Name: 从用于微生物群研究的商业生产线上生产无菌快速生长的肉鸡 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-18T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: 了解从商业肉鸡鸡蛋生产无菌雏鸡的方法，用于微生物群研究。该技术采用过氧乙酸消毒和隔离器孵化，成功率为86.5%，为家禽生理健康研究提供新途径。

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作者感谢育种者及 Boyé accouvage 协会（法国 La Boissière en Gâtine）提供受精卵。本研究是在法国中央-卢瓦尔河谷大区资助的研究联盟 APR-IA “INTEGRITY”（2017–2019）的指导下开展的。

动物护理程序遵循欧洲共同体理事会指令（86/609/EEC）以及法国关于动物实验的法规。
1. 隔离器准备
<ol>
	<li>在正压硬质隔离器内放入所需材料：50 mL 离心管、5 mL、10 mL 和 25 mL 塑料移液管、辐照饲料、高压灭菌水以及无菌密封塑料容器。</li>
	<li>用 2% 季铵盐溶液填充转移用杀菌捕集器。</li>
	<li>使用甲醛蒸气对隔离器进行三次灭菌，每立方米（m3）使用 60 mL 福尔马林（24% 甲醛）与 30 g 高锰酸钾反应。每次灭菌之间移动隔离器内的材料，以确保所有接触表面均被灭菌。</li>
	<li>在引入卵之前，至少提前 2 天将隔离器温度设定为 37 °C。在引入当日，将湿度计调节至相对湿度（RH）65–70%。</li>
</ol>
2. 卵的收集与孵化
<ol>
	<li>根据产蛋鸡群良好的孵化率（产蛋高峰期至少达到80%）以及良好的卫生状况（即无常见家禽病原体，且鸡群中无疾病发生），选择合适的农场收集鸡蛋。在传送带上通过肉眼挑选清洁且无瑕疵的鸡蛋。</li>
	<li>将鸡蛋在室温下浸入1.5%过氧乙酸溶液中5分钟，立即对蛋壳表面进行去污处理。</li>
	<li>使用经甲醛蒸气消毒的容器将鸡蛋运送至实验场所。</li>
	<li>将鸡蛋在4 °C条件下储存24小时。重复步骤2.2中所述的去污程序，并将其放入孵化 incubator（第0天）中孵化19天。</li>
</ol>
3. 孵化
<ol>
	<li>第19天，在无菌条件下使用检卵灯通过透光法检查受精率、存活率（运动能力）及胚胎发育情况。&#160;仅将活体孵育的鸡蛋放入无菌孵化隔离器中。</li>
	<li>用1.5%过氧乙酸溶液喷洒选定的卵，持续30秒，或直至每个卵的整个表面均被覆盖，以进行去污处理。在将卵转移至隔离器的过程中，卵与喷雾接触时间共计16分30秒。</li>
	<li>将卵转移至无菌孵化隔离器中，用无菌去离子水冲洗，然后放入孵化区域。 
	注意：动物在无菌隔离器中孵化并饲养。它们被喂食 随意摄取 使用经γ射线灭菌的商业饲料，并通过饮水器提供经高压灭菌的自来水。</li>
</ol>
4. 细菌学状态分析
<ol>
	<li>孵化后一天，直接从不同雏鸡的直肠中采集粪便样本，并将其汇集至一个灭菌的玻璃管中，以使该样本能够代表给定隔离器内所有动物的状况。</li>
	<li>由于粪便样本呈不同程度的液态，向其中加入相当于1 mL粪便于9 mL含刃天青的巯基乙酸盐肉汤中。将剩余粪便样本加入9 mL脑心浸出液肉汤（BHI）中，并将试管置于37 °C静置培养18至48小时。此步骤可促进多种需氧菌、兼性厌氧菌及非苛养厌氧菌的生长。 
	注意：含刃天青的巯基乙酸盐肉汤主要用于检测非苛养厌氧菌，但也适用于需氧菌的检出。该培养基符合欧洲、美国和日本药典对无菌检测的要求18,19,20。</li>
	<li>在培养18小时后肉眼观察培养基是否发生任何变化。48小时后，取一滴BHI粪便肉汤培养物置于载玻片上，在显微镜下（40倍放大）观察是否存在细菌。</li>
	<li>若怀疑存在细菌，可从BHI培养物中取样接种至BHI琼脂平板，于37 °C培养18至48小时。</li>
	<li>若出现菌落，应采用MALDI-TOF质谱等高通量技术进行精确的微生物鉴定。 
	注意：若72小时后细菌学分析结果为阴性，则判定动物为无菌级。</li>
</ol>

