Name: 从小鼠表皮脂肪脂肪组织中制备脂肪祖细胞 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-25T14:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: 学习使用荧光激活细胞分选技术从小鼠附睾脂肪组织中分离高活性脂肪祖细胞。该方法适用于单细胞RNA测序等敏感下游分析，为脂肪生物学研究提供可靠方案。

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我们感谢梅奥诊所显微镜细胞分析核心流式细胞术平台在FACS分选方面的协助。

所有动物实验操作均经梅奥诊所机构动物护理和使用委员会批准后进行。
1. 溶液配制
<ol>
	<li>通过将 2 g 胶原酶 II 溶解于 100 mL 汉克斯平衡盐溶液（HBSS）中，制备 2%（w/v）胶原酶溶液。每次使用时分装 200 µL。</li>
	<li>通过混合 84 mL F-12 培养基、15 mL 马血清和 1 mL 青霉素/链霉素，制备中和培养基。</li>
	<li>通过将 500 mg 牛血清白蛋白（BSA）和 400 µL 0.5 M EDTA 溶解于 100 mL 杜氏磷酸盐缓冲液（DPBS）中，制备流式细胞术缓冲液。</li>
</ol>
2. 附睾脂肪垫的解剖与组织解离
<ol>
	<li>以人道方式处死（使用异氟烷/颈椎脱位法）一只雄性小鼠。本方案中使用了一只四月龄的 FVB 小鼠。</li>
	<li>用干净的剪刀和镊子将 70% 乙醇涂抹或喷洒于腹部，并暴露下腹部腔体。</li>
	<li>定位附睾脂肪垫（靠近睾丸/与睾丸相连）。用钝头镊子夹住睾丸与附睾脂肪垫之间的连接处，轻轻拉拽以分离附睾脂肪垫。</li>
	<li>用剪刀剪除睾丸，并将附睾脂肪垫放入含 3% BSA 的 5 mL HBSS 中，置于 50 mL 锥形管内，室温孵育 15 分钟。</li>
	<li>在 4 °C 条件下以 150 x g 离心 7 分钟。</li>
	<li>从 50 mL 锥形管中取出漂浮的附睾脂肪垫，用干净的剪刀将其精细剪碎。</li>
	<li>在 13 mL 培养管中，将 200 µL 胶原酶 2% 溶液加入 3.8 mL HBSS 中。加入剪碎的组织，在 37 °C 旋转孵育器中以 5 rpm 转速孵育 1 小时。若无旋转孵育器，也可使用 37 °C 细胞培养箱，期间偶尔震荡代替。</li>
	<li>将全部内容物转移至 50 mL 锥形管中，加入 10 mL 中和培养基。通过反复倒置试管 2–3 次轻柔混匀。</li>
	<li>准备另一个装有 70 µm 细胞滤器的 50 mL 锥形管。将消化后的组织经细胞滤器过滤至新管中。</li>
	<li>将滤过液转移至 15 mL 锥形管中，在 4 °C 条件下以 350 x g 离心 10 分钟。</li>
	<li>小心吸除上清液，用 5 mL DPBS 重悬细胞沉淀。在 4 °C 条件下以 350 x g 离心 10 分钟。</li>
	<li>小心吸除上清液，加入 50 µL 流式细胞术缓冲液。通过轻柔吹打充分混匀，并将细胞置于冰上保存。由于细胞沉淀体积及残留上清液量较小，最终细胞在流式缓冲液中的总体积将大于 50 µL（约 100 µL）。</li>
</ol>
3. 抗体标记与荧光激活细胞分选（FACS）
<ol>
	<li>轻轻吹打混匀细胞后，取54 µL细胞悬液转移至1.7 mL微量离心管中，加入6 µL FcR封闭试剂，再轻轻吹打混匀，4 °C孵育10分钟。在取走54 µL细胞后，将剩余细胞保存于冰上，用于步骤3.5和步骤3.6中的未染色对照。</li>
	<li>在步骤3.1孵育期间，于微量离心管中将抗Sca1-APC、抗Ter119-FITC、抗CD31-FITC和抗CD45-FITC抗体各取11 µL混合，配制抗体混合液。轻轻吹打混匀后置于冰上避光保存。</li>
	<li>经FcR封闭试剂孵育10分钟后，加入40 µL抗体混合液，轻轻吹打混匀，4 °C继续孵育10分钟。</li>
	<li>向染色后的细胞中加入500 µL流式细胞术缓冲液，其中添加1 µg/mL DAPI。轻轻吹打混匀后，使用带细胞滤网卡扣盖的5 mL试管过滤细胞，将细胞置于冰上保存。</li>
	<li>向步骤3.1中剩余的细胞加入500 µL流式细胞术缓冲液，轻轻吹打混匀。使用带细胞滤网卡扣盖的5 mL试管过滤细胞，将这些细胞置于冰上保存，并在下一步中作为未染色对照使用。</li>
	<li>将染色后的细胞和未染色对照细胞送至流式细胞分选（FACS）分析或分选仪器进行检测。
	<ol>
		<li>根据图1所示的设门策略，鉴定并分离APC+/FITC-/DAPI-细胞群体。该群体代表活的Sca1+/Ter119-/CD31-/CD45-细胞。利用前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC）图排除碎片和细胞聚集体。随后设门选择DAPI-细胞群体，再进一步设门选择APC+/FITC-细胞群体。应使用未染色对照辅助设定设门参数。</li>
		<li>将细胞收集至含有500 µL流式细胞术缓冲液的1.5 mL微量离心管中。后续所有操作均需在无菌条件下进行，以避免污染。每只小鼠可收集约50,000 – 100,000个细胞。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用血细胞计数板对细胞进行计数以评估细胞活力。由于细胞聚集体可能干扰后续分析，还需评估其存在情况，确保聚集体数量极少（&#60;活细胞总数的5%）。</li>
</ol>

