未表达。此时可使用其他细胞核染料（如DAPI或DRAQ5）或带有核标记的谱系示踪剂进行标记，以实现对EC数量的定量。
该方案中有几个关键步骤：必须确保 1）在更换溶液过程中胚胎不会干燥；2）抗体孵育后胚胎被充分洗涤；以及 3）在使用 BABB 进行组织透明化之前，胚胎已用甲醇（MeOH）完全脱水。
组织透明化前的甲醇洗涤具有两个目的：消除胚胎中因荧光蛋白（例如用于谱系示踪的EGFP或...

在小鼠胚胎发育过程中，咽弓动脉（PAAs）以对称的双侧成对动脉形式出现，连接心脏与背主动脉1随着胚胎发育，第一对和第二对动脉弓退化，而第三对rd, 4th，以及6th PAAs 经历一系列不对称重塑事件，形成主动脉弓动脉2.
第3、4和6对咽弓动脉（PAAs）通过血管发生（vasculogenesis）形成，即血管的从头生成3。这些弓动脉在形成或重塑过程中出现缺陷，可导致多种先天性心脏病，例如DiGeorge综合征患者所表现出的畸形4,5。因此，阐明调控PAAs发育的机制，有助于更深入理解先天性心脏病（CHD）的病因学。
目前用于可视化和分析咽弓动脉（PAA）发育的方法包括组织切片的免疫荧光染色、血管铸型、印度墨水注射、高分辨率表层显微成像以及/或者整体免疫组织化学染色1,4,5,6,7。本文中，我们描述了一种结合整体免疫荧光染色、共聚焦显微镜和三维图像重建的技术流程，以获取、分析并定量体积数据、血管连接性及细胞身份信息。此外，我们详细阐述了一种对每个咽弓中的内皮细胞（ECs）进行分区和定量的方法，用以研究咽弓血管网的形成及其向咽弓动脉（PAAs）的重塑过程。尽管该方案旨在分析咽弓动脉的发育过程，但也可用于研究其他正在发育的血管网络。

<table><tbody><tr><td>10x PBS</td><td>MP Biomedicals</td><td>PBS10X02</td><td></td></tr><tr><td>20x 浸水物镜</td><td>Nikon</td><td>MRD77200</td><td></td></tr><tr><td>琼脂糖</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>1613101</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 抗山羊抗体</td><td>Invitrogen</td><td>A-11055</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 抗小鼠抗体</td><td>Invitrogen</td><td>A-31570</td><td></td></tr><tr><td>分析软件</td><td>Imaris 9.2.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>苯甲醇</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>305197</td><td></td></tr><tr><td>苯甲酸苄酯</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>8.18701.0100</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td>VWR</td><td>16004-312</td><td></td></tr><tr><td>DAPI（5 mg/mL 储存液）</td><td>Fisher Scientific</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 管（2.0 mL）</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-138</td><td></td></tr><tr><td>乙醇</td><td>VWR</td><td>89370-084</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 管（50 mL）</td><td>Corning</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>快速培养小室</td><td>Grace Bio Labs</td><td>664113</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>Roboz</td><td>RS-5015</td><td></td></tr><tr><td>山羊抗 VEGFR2 抗体</td><td>R&amp;D Systems, Inc.</td><td>AF644</td><td></td></tr><tr><td>甲醇</td><td>VWR</td><td>BDH1135-4LP</td><td></td></tr><tr><td>显微镜</td><td>Nikon</td><td>A1HD25</td><td></td></tr><tr><td>小鼠抗 ERG 抗体</td><td>Abcam</td><td>ab214341</td><td></td></tr><tr><td>正常驴血清</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>多聚甲醛</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>巴斯德吸管</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20D</td><td></td></tr><tr><td>培养皿（35 mm）</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-103</td><td></td></tr><tr><td>培养皿（60 mm）</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-105</td><td></td></tr><tr><td>塑料模具</td><td>VWR</td><td>18000-128</td><td></td></tr><tr><td>解剖刀片</td><td>Exelint International Co.</td><td>29552</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP 151-500</td><td></td></tr></tbody></table>