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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

已有多种方法被用于制备无菌鸡，此前已有相关报道7,21,22。其中一些简单的方法（例如本文所述方法）通过使用不同的消毒剂来减少蛋壳表面及隔离器内的细菌载量。最常用的消毒剂包括氯化汞、季铵盐、碘仿、次氯酸钠和二氧化氯溶液。这些方法的结果通常令人满意。然而，尽管这些方法易于实施，但能够应用该技术并大规模饲养无菌鸡的机构仍然较少，因此无菌鸡的应用相对罕见，仅用于回答某些特定的科学问题。本文所描述的方法、材料和设备可实现高效的无菌肉鸡孵化率，且雏鸡在至少3周内保持健康和无菌状态（该时间覆盖了其用于科学研究的实验周期）。
结果表明，将该方案改进后用于从商业家禽养殖场收集的鸡蛋中生产无菌雏鸡是成功的。&#160;在SPF鸡蛋生产方面的经验表明，孵化效率主要取决于产蛋母鸡的年龄以及所收集鸡蛋的质量。在选择养殖场和收集鸡蛋时，已充分考虑了这两个参数。采用相同方法，无菌肉鸡的平均孵化率明显优于本机构此前SPF蛋鸡生产的孵化率（79% vs 35%），且未影响动物的无菌性（87% vs 83%）。这些差异可能与禽类的遗传背景（肉鸡与蛋鸡）有关，也可能与蛋壳质量有关，SPF动物由于已封闭繁育超过40年，其鸡蛋的蛋壳可能更为脆弱。此外，我们还证明，从养殖场到实验设施的运输时间超过2小时并不会影响孵化效率和雏鸡质量。
尽管用于孵化隔离器的灭菌程序以及鸡蛋去污方案已经过优化，但仍有约10%的隔离器未能达到无菌状态。&#160;为了查明污染来源，在引入鸡蛋之前对孵化用隔离器进行常规无菌检测至关重要。
关于鸟类的无菌状态，我们尝试采用能够从粪便样本中培养需氧菌和非苛养厌氧菌的方法，从而确保检测到的是存活且具有活性的细菌。这些方法符合国际药典对无菌检测的要求，代表了一种快速、简便且成本较低的常规检测技术。然而，分子生物学技术（如16S rRNA基因测序）虽然无法提供有关细菌活性的信息，但可用于确认不可培养细菌的存在。事实上，最近一项研究表明，母体输卵管微生物群中的某些细菌可通过蛋清传递给胚胎，并随后构成胚胎肠道菌群的主体5。此外，另一项研究指出&#160;早期胚胎所携带的部分微生物定植者源自母鸡，而肠道微生物的丰度和多样性在后续发育过程中则受到环境因素和宿主遗传背景的影响23。然而，这些研究结果基于DNA序列分析，其中大量检测到的细菌可能已在蛋清（富含抗菌分子）中死亡或无法增殖。Thomas及其合作者16通过将粪便样本接种于BHI平板并检测可培养的需氧菌和兼性厌氧菌来进行无菌检测，从而凸显了标准细菌学方法在无菌控制中的有效性。此外，在本研究所提出的方案中，我们采用含刃天青的硫乙醇酸盐肉汤进行生长监测，以检测非苛养厌氧菌的生长。
该方案已用于无菌鹌鹑和鸡的制备，可适用于大多数筑巢鸟类无菌动物的生产，为研究这些动物微生物群对其生理功能的贡献提供了可能。除了利用该模型研究家禽肠道中宿主与微生物群之间的相互作用外，该模型还可用于应用研究。例如，可用于评估来源于鸡肠道共生微生物的益生菌在改善动物健康和抗逆性方面的安全性和有效性。

