在小鼠的文室内使用光遗传学的两种不同的实时位置偏好范式

我们在这里提供了一个详细的协议，用于评估特定大脑区域的基因刺激的有益或逆转特性。如果刺激特定细胞是有益的或逆向的，这项技术可以迅速回答。我们描述了刺激腹体区域的设置，但我们的协议可以很容易地适应改变不同区域的特定参数。

首先，使用单板微控制器来控制激光源。使用适当的连接到计算机的连接电缆在微控制器板上加载脚本。该脚本包括来自跟踪软件通过 TTL 框的外部调制，以及激光器的输出以控制刺激参数。

使用网络电缆将 TTL 盒连接到电路板。确保激光器设置为通过外部调制进行控制，并使用 FC/PC 电缆将激光器连接到电路板。将适当的引脚连接到电路板的接地部件。

要将激光源连接到光纤，请首先将激光源连接到旋转接头。将配线连接到旋转接头。稳定设备上方的旋转接头，但在记录区域之外。

确保光纤配线的长度合适，使鼠标在竞技场上毫无困难地移动。要校准竞技场设置，请使用标尺测量物理设备的特定部分。在软件中，绘制一条与测量的零件对应的线。

在"绘制缩放以校准"选项卡下，输入已知值。设计竞技场，绘制记录小鼠运动的区域。创建区域，绘制最终将被指定为激光配对、激光未配对和中性的区域。

按"验证设置"按钮以验证设置，以确认没有冲突参数，例如竞技场外的区域。确保已启用硬件控制，并将实验时间设置为 30 分钟，以重复平铺选项在参考框设置中。将隔间分配为激光配对，其中鼠标的输入将在条件设置下通过跟踪软件触发 TTL 信号到微控制器板。

若要修改中性隔间首选项方法的设置，在竞技场和时间设置后，通过添加中心点位于任何区域 A 和 B 区域 B 中时，将 A 和 B 区域指定为激光配对，以表示与 A 和 B 隔间设置相关的条件框。要设置检测设置，请使用虚拟计算机类似于鼠标。将假人放在仪器的一个隔间中，并使用动态减法的自动设置。

取出假人并将其放在对面的隔间中。确保已完全检测到假人。将假人放在激光配对隔间中。

要检查刺激是否有效，请使用以前配置的试用控制设置开始采集，并查看是否按应触发刺激。然后将假人放在未配对的隔间或中性隔间中，看看刺激是否停止。使用激光上的旋钮将激光功率设置为 10 毫瓦。

使用陶瓷套管将光纤植入物连接到光纤配线，然后将鼠标放在三室仪器的中性隔间中。等待，直到软件检测到鼠标。拆下限制动物进入主隔间的垂直滑动门。

允许动物自由探索，没有任何干扰。整个实时地点偏好实验在八个会话中进行。在腹体区域注射了AAV通道RHodopsinEYFP病毒的DAT-Cre小鼠被检测为靶向多巴胺神经元。

小鼠平均约70%的时间在激光配对的隔间中，而未配对的隔间为20%，中性隔间为10%。在腹间区域注射了AV通道rhodopsinEYFP的Vglut2-Cre小鼠。老鼠避开了与刺激配对的隔间，并花了更多的时间在未配对的隔间。在条件反应的第五天和第八天，小鼠没有表现出明显避免以前配对的隔间。

为了进一步证明特定神经元的有益或抗作用，所述方法可以与其他方法（如雌激素范式或光遗传亚时等）相加。处理病毒和使用激光源时要注意。