<ol><li>Krotkiewski, M., Bjorntorp, P., Sjostrom, L., Smith, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+obesity+on+metabolism+in+men+and+women.+Importance+of+regional+adipose+tissue+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Impact of obesity on metabolism in men and women. Importance of regional adipose tissue distribution.</a> The Journal of Clinical Investigation. 72, 1150-1162 (1983).</li>
<li>Salans, L. B., Horton, E. S., Sims, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+obesity+in+man%3A+cellular+character+of+the+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Experimental obesity in man: cellular character of the adipose tissue.</a> The Journal of Clinical Investigation. 50, 1005-1011 (1971).</li>
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<li>Halberg, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor+1alpha+induces+fibrosis+and+insulin+resistance+in+white+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor 1alpha induces fibrosis and insulin resistance in white adipose tissue.</a> Molecular and Cellular Biology. 29, 4467-4483 (2009).</li>
<li>Upadhyay, J., Farr, O., Perakakis, N., Ghaly, W., Mantzoros, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+as+a+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Obesity as a Disease.</a> Medical Clinics of North America. 102, 13-33 (2018).</li>
<li>Cawthorn, W. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+stem+cells+meet+preadipocyte+commitment%3A+going+back+to+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue stem cells meet preadipocyte commitment: going back to the future.</a> Journal of Lipid Research. 53, 227-246 (2012).</li>
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<li>Hepler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+functionally+distinct+fibro-inflammatory+and+adipogenic+stromal+subpopulations+in+visceral+adipose+tissue+of+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Identification of functionally distinct fibro-inflammatory and adipogenic stromal subpopulations in visceral adipose tissue of adult mice.</a> eLife. 7, 39636(2018).</li>
<li>Merrick, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+mesenchymal+progenitor+cell+hierarchy+in+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of a mesenchymal progenitor cell hierarchy in adipose tissue.</a> Science. 364, 2501(2019).</li>
<li>Schwalie, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stromal+cell+population+that+inhibits+adipogenesis+in+mammalian+fat+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A stromal cell population that inhibits adipogenesis in mammalian fat depots.</a> Nature. 559, 103-108 (2018).</li>
<li>Raajendiran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Metabolically+Distinct+Adipocyte+Progenitor+Cells+in+Human+Adipose+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Identification of Metabolically Distinct Adipocyte Progenitor Cells in Human Adipose Tissues.</a> Cell Reports. 27, 1528-1540 (2019).</li>
<li>De Matteis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+physiological+transdifferentiation+of+adult+adipose+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">In vivo physiological transdifferentiation of adult adipose cells.</a> Stem Cells. 27, 2761-2768 (2009).</li>
<li>Hanamsagar, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+workflow+for+single-cell+transcriptomics+and+repertoire+profiling+of+purified+lymphocytes+from+clinical+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">An optimized workflow for single-cell transcriptomics and repertoire profiling of purified lymphocytes from clinical samples.</a> Scientific Reports. 10, 2219(2020).</li>
<li>Marinovic, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crotamine+induces+browning+of+adipose+tissue+and+increases+energy+expenditure+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Crotamine induces browning of adipose tissue and increases energy expenditure in mice.</a> Scientific Reports. 8, 5057(2018).</li>
<li>Takahashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+and+clinical+availability+of+adipose-derived+stem+cells+for+pelvic+dead+space+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Biological and clinical availability of adipose-derived stem cells for pelvic dead space repair.</a> Stem Cells Translational Medicine. 1, 803-810 (2012).</li>
<li>Cowan, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+adult+stromal+cells+heal+critical-size+mouse+calvarial+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size mouse calvarial defects.</a> Nature Biotechnology. 22 (5), 560-567 (2004).</li>
<li>Hagberg, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+Cytometry+of+Mouse+and+Human+Adipocytes+for+the+Analysis+of+Browning+and+Cellular+Heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Flow Cytometry of Mouse and Human Adipocytes for the Analysis of Browning and Cellular Heterogeneity.</a> Cell Reports. 24, 2746-2756 (2018).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