近年来，科学界和公众对肠道微生物群在动物健康中所起作用的兴趣显著增加。肠道微生物群由栖息在动物肠道不同生态位中的细菌、病毒、真菌和古菌组成，直接或间接参与调控炎性疾病、感染性疾病和代谢性疾病，这些疾病不仅影响哺乳动物，也影响家畜，如家禽1。为更深入研究肠道微生物群在健康与疾病中的作用，已开发出多种动物模型。例如，无菌动物和已知菌群动物可分别用于研究完全缺乏微生物或特定微生物群对感染性疾病的生理病理影响2,3。然而，这些动物的培育和维持需要专门的技术和设施，其高昂的成本、繁重的劳动强度以及所需的专业技能限制了众多研究人员的使用。事实上，必须定期监测无菌动物是否可能受到污染，监测方法包括细菌培养、显微镜检查、血清学检测、大体形态学观察以及基于测序的检测技术。类似的操作流程也适用于其他物种，例如家畜，这些动物体型通常更大，其繁殖和维持需要更大的设施，这在一定程度上阻碍了微生物群相关研究的开展。
家禽，尤其是鸡，是全球畜牧业生产的核心，每年饲养数量可能超过400亿只。鸡是全球最重要的动物蛋白来源（http://www.fao.org/poultry-production-products/en/）。此外，鸡的饲养和食用不存在任何文化或宗教禁忌。家禽肠道微生物群在动物的生长、饲料转化率、免疫功能、抗病原体能力以及其他多种营养、生理或病理过程中发挥着重要作用4。因此，无菌鸡的制备对于阐明微生物群与其宿主之间的相互作用至关重要4。尽管微生物群落存在于鸡的输卵管中5，但健康母鸡刚产出的鸡蛋内容物通常几乎不含微生物，蛋壳和蛋膜具有机械屏障作用，可防止微生物侵入4。此外，雏鸡易于在没有亲代照料的情况下饲养，这一点与哺乳动物不同，使得在无菌条件下无需亲代抚育即可生产无菌动物成为可能。
实验设施“农场动物、模式动物与野生动物感染生物学”（PFIE，UE-1277，法国国家农业食品与环境研究院卢瓦尔河谷中心，努济伊，法国，https://doi.org/10.15454/1.5572352821559333e12）是法国国家基础设施网络EMERG’IN（https://www.emergin.fr/）的组成部分。PFIE在无菌鸡的生产方面已有40多年的经验，用于开展各类实验研究7,8,9,10,11。这些动物来源于自20世纪70年代起在封闭环境中繁育的白来航蛋鸡品系的无特定病原体（SPF）鸡蛋。无菌禽类主要用于微生物学研究7,8,9，近年来因其在肠道微生物群对行为13、营养利用14、免疫系统发育15及内分泌活动影响等方面的研究而重新受到关注。尽管已有使用无菌肉鸡品系的研究发表16，但相较于使用实验蛋鸡品系的研究，相关报道仍较少。随着科学问题逐渐转向微生物群与宿主在禽类健康与福利方面的相互作用，我们对原有技术方案进行了改进，以生产目前全球使用最广泛的肉鸡品系——Ross PM3品系的无菌肉鸡。

