从人体 iPS 细胞中提取的网状工程心脏组织用于活体心肌修复

该协议描述了一种高贵且简单的方法，用于创建从人体诱导身体部位和STEM细胞衍生心脏细胞中提取的网状工程心脏组织。组织几何的灵活性和保存的组织功能的可伸缩性是该技术的主要优点。植入的网状ET可以在大鼠心肌梗死模型中恢复心脏结构和功能。

确认其用于心脏再生治疗的可行性。这些技术需要可重复的人类STEM细胞处理和组织培养技能，以取得一致的结果。首先，将固化的 PDMS 板材切割到适当的尺寸，以便将纸张与硅胶粘合，以制造一个 21 由 20.5 毫米的矩形托盘，其中 7 毫米长 0.5 毫米宽，2.5 毫米高矩形柱位于交错位置。

两行柱子之间的水平间距应为 2.5 毫米。在 120 摄氏度下将托盘在 120 摄氏度下自动安装 20 分钟，然后将 1%Poloxamer 407 涂在 PBS 中的模具上，使用 1 小时。然后用 PBS 彻底冲洗模具，将模具放入六井板的一个井中。

对于血统分析，结合心肌细胞的细胞加上内皮和血管壁画细胞方案。使壁画细胞的最终浓度是10至20%，在细胞总数中，每体6个细胞的6倍。将133微升酸可溶鼠尾胶原蛋白一型溶液和17微升碱缓冲液混合到17微升，在冰上达到10倍最小基本介质。

然后将67微升的基底膜基质添加到胶原蛋白溶液中。接下来，将细胞离心，在167微升高葡萄糖Dulbeco的最小基本介质中重新吸收颗粒，并辅以胎儿牛血清和抗生素。在冰上混合基质溶液上的细胞。

然后小心地将 400 微升的细胞基质悬浮液倒入 Poloxamer 407 涂层 PDMS 组织模具上。在37摄氏度的标准细胞培养箱中孵育细胞基质混合物，在60分钟内孵育5%的二氧化碳。组织形成后，用四毫升ECT培养剂小心浸泡模具，将板回细胞培养箱14天。

在 ECT 植入之前，您消毒细钳，以小心地将 ECT 从装载柱上拆下。组织模具可以制造各种图案，柱长度和后间距，以产生不同的最终ECT几何形状。对于此分析，使用了具有 7 毫米长柱的模具，其间隔为 2.5 毫米。

Poloxamer 407 可防止细胞粘附在模具上，并在 14 天内快速压实凝胶后形成特征网状结构。即使在从模具中释放 ECT 后，结构也得到维护。制造组织结构大约1.5厘米宽，0.5毫米厚。

网格中每个束的宽度平均约为 0.5 毫米。可以生成一个 3 厘米的最终宽度网格 ECT，其中包含 2400 万个细胞，该模组具有相同交错的后设计。模具的尺寸是 4 倍。这种较大的网格 ECT 也可以轻松地从模具中去除，并生成相当于较小网格 ECT 的局部力行为。

重要的是将细胞基质混合物均匀地倒入组织模具中，而不产生气泡，以防止最终凝胶中出现缺陷。承包商的功能特征。第四频率关系可以使用内置系统执行。

我们的最终目标是将ECT范式转化为临床疗法，利用大型动物临床前研究。