利用整体免疫组织化学与三维重建技术对咽弓动脉进行可视化与分析

Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction

咽弓动脉（PAAs）3、4和6的形成异常或重塑缺陷导致了部分最严重类型的先天性心脏病。为了研究PAAs的形成过程，我们建立了一种结合整体免疫荧光染色、苯甲醇/苯甲酸苄酯（BABB）组织透明化处理以及共聚焦显微镜成像的实验方案。该方法能够以较高的细胞分辨率清晰显示咽弓动脉的内皮结构，并呈现血管系统的三维连接关系。通过软件分析，我们进一步建立了定量评估PAAs中内皮细胞（ECs）数量的方法，同时可定量分析位于第3、4和6咽弓内PAAs周围血管网状结构中的内皮细胞数量。该技术应用于整个胚胎时，可实现对胚胎血管系统的全面可视化观察与定量分析。

本文所展示的全胚胎免疫荧光染色方案可产生清晰且干净的结果，可用于咽弓血管内皮的三维重建，如图1A所示。每个抗体孵育步骤中，必须保证胚胎有足够的孵育时间，以确保抗体充分渗透至整个样本，同时在抗体孵育后需对胚胎进行彻底清洗。图1B中出现的大而明亮的点状信号，是由于抗体或封闭缓冲液中存在颗粒物所致。我们发现，在使用前对每种溶液进行离心处理，并在每次抗体孵育后延长PBST洗涤时间，可有效解决此问题。
图2展示了用于暴露咽弓及咽囊（PAA）以进行分析的操作流程，该流程在方案第7节中有详细描述。通过使用掩膜功能，Imaris软件可将已构建表面的区域在视觉上分离，并实现独立分析。
<p class="jove_co...

本文介绍了一种利用整体免疫荧光染色、组织透明化、共聚焦显微镜和三维重建技术对小鼠胚胎的第3、4和6对咽弓动脉进行可视化与分析的实验方案。

第3、4和6对咽弓动脉（PAAs）形成异常或重塑障碍导致了部分最严重类型的先天性心脏病...

