经过验证的LC-MS/MS面板，用于在小头发样本中量化11种耐药结核病药物

患者的坚持是非常具有挑战性的，药物代谢可以改变人，所以客观测量药物水平可能证明是重要的，以防止在结核病治疗期间出现耐药性。如果坚持可以更准确和容易量化，那么卫生保健提供者可以制定一个治疗计划，将限制耐药性的发展。我们开发了第一个多分析物质谱仪面板，用于在单个检测中小头发样本中的多种结核病药物。

我们的多药面板只需要每个患者一个两毫克的样品，并且既不使用固相提取，也不使用过滤步骤来防止样品量的任何损失。在治疗过程早期测量的药物暴露的客观测量可能会提醒临床医生治疗方案中个别药物的问题。头发样本必须在分析当天进行粉碎，以进行准确的药物浓度测量。

要获得头发样本，在获得书面知情同意后，准备好材料，包括一个薄标签，两个参与者标签，一把剪刀，一块展开的铝箔，酒精擦拭和一个塑料袋。用酒精擦拭将剪刀的刀片擦干净。转到头部的背面，如果需要，请使用发夹抬起头发的顶部。

从后部收集30缕头发，用手隔离吹毛。把剪刀拿到头皮上，剪头发的毛草。小心地把毛发放在铝箔上。

将薄标签贴在毛草的端端上，安全地贴在铝箔上。远端是离头皮最远的一面。折叠在头发吹毛上一块铝箔上，并在铝箔上贴上参与者标签。

将折叠的铝箔放入塑料袋中，并在塑料袋上贴上另一个参与者标签。对于从头发样本中提取药物，将每个头发样本的两毫克称重到单独标记的珠管中，将两毫克的空白头发样本重入 16 个附加珠管中。称重后，将所有珠管放入珠磨机均质器中，以 6.95 米/秒的速度均质样品，进行两个 30 秒的循环，每个周期之间休息 15 秒。

第二次均质化后，在每个样品中加入500微升适当的内部标准混合物，并在基质空白管中加入500微升甲醇。根据表格将校准曲线管与适当体积的参考标准混合，将所有管放在37度水浴中，轻轻摇动两小时。在孵育结束时，将上经剂从每个珠管转移到新的标记微离心管中，并在珠管中加入500微升甲醇。

涡珠管，将甲醇洗涤转移到相应的微离心管。将样品离心，小心地将超自然剂转移到新管中，而不会干扰头发颗粒。将管中的液体蒸发至32摄氏度的干燥，用200微升高压液相色谱级水与1%的甲酸重新组成样品。

涡旋后，使用 250 微升刀片将液体样品转移到琥珀小瓶中。对于液相色谱串联质谱法，首先将2至100毫米的柱体安装为2.5微米粒径和100个安格斯孔径，用极端乙醚链接酚珠完全由多孔二氧化硅组成进入柱室。确认该列还安装了制造商推荐的防护盒。

复制并粘贴 MDR-TB LCMS 方法转换中包含的复合信息。csv 文件进入质规格窗口中的框中。在电子表格中，创建校准曲线、质量控制、患者样本、校准曲线、质量控制、患者样本、校准曲线和质量控制的批次序列。

在跑步的开始和结束以及校准曲线、质量控制和患者样本之前和之后添加溶剂空白注射。然后在校准曲线和高质量控制小瓶中的注射中至少放置8个溶剂空白注射，以减少分析性结转。批次完成后，打开量化软件。

滚动转换以确保自动选择的保留时间准确无误，并检查高斯平滑设置为 1.5。接下来，单击显示校准曲线和回归，然后将等待类型设置为超过 x 的类型。单击"确定"并验证校准曲线和质量控制样本，以确保批次成功运行。

对于每个限定符参考分析，至少三分之二的校准点必须在 80-120% 内具有精度检查校准曲线上方显示的 R 值是否大于 0.975。如果满足上述所有条件，则批次已通过，样本可以量化。单击工具栏中的"编辑"，然后单击"复制整个表"。

然后将表格粘贴到电子表格中，并使用两次样品注射的计算浓度平均值来确定每个样品的报告浓度。图为所有测试的11种耐药结核病药物的色谱图，其确认水平。在这些数字中，可以观察到其中一种校准器中特定药物的离子色谱图。

限定符和限定符转换用于定性地确认药物的存在，因为限定符区域与限定符区域之间的比率在样本中保持不变。内部标准也得到监控，以确保每个样品注射都得到规范化。在这项分析中，对南非西开普省直接观察到的治疗条件下服用耐药结核病药物的96名患者的总数中15个头发样本进行了方便抽样评估，以确定每种分析剂最低和最高水平的耐药结核病药物的代表性水平。

在没有固相提取或过滤步骤的情况下，在将上流液转移到蒸发管时应小心。任何转移到管子中的东西最终都可以被注射到柱子中。由于珠子猛禽的转子可以飞走，如果没有紧密拧或锁定，请务必在操作前仔细检查转子。

与艾滋病毒领域的抗逆转录病毒药物相比，结核病药物药代动力学、坚持和临床结果之间的关系在很大程度上仍未得到研究。我们假设一些结核药物在头发上积累得不好。瞄准这些药物的代谢物，可以更好地了解患者的依从性。