<table><tbody><tr><td>2 mL 无菌塑料移液管</td><td>Starsted</td><td>86.1252.001</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 离心管</td><td>Falcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BHI 琼脂平板</td><td>Thermo fisher diagnostic</td><td>PO1198A</td><td></td></tr><tr><td>脑心浸出液肉汤</td><td>Thermo fisher diagnostic</td><td>CM1135</td><td></td></tr><tr><td>含 9 mL BHI 肉汤的玻璃试管</td><td></td><td></td><td>自制，并通过高压灭菌进行灭菌</td></tr><tr><td>含 9 mL 带刃天青的硫乙醇酸盐肉汤的玻璃试管</td><td></td><td></td><td>自制，并通过高压灭菌进行灭菌</td></tr><tr><td>孵化用培养箱</td><td>Fieme</td><td>MG 576</td><td></td></tr><tr><td>培养箱</td><td>Memmert</td><td></td><td>用于细菌培养，37 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>辐照饲料</td><td>Safe</td><td>U8983G10R</td><td>经 40 kG 辐照处理</td></tr><tr><td>隔离器</td><td></td><td></td><td>自制。1 m&lt;sup&gt;3&lt;/sup&gt; 刚性隔离器，正压环境</td></tr><tr><td>微生物安全柜</td><td>thermon electron corporation</td><td></td><td>型号：Hera Safe</td></tr><tr><td>Visiscope 系列 300 显微镜</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>移液器辅助器</td><td>Drummond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>塑料移液管</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>无菌密封盒</td><td>Tuperware</td><td></td><td>直径</td></tr><tr><td>灭菌玻璃管</td><td></td><td></td><td>&quot;sovirel&quot;</td></tr><tr><td>含刃天青的硫乙醇酸盐肉汤</td><td>Merck</td><td>90404-500G</td><td></td></tr><tr><td>水浴锅</td><td>Fisher scientific</td><td></td><td>型号：polystat 36，用于将含 9 mL 带刃天青的硫乙醇酸盐肉汤的玻璃试管在 100 &amp;deg;C 下孵育 10 分钟，以再生培养基</td></tr></tbody></table>

商业化品系快速生长无菌肉鸡的生产及其在微生物组研究中的应用

Production of Germ-Free Fast-Growing Broilers from a Commercial Line for Microbiota Studies

由于无菌动物模型的可获得性，研究肠道微生物群对宿主生理功能和免疫能力的贡献得以实现，而无菌动物模型被认为是金标准。鸟类因其无需在无菌条件下饲养其亲代，是制备无菌动物的理想模型。目前的无菌鸡主要来源于特定病原体阴性（SPF）实验品系，但这些品系难以代表商业化的鸡品系。&#160;本文提出的方法实现了从肉鸡产业广泛使用的快速生长型肉鸡品系Ross PM3中培育无菌鸡。&#160;鸡蛋在肉种鸡场产下后立即收集。&#160;从收集到转入无菌孵化隔离器的整个过程中，鸡蛋均经过严格的去污处理。&#160;雏鸡在无菌隔离器中孵化，并在确认其无菌状态所需的期间内持续维持于该无菌环境中。本方案最初为SPF白来航鸡实验品系开发，现已成功适配于Ross PM3肉鸡品系，同时也适用于鹌鹑。因此，该方法是一种稳健且易于推广的流程，可广泛应用于其他具有经济、生物或生态意义的家禽及筑巢鸟类。

