使用纳米-牛顿分辨率力转换器从骨骼肌肉活检中隔离肌异物并确定收缩函数

此处介绍的是一个协议，用于评估具有纳米-牛顿分辨率的条纹肌肉肌异半孔的收缩特性。该协议采用基于干涉测量的光学力探头的设置。此设置生成具有高信噪比的数据，并可评估 myofibril 的收缩动力学。

评估从条纹肌肉分离出的肌异体体收缩特性可用于确定沙康利功能障碍是否是由于沙康蛋白突变导致肌肉无力的主要原因。该技术可用于获取具有非常高信噪比的数据，具有纳米新分辨率。该协议也适合测量渗透性心肌细胞的收缩性。

请记住，力传感器非常脆弱。因此，当从安装针上去除胶水或粘合肌黄素时，你需要有一个稳定的手，大量的练习，和大量的耐心。在安装组织之前，在含有肌肉组织的管子中放置一个均质棒。

保持管子在冰上，旋转转子15秒的速度5。在均质结束时，将产生的肌黄纤维悬浮液的 50 微升和 250 微升的放松溶液转移到组织浴中的多 HEMA 涂层幻灯片上。用盖子盖住浴缸，保护混合物免受灰尘的污染，并等待 5 到 10 分钟，让肌黄油沉入落水底部。

在灭菌过程中，在65摄氏度下加热Shellac乙醇胶30至60秒，然后将大约6微升胶水加入未涂覆的玻璃滑梯上。反复将每个安装针的尖端浸入胶水中，直到可见一层胶水。然后使用微机械器垂直移动探头和压电，为显微镜舞台上的组织浴提供空间，并去除含有胶水的玻璃幻灯片。

安装肌纤维后，测量沙壳长度，移动压电和/或力探头，将肌黄纤维的初始沙壳长度设置为 2.5 微米。利用系统控制器软件的容器功能，测量肌黄热气的长度和宽度。使用显微镜舞台将肌黄油放在视频图像的中心，将矩形从肌黄油的一侧拉伸到另一侧，注意包括胶滴的暗边。

要开始记录数据，请单击"开始"。五秒钟后，单击"暂停"。长度将被记录。

要测量宽度，请旋转摄像机 90 度以查看肌或气本身边缘的对比度。调整矩形并单击"开始"开始开始记录数据。五秒钟后，单击"暂停"。

宽度将被记录。要定位玻璃，请使用目镜和操纵器小心地将塔玻璃向肌纤维。将玻璃的顶部通道与肌纤维对齐，并执行快速步骤以检查位置。

打开背景放松流以检查塔玻璃对齐，并使用 Luer 阀杆打开流室的流入。然后开始排空流气室，防止流室溢出，将流出泵阀设置为浴阀二，微步模式为微，柱塞目标为48000，柱塞速度为38至40。要测量张力重建的速率，计算将肌黄二百里松弛 15%所需的压电运动，然后将此值输入信号发生器。

单击"恢复"以继续记录数据并打开阀门 1 和 6，分别启动放松溶液和不同钙浓度流。选择干涉仪上的复位范围以重置干涉仪的范围，使基准力为零伏特。当力轨迹稳定时，执行 100 微米步长的塔玻璃快速步进。

当达到力高原时，使用压电力执行缩短的重新拉伸。将记录激活松弛跟踪。单击"暂停"。

要执行步进拉伸，请单击"启动"并重置干涉仪的范围，以便基准力为零伏特。使用信号发生器执行分步拉伸。拉伸完成后，使用压电将肌黄种轮缩短到松弛长度。

然后按暂停并停止并保存数据。在这里，从健康的人类四头肌分离出的肌骨力实验的力痕迹显示。肌异物被激活五次，溶液的钙浓度不同，平均最大力为每平方毫米约123毫纽顿。

在五条钙曲线中，每次激活时，高原力的力钙浓度曲线的构造允许计算钙浓度在最大力产生量的 50% 。如此代表性分析所示，在单个实验中，用多种化合物处理肌黄体，以回答有关肌黄体菌型的其他问题。也可以测量主动力和沙康长度，以便计算重建、激活和放松的速率。

点状红色框中显示的陡峭上升是由粘度和弹性引起的。高原只像弹性成分。由于粘度线性抵抗应变，因此在去除应变后力下降。

定位玻璃时，请确保将其与肌纤维正确对齐。否则，激活解决方案可能介于力探针的光纤和悬臂之间，这会导致数据中出现伪影。此外，肌黄种人可能无法正确激活。

这种灌注方法也适合确定肌纤维类型的肌纤维类型。例如，您可以先用正常的钙溶液来灌注肌纤维，然后加入肌肉纤维型特异性增强力化合物。