代谢组学和利皮多米分析脑肿瘤的现场采样与提取

手稿介绍了人类脑肿瘤的现场采样与固相微extraction，然后其生化分析，以发现生物标志物。

该协议可用于使用固相微外切纤维从服务器内或旁边的脑肿瘤进行提取。该技术能够直接从切除的肿瘤中提取小分子，通过将提取设备直接耦合到分析仪器，为快速术中诊断提供了机会。为了准备固相微traction装置，根据肿瘤的大小，将每个固体相微traction装置探针的编码与混合模式或C18涂层修剪为适当的长度。

在样品采集前至少浸泡探头和 50 50 甲醇水溶液至少一小时。该协议侧重于脑肿瘤，但策略可以实施为许多不同的癌症的诊断。该技术是完全便携的，因此无需任何其他设备。

尽快在肿瘤切除后将探针纤维用 LCMS 级水浸入 5 秒钟，然后尽可能将纤维插入脑肿瘤组织样本，以确保整个提取阶段位于肿瘤内。将探针留在组织内精确 30 分钟，以消除由于样品肿瘤以外的来源存在伪影而导致的误差源，将条件探针纤维放在桌子上一段时间内。在萃取过程中，标记 HPLC 小瓶，用于提取后探头存储。

在提取结束时，将纤维浸入 LCMS 级水中三秒钟，以清除任何血液或细胞碎片，并将每个探针插入单个 HPLC 小瓶盖的隔膜底部，以固定纤维。然后用固定纤维盖住小瓶，将小瓶放入适当的运输容器中。实验室到达后，立即将小瓶放入零下30或零下80摄氏度的冰柜中，分别不超过3年或5年。

收集单个实验中的所有样本后，将含有混合模式纤维的小瓶放在室温下。并标记两毫升小瓶，用于脱吸，将一个玻璃插入到每个小瓶中，并添加 300 微升新鲜准备的 80 20 乙酰三叶酸水溶液到每个刀片。将每个探针的编码完全浸入脱吸溶剂的单个小瓶中，并在涡流上每分钟1200转，搅拌小瓶120分钟。

脱吸完成后，从小瓶中取下瓶盖，从每个含有肿瘤提取物的文件中留出 10 微升等分，以制备质量控制样品。然后用新瓶盖关闭小瓶，将小瓶放入液相色谱高分辨率质谱仪的四摄氏度自动采样器中。为准备利皮多米分析样品，将含有C 18纤维的小瓶放在室温下，并标记两毫升HPLC小瓶，用于破坏将硅化玻璃插入小瓶，并在每个刀片中加入200微升新鲜准备的50 50异丙醇甲醇溶液。

将每个探针涂层完全浸入溶剂中，并在涡流上以每分钟 1，200 转的速度搅拌样品 50 分钟。在时间结束时，通过去除瓶盖停止脱吸，然后从每个包含肿瘤提取物的文件中留出 10 微升等同物，以准备质量控制样品，并关闭新瓶盖。然后，将小瓶放入液相色谱高分辨率质谱仪的四摄氏度自动采样器中。

基于主要成分分析图上质量控制样品的紧密聚类，确定仪器分析的可重复性非常好。这些从胶质瘤和脑膜瘤患者身上采集的样本的唇膜学数据突出了肿瘤样本根据其组织起源和恶性肿瘤进行区分的能力。正如这些代谢组学数据所示，胶质瘤可以根据其恶性程度或或存在或是否存在感兴趣的突变进一步划分。

统计分析还允许在研究组内选择特定的化合物。必须仔细控制提取时间，并维护所有样品的可重复条件。或者，样品可以直接从纤维溶解到Ms，无需色谱分离，从而能够有针对性地分析特定标记，将整个过程缩短几分钟。