共进行了六轮无菌雏鸡的制备，所用Ross PM3鸡胚来自法国两个不同的农场（表1）。总共收集了853枚鸡蛋，经过两次去污处理并孵化19天后，存活率为86.40%。其中490枚存活的鸡蛋接受了第三次去污处理，并被转入不同的孵化隔离器中，平均孵化率为79.80%。相对于最初收集的鸡蛋总数，该孵化率为68.94%。
然而，孵化结果因实验批次的不同而存在显著差异：与收集的卵数相比，活雏鸡的比例在41.67%至88.16%之间。在同一实验中，不同孵化批次之间也观察到了此类变异。由于并非所有隔离器在所有运行中都被使用，因此难以排除隔离器依赖性效应的影响。然而，该批次效应与产蛋母鸡的年龄直接相关（图1），来自较老年母鸡的卵其存活率较低。
使用四种不同的孵化隔离器进行了六次实验。经过细菌学检测后，16个隔离器中的14个所饲养的动物被确认为无菌动物，成功率为87.5%。其余两个隔离器被一种环境来源的非致病性细菌污染。
所有用于科学实验的动物在孵化后至少三周内直至研究结束均保持无菌状态。
<img alt="卵存活率比较图表；D19 与孵化率，按孵化周数（第6周至第26周）划分。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61148/61148fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Figure 1"> 
图1：母鸡年龄对孵化率的影响 本图展示了基于产蛋母鸡群年龄（以产蛋周数表示）所观察到的孵化率。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61148/61148fig1v2large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<table border="1" fo:font-size="5px" fo:keep-together.within-page="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>收集的卵</td>
			<td>D19 可存活卵</td>
			<td>D19 可存活卵/收集的卵</td>
			<td>转入隔离器 1 的卵</td>
			<td>转入隔离器 2 的卵</td>
			<td>转入隔离器 3 的卵</td>
			<td>转入隔离器 4 的卵</td>
			<td>转移卵总数</td>
			<td>在隔离器 1 中孵化的可存活雏鸡</td>
			<td>在隔离器 2 中孵化的可存活雏鸡</td>
			<td>在隔离器 3 中孵化的可存活雏鸡</td>
			<td>在隔离器 4 中孵化的可存活雏鸡</td>
			<td>可存活孵化雏鸡总数</td>
			<td>隔离器1中孵化/转移卵的可存活率</td>
			<td>隔离器2中孵化/转移卵的可存活率</td>
			<td>隔离器3中孵化/转移卵的可存活率</td>
			<td>隔离器4中孵化/转移卵的可存活率</td>
			<td c="">总体孵化/转移卵的可存活率</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>运行 1</td>
			<td>101</td>
			<td>93</td>
			<td>92.08%</td>
			<td>23</td>
			<td>24</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>47</td>
			<td>22</td>
			<td>23</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>45</td>
			<td>95.65%</td>
			<td>95.83%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>95.74%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>运行 2</td>
			<td>130</td>
			<td>117</td>
			<td>90.00%</td>
			<td>25</td>
			<td>25</td>
			<td>25</td>
			<td></td>
			<td>75</td>
			<td>20</td>
			<td>24</td>
			<td>18</td>
			<td>-</td>
			<td>62</td>
			<td>80.00%</td>
			<td>96.00%</td>
			<td>72.00%</td>
			<td></td>
			<td>82.67%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>运行 3</td>
			<td>132</td>
			<td>97</td>
			<td>73.48%</td>
			<td>26</td>
			<td>-</td>
			<td>26</td>
			<td>45</td>
			<td>97</td>
			<td>14</td>
			<td>-</td>
			<td>13</td>
			<td>28*</td>
			<td>27</td>
			<td>53.85%</td>
			<td></td>
			<td>50.00%</td>
			<td>62.22%</td>
			<td>56.70%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>运行 4</td>
			<td>130</td>
			<td>116</td>
			<td>89.23%</td>
			<td>36</td>
			<td>35</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>71</td>
			<td>33</td>
			<td>34</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>67</td>
			<td>91.67%</td>
			<td>97.14%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>94.37%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>运行 5</td>
			<td>180</td>
			<td>148</td>
			<td>82.22%</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>120</td>
			<td>26*</td>
			<td>25</td>
			<td>17</td>
			<td>24</td>
			<td>66</td>
			<td>86.67%</td>
			<td>83.33%</td>
			<td>56.67%</td>
			<td>80.00%</td>
			<td>76.67%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>运行 6</td>
			<td>180</td>
			<td>166</td>
			<td>92.22%</td>
			<td>-</td>
			<td>40</td>
			<td>40</td>
			<td>-</td>
			<td>80</td>
			<td>-</td>
			<td>35</td>
			<td>35</td>
			<td>-</td>
			<td>70</td>
			<td>86.67%</td>
			<td>87.50%</td>
			<td>87.50%</td>
			<td></td>
			<td>87.50%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>总计</td>
			<td>853</td>
			<td>737</td>
			<td>86.40%</td>
			<td>140</td>
			<td>154</td>
			<td>121</td>
			<td>75</td>
			<td>490</td>
			<td>89</td>
			<td>141</td>
			<td>83</td>
			<td>24</td>
			<td>337</td>
			<td>82.14%</td>
			<td>91.56%</td>
			<td>68.60%</td>
			<td>69.33%</td>
			<td>79.80%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1：不同孵化实验的技术结果。 本表总结了进行的6组无菌孵化实验的结果：收集的鸡蛋数量、孵化第19天时胚胎的存活率，以及在不同隔离器中成功孵化的健康雏鸡数量。

