为电子生理记录准备急性人类河马切片

利用我们的技术，我们可以在人脑样本中测试潜在的抗癫痫物质，以帮助叶癫痫的药物开发。人脑组织具有突破基础研究和临床应用之间的转化上限的优点。在手术当天或最晚的一天，在37摄氏度的水浴中解冻50毫升10x胆碱ACSF溶液，并加入解冻溶液和50毫升10x溶液2至约300毫升双蒸馏水。

将葡萄糖和氯化钙的最终浓度加入混合物中，搅拌至溶解。然后，将双蒸馏水加入500毫升的最终体积。测量渗透性。

并填充一瓶约100毫升的1x胆碱ACSF。在手术当天，在冰上冷却1x胆碱ACSF，并使用连接到碳原气体的玻璃气体分配器对溶液进行至少10至15分钟的碳化。手术前至少10至15分钟，预热储存ACSF、高钾加4氨基丙胺ACSF，低镁加双库林至35摄氏度的碳化物。

要准备接口室，请为每个切片保持室切割两张四到两厘米的滤纸，然后将碎片堆叠在一起。然后，在隔间内滤纸片周围放置细棉串，以打破溶液的张力，确保均匀流动。将三到四块 1.5 到一厘米的滤纸放在每个隔间中较大的滤纸上。

在获取组织切片之前，使用 70% 乙醇擦拭制备区域，并在该区域上盖上盖子。放置超级胶水、两个锋利的钳子、一把铲子、一个带刀片的手术刀和一把用于在振动器附近粗剪脑组织的刀片。用 70% 乙醇擦拭振动器的缓冲盘和试样板。

当缓冲盘完全干燥时，用铝箔盖住它，然后将托盘放在冰浴中。用碎冰填充冰浴，将浴池保持在零下20摄氏度，直到准备。然后，用 70% 乙醇擦拭振动器和剃须刀刀片，并校准振动器，以尽量减少切片过程中的任何垂直振动和组织损伤。

获得组织样本后，立即从运输胆碱ACSF中去除组织，并切掉任何烧伤的部分组织。切开均匀的表面，以方便将组织片粘合到试样板上，并使用振动器将脑组织切成400微米厚的切片，在切割过程中根据需要调整振动器的振幅和速度。人类海马的某些部位比另一些部分更耐切割。

格外小心和时间可以大大提高样品质量。使用手术刀修剪大脑切片以放入记录室，并使用铲子和小钳子小心地将切片放在接口室中的小块滤纸上至少一小时。对于表皮活性记录，将一个半渗透膜粘在塑料环上，然后将腔室的流入和流出管连接到渗透泵。

用预热的碳化物 aCSF 填充管子和腔室。要准备记录电极，用154毫摩尔氯化钠溶液填充一至两兆赫玻璃移液器。将移液器放入电极支架中，使用钳子和铲子将海马切片从接口室转移到装满碳化 aCSF 的培养皿中。

无需翻转切片即可取出滤纸，然后将切片放入录音室。用切片网格将切片固定到位，将电极放在感兴趣的区域中。开始录制。

高钾加4氨基丙胺引起的突发活动应在洗涤后2至5分钟可见，而低镁加双库林诱导癫痫发作样事件可能需要长达30分钟。高钾加4氨基丙胺的应用会在几分钟内以突发事件的形式诱导表皮活性。持续时间超过 10 秒的癫痫发作样事件，可通过应用低镁加双胆素来诱发。

在应用乳酰胺和二甲苯胺应用期间，突发事件的数量减少，尽管振幅大多不受影响。脑组织的质量也可以通过减少准备期间的污染和损伤来改善。用我们的方法准备的人类大脑切片也可以用来研究使用贴片夹的神经元的基本生理功能，或者使用各种技术研究基因表达。

世界各地的实验室已经开始研究人脑内的基本机制，这些见解可以用来帮助药物开发，并可以使用我们提出的方法进行测试。