该方法可将每个咽弓进行区室化处理，随后可在每个咽弓中定量内皮细胞数量，以研究咽弓动脉的发育过程。该方法的主要优势在于能够直观显示不同血管结构之间的相互关系，并能够定量分析这些结构在突变体中的受影响情况。主动脉弓动脉在先天性心脏病中常发生突变。我们的方法可用于研究突变如何影响血管形成与重塑的生理过程。尽管我们使用该方法来深入了解先天性心脏病的机制，但随着光片显微镜的发展，该方法也可应用于其他系统。首先使用玻璃移液管将每只小鼠胚胎第9.5天或10.5天的胚胎转移至含有1毫升PBS的单独2毫升离心管中。固定后，用精细镊子在后肢上方轻轻夹住胚胎，并进行横向切割以去除胚胎的后半部分。为了使胚胎通透，将PBS更换为PBST，并将胚胎置于4°C条件下轻轻振荡过夜。第二天，轻轻移除 PBST，每管加入 600 微升封闭缓冲液，避免触碰胚胎，在 4 摄氏度下轻柔振荡孵育 16 至 18 小时。次日早晨，将封闭缓冲液替换为每管 600 微升的目标一抗溶液，在 4 摄氏度下轻柔振荡孵育 4 至 5 天。孵育结束后，在室温下用 1 毫升 PBST 轻柔振荡洗涤胚胎 4 至 5 小时，每小时更换一次 PBS；随后在 4 摄氏度下用新鲜 PBST 过夜孵育，并于次日再进行 4 至 5 次每次一小时的洗涤。最后一次洗涤后，将每管中的 PBST 替换为 600 微升相应的二抗溶液，在 4 摄氏度下孵育四至五天。孵育结束后，如前所述，每次用 1 毫升新鲜 PBST 洗涤胚胎，并用玻璃移液器将每个胚胎轻柔地转移至单独的塑料石蜡模具中。小心移除胚胎周围的 PBST，并将每个胚胎调整为矢状位。然后迅速向每个模具中加入约 500 µL 热琼脂糖，直至每个胚胎刚好被覆盖，并将模具置于覆盖铝箔的冰上，直到琼脂糖完全凝固。对于胚胎样品的脱水处理，使用洁净的解剖刀在每个胚胎周围切下一块琼脂糖块，并用镊子夹取琼脂糖块，转移至含有 1 mL 25%甲醇的已标记 2 mL 离心管中。在避光条件下轻轻振荡孵育 1 小时后，将每管中的 25%甲醇更换为 1 mL 50%甲醇，继续在避光条件下孵育 1 小时。脱水结束后，将100%甲醇替换为1毫升50%BABB，于避光条件下轻柔振荡孵育1小时。孵育结束后，将50%BABB替换为每管1毫升100%BABB，于避光条件下轻柔振荡孵育1小时，随后按照上述方法进行第二次100%BABB孵育。为胚胎成像做封片准备时，从快速固定垫圈上移除粘合剂，并将该垫圈放置于24乘6毫升的1.5号玻璃盖玻片上。轻轻按压粘合剂，以去除盖玻片与缓冲垫之间的任何气泡，并小心弃去各管中的100% BABB。然后使用精细镊子小心地将胚胎转移至快速孔中，避免触碰胚胎，并将第二块盖玻片放置在缓冲垫上。为对整个第三咽弓的内皮进行表面成像，于软件中打开目标图像，点击“添加新表面”。双击表面一，将新表面重命名为第三咽弓。选择跳过自动创建，手动编辑，并将表面方向设置为 YZ 平面。使用切片位置将第三咽弓表面平面放置在第三对咽动脉与背主动脉连接处。旋转图像，使第三咽弓的表面平面可见，并关闭正交切片器。在绘制轮廓模式下，选择距离绘制模式功能，并根据需要调整参数设置。当所有参数设置完成后，按下 Esc 键，然后单击“绘制”，使用鼠标光标勾画第三咽弓的轮廓边界。然后使用切片位置移动 10 到 25 个切片，并描记咽弓的周长。当整个咽弓描记完成后，单击“创建表面”以生成所描记区域的表面结构。对于已生成表面结构的区域进行掩膜处理，在编辑菜单中选择第三咽弓动脉和 DAPI 的掩膜选区，然后单击“确定”。随后将新通道重命名为 PAA DAPI。对剩余通道重复此步骤。若要将内皮网状结构与PAA分别可视化，请选择第三个PAA的掩膜，并选择DAPI。取消勾选“选择表面外部体素”，并勾选“选择表面内部体素”。将表面内部选定的体素设为零，然后点击确定。将新通道重命名为 non-PAA DAPI。对剩余通道重复此步骤。选择第三个 PA 的掩膜选择，并选择 non-PAA DAPI，然后点击确定。将新通道重命名为 plexus DAPI。对剩余通道重复此步骤。为了量化每个感兴趣结构内的单个内皮细胞，在显示调整面板中，关闭除 PAA ERG 通道外的所有通道。在属性菜单下，点击“添加新斑点”，并将其重命名为“PAA 内皮细胞总数”。单击蓝色箭头，为源通道选择 PAA ERG 通道。将估计的 XY 直径调整为四微米，然后单击蓝色箭头进入下一个面板。使用滑动标尺调整斑点数量，确保每个 ERG 阳性的内皮细胞核均由一个斑点表示。接下来，单击绿色双箭头，在显示调节面板中关闭 PAA ERG 通道。开启 PAA VEGFR2 通道以显示 PAA 内皮结构，然后单击“编辑”并选择“添加/删除”，进而选择物体表面。随后按 Esc 键并按住 Shift 键，删除所有 VEGFR2 阴性的信号点，再单击“统计”标签以确定内皮细胞的总数。整体免疫荧光染色可产生清晰干净的结果，从而实现咽弓内皮的三维重建。在本图像中，大而明亮的点状结构的出现是由于抗体或封闭缓冲液中存在颗粒物。在完成咽弓及PA血管表面染色后，使用掩膜功能可将表面区域在视觉上分离，并进行独立分析。掩膜技术还可实现对每种结构内内皮细胞数量的单独分析与定量。例如，在此使用斑点功能，通过为表达 ERG 的每个细胞核分配一个单独的斑点，来定量 PAA 和血管网中的内皮细胞总数。在此图像中，可观察到由斑点功能生成的一个 ERG 阳性而 VEGFR2 阴性的斑点。因此，必须验证软件识别的每个点确实代表一个单独的内皮细胞。为了获得清晰干净的图像，请记得将所有溶液离心沉淀，并在每次抗体孵育后对每个胚胎进行彻底且充分的洗涤。需要注意的是，BABB 具有腐蚀性和毒性。妥善处理并丢弃溶剂，并确保完全密封已融化的胚胎，防止BABB渗漏。

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