抗生素处理蚊子的细菌口服喂养测定
2020年9月12日
本文提出了一个协议，研究单个蚊子肠道细菌的影响，包括隔离和识别蚊子中生可培养微生物，抗生素消耗蚊子肠道细菌，并重新引入一个特定的细菌物种。
蚊子中，有一个复杂的微生物群落，影响宿主的新陈代谢、繁殖、健身和兽医能力。与每个肠道微生物是一个不同的效果。本视频介绍了研究每种细菌菌株或宿主生理学各自作用的过程。
为了获得肠道细菌菌落的培养，在无菌条件下解剖蚊子中肠。地面解剖中，血清，并蔓延到阿加板。从板块中挑选单个菌落，通过16个SRNA基因序列识别细菌物种。
连续三天用含有抗生素的COD Embos喂养蚊子，以去除肠道微生物群。抗生素治疗的有效性可以通过在随后的极端分子之前解剖无菌蚊子的中游，以进行聚居形成单位测定来证实。然后重新引入以前通过口服喂养检测从蚊子肠道分离的特定细菌物种。
通过比较未经治疗的蚊子、抗生素治疗的蚊子和蚊子重新引入特定的约束，可以评估细菌对宿主生理的影响。中古特解剖和可培养细菌分离。首先，用吸气器将蚊子收集在笼子里，并在收集箱中将蚊子细胞。
在4度的温度下对蚊子进行麻醉，三到五分钟。将蚊子放在冰冷的培养皿中，让蚊子麻醉。通过喷洒 75% 乙醇对长凳进行消毒、解剖显微镜和钳子，以避免被环境中的细菌污染。
表面消毒蚊子通过录音和摇动他们在75%乙醇三分钟，并用PBS缓冲液冲洗两次。将蚊子单独分在无菌玻璃幻灯片上，该幻灯片包含您的 PBS 滴。小心地用钳子切除蚊子的腿、翅膀和头部。
夹住蚊子的胸部和腹部的最后一部分被钳子和拉开，以隔离消化道。使用钳子从消化道上取出作物和麦芽管。作物在摄入糖水后，位于中高和凸起的前部。
马尔皮吉安管是一组细长的排泄管在中古和后结的交界处。将解剖的化妆品放入 EP 管中，使用 200 微升无菌 PBS 缓冲液，并在干净的长凳中用无菌研磨牧师研磨。谷物加载同质到三个节奏错觉在 50 微升每个错觉到 Lb 阿加板和绝望的板。
将板孵育为37度一至两天，直到单菌落可行。将单个菌落放入含有 50 毫升磅胸罩介质的 150 毫升圆锥形烧瓶中。一夜之间在37度摇动细菌。
物种鉴定。通过细菌基因组DNA构建试剂盒提取TOTO DNA，通过PCR扩增16SRDNA。通过安布罗斯凝胶电泳和驱动回收套件从 PCR 产品中恢复和纯化 DNA 片段。
对纯化的DNA片段进行DNA测序，以获得细菌链序列。运行爆炸搜索查询16 SRNA基因序列，识别细菌对细菌和古和数据库。对物种级别的识别定义为大于或等于 99%16 SRDNA 序列相似性，以最接近的团队库条目。
分离物被分配到相应的属时为16 SRDNA序列，相似度小于99%，大于或等于95%的抗生素治疗和细菌再引入。称量所需的蔗糖青霉素和链霉素，为我们准备10%蔗糖溶液，包括尝试20单位青霉素和20微克链霉素每毫升。将棉球渗入含有抗生素的蔗糖溶液中，放在含有蚊子的纸杯顶部。
用10厘米的培养皿盖住棉球，防止水水蒸发。更换棉球两天，连续三天喂蚊子。蚊子分为两组。
第一组被放置在一个蚊子杯没有任何治疗，任何棉球医生与10%所以交叉每天给予。第二组接受抗生素治疗，服务三天。在每组，谢尔盖蚊子被解剖。
Mika被提取用于总DNA提取，QPCR使用通用细菌底剂进行，图一显示了对照组和抗生素治疗组中16个SRNA的表达。结果表明，青霉素和链霉素的成本或实现是成功的。准备细菌溶液，用分光光度计测量病毒中的细菌溶液，将一个OT细菌悬浮液加入EP管。
在5000 RCA下离心5分钟，在四度下丢弃上流水线，用无菌PBS缓冲液清洗细菌托盘尝试。用 200 微升无菌 PBS 缓冲液重新悬浮细菌托盘，添加 600 微升、10%蔗糖溶液、200 微升 ATP 和 200 微升细菌悬浮到新的 AP 管中并混合好。或者，细菌可以重新悬浮在热中激活你的血液。
加热活性血液的准备。用抗凝血管凝固新鲜血液，服用两到三毫升新鲜血液。在1000度离心10分钟，在4度分离血浆和血细胞。
将等离子体收集到新的 EP 管中，并在 56 度激活一小时。用无菌的 PBS 缓冲液洗净爆炸屋。用加热激活等离子体冲洗悬挂的爆破室。
组装膜和进料系统。将薄膜病拉到最大。用塑料环和工作场所的副膜固定，以避免泄漏缓慢地将准备好的细菌溶液添加到进料装置中，添加到最大钱包中。
为了避免气泡从一个方向下降，并密封进纸器单元。连接电源。等待，直到温度达到 37 度，在喂食器上安装带细菌溶液的送料器单元。
在喂养细菌之前，蚊子应停止24小时代谢抗生素。对于用蚊子在纸杯上的饲料单元，则允许喂食90分钟。可以挑选完全受鼓励的蚊子作进一步研究。
代表性结果。图二显示每只蚊子的平均荣誉。在绘制了抗生素喂养后，我们看到了消化不良。
图三显示了一个变异发展相关基因的表达24小时后的血液餐含有C性消化。结果表明，对照组和褪色组的卵子产量无显著变化。感谢您对细菌或抗生素治疗蚊子的喂养文章感兴趣。
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概述
本研究调查了蚊子肠道细菌的复杂群落及其对宿主生理的影响。该协议包括分离和鉴定特定的肠道细菌，用抗生素使其减少，并重新引入选定的菌株以评估其对蚊子健康的影响。
关键研究组成部分
研究领域
- 微生物生态学
- 蚊子生理学
- 抗生素对肠道微生物群的影响
背景
- 蚊子肠道微生物影响代谢和繁殖。
- 了解个体细菌的作用可以帮助改进蚊子管理策略。
- 这项研究可能有助于媒介控制和公共卫生。
使用的方法
- 蚊子中肠解剖和微生物分离
- 抗生素处理以减少肠道细菌
- 细菌菌株的培养和测序
主要结果
- 成功分离出肠道细菌菌株。
- 验证了抗生素处理的效果。
- 通过比较分析评估细菌对蚊子生理的影响。
结论
- 该研究突出了肠道细菌在蚊子中的重要作用。
- 研究结果增进了对宿主-微生物相互作用的理解，并对疾病媒介管理有重要意义。
常见问题
Executive Industry Relevance
Dissecting the role of individual gut microbes in mosquitoes enables precise hypothesis testing for host-microbe interactions, supporting mechanistic de-risking in vector biology. This approach enhances predictive confidence in early discovery by isolating microbial contributions to host physiology, informing translational research and vector control strategies. The methodology is positioned for portfolio impact where microbial modulation could influence disease transmission models and intervention development.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of specific microbial effects on mosquito metabolism and reproduction.