本文介绍了一种利用商品化肉鸡品系Ross PM3的种蛋制备无菌雏鸡的方法。该方法可经适当调整后用于其他禽类物种无菌动物的制备。

无菌动物模型的可获得性促进了肠道微生物群对宿主生理功能和免疫能力贡献的研究，……

迄今为止，无菌鸟类的制备仅限于用于研究的动物品系。本文表明，使用商业用途的动物同样可以实现这一目标。该技术使得利用家禽的遗传背景开展微生物群影响的相关研究成为可能。在尝试本实验方案时，重要的是在标准条件下控制所选物种的繁殖，并具备在隔离器中操作的丰富经验。首先，在正压刚性隔离器内准备好50毫升离心管、塑料移液管、辐照饲料、高压灭菌水以及无菌密封的塑料容器。用2%季铵盐溶液填充转移杀菌陷阱，并使用甲醛蒸汽对隔离器进行三次灭菌，每次灭菌之间移动隔离器内的材料，以确保所有接触表面均被彻底消毒。在引入鸡蛋前至少两天，将隔离器温度设置为 37 摄氏度。在引入当天，将湿度计调节至相对湿度 65% 至 70%。选择干净无瑕疵的鸡蛋后，立即将其浸入 1.5% 过氧乙酸溶液中 5 分钟，对蛋壳表面进行去污处理，然后使用经甲醛蒸汽消毒的盒子将鸡蛋运送至实验场所。将卵在 14 摄氏度下储存 24 小时，然后用 1.5% 过乙酸再次进行消毒，并将卵置于孵化培养箱中孵化 19 天。第 19 天时，在无菌条件下使用透射光检卵灯检查胚胎的受精率、活力及发育情况。选取存活且已胚胎化的卵，用 1.5% 过乙酸溶液喷洒消毒 30 秒，或直至每个卵的整个表面均被覆盖。将卵转移至无菌孵化隔离器中，用无菌去离子水冲洗后，放入孵化空间。孵化后，动物维持在无菌隔离器中，自由摄食经γ射线辐照灭菌的商用饲料，并饮用高压灭菌的自来水。孵化后一天，直接从不同雏鸡的直肠采集粪便样本，并将样本汇集于一支灭菌玻璃管中。将一毫升粪便样本加入含有刃天青的九毫升巯基乙酸盐肉汤中，并将剩余样本加入九毫升脑心浸液（BHI）肉汤中。将试管置于37摄氏度下静置培养18至48小时。在培养18小时后，肉眼观察试管中培养基是否发生任何变化。48小时后，从BHI粪便肉汤培养基中取一滴培养物，置于玻璃载片上，在显微镜下观察。若怀疑存在细菌，可从BHI培养物中取样，并接种至BHI琼脂平板，随后在37°C条件下培养18至48小时。若出现菌落，可采用高通量技术（如基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，MALDI-TOF）进行细菌鉴定。共进行了六批次无菌雏鸡的制备，所用ROSSL PM3鸡蛋来自法国两个不同的农场。总共收集了853枚鸡蛋，经过两次去污步骤并孵化19天后，86.40%的鸡蛋保持存活。在存活的鸡蛋中，有490枚接受了第三次去污处理，并被放入不同的孵化隔离器中，平均孵化率为79.80%。相对于最初收集的鸡蛋总数，该孵化率为68.94%。孵化结果差异显著，与收集的卵数相比，可孵化出的健康雏鸡比例在41.67%至88.16%之间。该效应与产蛋母鸡的年龄直接相关，来自较年长母鸡的卵活力较低。这六次试验使用了四种不同的孵化隔离器进行。经过细菌学检测确认，16个隔离器中的14个内的动物被证实为无菌状态，成功率为86.5%。该操作的关键在于维持隔离器的无菌环境，这需要严格遵守消毒程序，尤其是通过液体锁通道控制物品的引入。本方法可提供用于评估微生物群对鸟类生理和健康影响的实验动物。如果能够获取蛋类样本，该方法可经调整后用于研究其他养殖鸟类或野生动物的微生物群。

production-germ-free-fast-growing-broilers-from-commercial-line-for

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

从用于微生物群研究的商业生产线上生产无菌快速生长的肉鸡

来源： Taylor, M. N., 等。 利用单条线虫数据量化异质性 秀丽隐杆线虫- 细菌相互作用 视频实验杂志 (2022)本视频展示了将无菌且年龄匹配的Caenorhabditis...

评估无菌 C. elegans 中的肠道细菌定植

已开发出一种无菌种植大白菜的方法，该方法可使研究人员评估单一微生物物种或多种微生物群落如何在大白菜叶片表面相互作用。同时提供了一种无菌蔬菜提取物，可用于检测蔬菜发酵过程中微生物群落组成的变化。...

用于研究叶际和蔬菜发酵中微生物组组装的无菌系统

本方案用于通过在卵鞘（卵荚）孵化前进行表面灭菌，以建立和维持无特定病原体的美洲大蠊（Periplaneta...

无菌美洲大蠊（Periplaneta americana）的建立与维持

为了获得无菌昆虫，需对其卵表面进行消毒，孵化后的幼虫随后使用无菌叶片进行饲养。该方法为无菌昆虫的制备提供了一种高效途径，无需使用抗生素或开发人工饲料，也可应用于其他食叶昆虫。...

利用组织培养幼苗制备和饲养无菌昆虫以研究叶甲虫宿主-肠道微生物互作

本文描述了一种使用半发酵无菌饲料饲养无菌葱蝇（Delia antiqua）的简单方法。通过PCR检测，在无菌葱蝇（D.

无菌饲养Delia antiqua并以半发酵无菌饲料喂养

本方案概述了获取无菌（GF）鱼类胚胎并将其从幼虫期饲养至幼鱼阶段的主要步骤，包括取样及检测其无菌状态。在研究微生物对宿主健康作用的过程中，利用无菌模型进行感染实验具有重要意义。...

从幼虫到幼鱼阶段无菌斑马鱼模型的建立、维持与鉴定

该方案介绍了两种改进厌氧肠道细菌分离的方法。第一种方法侧重于利用不同的培养基分离多种多样的细菌。第二种方法则专注于特定微生物类群的培养步骤，该类群可能具有代谢肌醇的能力。-肌醇，以全面理解其生态学意义。...

提高从鸡胃肠道培养厌氧细菌的策略

本方案描述了一种与囊性纤维化（CF）肺部相关的四物种多微生物生物膜模型，可用于探究细菌种间相互作用的影响。...

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本文以采血进行免疫表型分析为例，介绍用于“野生型小鼠”的设施的结构和操作流程，包括微生物 containment...

具有天然微生物群的小鼠实验设施的操作与生物安全防护程序：免疫表型分析流程

本方案描述了在维持无菌条件下，将无菌小鼠转移并饲养于实验用单笼隔离器（隔离笼）中的最佳操作规范。同时讨论了向无菌小鼠进行粪便移植的方法，以及从这些肠道“人源化”小鼠中收集可存活细菌以用于后续应用的技术。...

用于将人粪便移植到无菌小鼠的生物排外IsoPositive笼实验的准备与维护

该方法展示了鸡胚作为一种简单且经济高效的体内模型，可用于将处于可存活但不可培养（VBNC）状态的细菌病原体L.

鸡胚作为 在体 内 复苏可存活但不可培养病原体的模型

了解从商业肉鸡鸡蛋生产无菌雏鸡的方法，用于微生物群研究。该技术采用过氧乙酸消毒和隔离器孵化，成功率为86.5%，为家禽生理健康研究提供新途径。

商业化品系快速生长无菌肉鸡的生产及其在微生物组研究中的应用

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