- Supports functional validation of microbial targets influencing host fitness and vector competence.
- Facilitates mechanistic de-risking by isolating variables in host-microbe interactions.
- Improves predictive confidence for downstream translational studies.
Screening & Assay Development
- Establishes validated, antibiotic-cleared mosquito models for controlled microbial reintroduction.
- Standardizes colony-forming unit assays and quantitative PCR for reproducible microbial load assessment.
- Enables robust comparison of physiological outputs across treatment groups.
- Prepares scalable systems for screening microbial or compound interventions.
Translational & Preclinical Research
- Aligns microbial manipulation with disease-relevant vector models for translational continuity.
- Supports risk-adjusted advancement of microbial or host-targeted interventions.
- Provides a platform for evaluating candidate biomarkers linked to vector competence.
- Strengthens predictive value for preclinical vector control strategies.
Pipeline & Workflow Integration
This methodology integrates from early discovery through preclinical validation, enabling hypothesis-driven studies on microbial influence in vector biology.
- Discovery Biology: Supports null hypothesis testing by isolating and reintroducing specific microbes to clarify their roles.
- Screening: Delivers standardized, antibiotic-treated models for reproducible microbial and physiological assays.
- Analytics: Employs quantitative PCR and colony-forming unit assays for robust measurement of microbial depletion and reintroduction.
- Translational Research: Bridges mechanistic findings to disease-relevant mosquito models for intervention assessment.
- Enterprise Reuse: Provides a reusable workflow for dissecting host-microbe interactions across vector species or interventions.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in host-microbe studies.
- Operational Value: Standardizes microbial depletion and reintroduction protocols for reproducibility and scalability.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions for microbial or host-targeted vector interventions.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of vector control strategies based on mechanistic evidence.
Implementation Considerations
- Requires expertise in sterile dissection, microbial culture, and molecular identification.
- Needs access to PCR, sequencing, and quantitative analytical infrastructure.
- Demands rigorous cross-team standardization for reproducible microbial manipulation.
- Adaptable to different mosquito species or microbial targets with protocol modifications.
- Dependent on cultivable bacteria and validated depletion efficacy as confirmed by quantitative assays.