单细胞RNA测序（scRNA-seq）正迅速成为一种强大的工具，可用于在单细胞水平上同时研究多种细胞群体。由于样本制备和高通量测序成本较高，优化细胞投入量（高活力和高纯度）对于提高实验成功率至关重要。一些细胞制备方案依赖低速离心洗涤和基于柱的分离方法去除死细胞和碎片，而无需使用FACS分选14。然而，这些方法中的许多会显著减少可回收的活细胞数量，并且在很多情况下无法完全去除死细胞14。本方案介绍了一种简单的方法，用于分离高活力的Sca1+脂肪前体细胞，其中细胞碎片、双细胞和死细胞含量极低。尽管使用本方案分离的细胞表现出高活力，我们仍建议尽量缩短细胞分离与后续下游分析之间的时间，以维持细胞的高活力。此外，成功的抗体标记对于高纯度地分离Sca1+脂肪前体细胞至关重要。因此，强烈建议针对每种抗体确定其最佳浓度，并可根据需要相应调整步骤3.2中抗体的稀释比例。
该基于流式细胞术的实验方案可根据研究者对特定脂肪祖细胞亚群的兴趣进行定制。此处可采用不同的抗...

脂肪组织在能量代谢中起着关键作用。多余的能量以脂质形式储存，脂肪组织能够根据营养状况和能量需求发生显著的扩张或收缩。脂肪组织的扩张可源于脂肪细胞体积的增加（肥大）和/或脂肪细胞数量的增加（增生）；后者过程受到脂肪组织前体细胞增殖与分化的严格调控1,2。在肥胖状态下，脂肪组织过度扩张，并常伴随组织功能障碍——包括缺氧、炎症和胰岛素抵抗——的发生3,4。这些并发症是多种慢性疾病的风险因素，包括高血压、糖尿病、心血管疾病、中风和癌症5。因此，限制脂肪组织的不受控扩张并减轻其病理变化是当前生物医学研究的重点方向。在脂肪组织扩张过程中，组织驻留的脂肪源性干细胞（ASCs）依次增殖并分化为前脂肪细胞（定向前体细胞），进而形成成熟脂肪细胞6。近期的单细胞RNA测序（scRNA-seq）研究表明，这些脂肪前体细胞（APC）群体（包括ASCs和前脂肪细胞）在分子特征和功能上具有显著的异质性7,8,9,10,11,12。例如，与前脂肪细胞相比，ASCs表现出较低的脂肪生成分化能力，但具有更高的增殖和扩增潜能7。在ASC和前脂肪细胞群体内部还报道了进一步的分子差异，尽管这些差异的功能意义尚不明确7。综上，这些数据凸显了脂肪前体细胞库的复杂性，并强调了开发和标准化研究工具的必要性，以更深入地理解并调控这些关键细胞群体。
本方案详细描述了从小鼠附睾脂肪垫中分离高活力Sca1+脂肪前体细胞群体的方法，所获细胞适用于多种敏感的下游分析，包括单细胞研究（单细胞RNA测序）和细胞培养。附睾脂肪垫的分离与解离操作参照先前报道的方法7,13，并进行了轻微修改，以提高分离所得脂肪前体细胞（APC）的活力。简言之，将来自附睾脂肪垫的解离细胞用针对Sca1的抗体进行染色，Sca1是脂肪基质细胞（ASCs）和前脂肪细胞的标志物6,7；同时使用其他谱系（Lin）标志物抗体染色：Ter119（红系细胞）、CD31（内皮细胞）和CD45（白细胞）。随后通过荧光激活细胞分选（FACS）技术分选出活的Sca1+/Ter119-/CD31-/CD45-/DAPI-细胞。重要的是，本方案已在近期一项单细胞RNA测序研究中得到验证，该研究成功分离并分析了具有活力的Sca1+/Lin-脂肪前体细胞，鉴定了脂肪基质细胞和前脂肪细胞内功能异质性的亚群7。

<table><tbody><tr><td>1.7 mL 微量离心管</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>13 mL 培养管</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>50-809-216</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 圆锥形离心管</td><td>Greiner Bio-one</td><td>188 271</td><td></td></tr><tr><td>带细胞筛网 snap cap 的 5 mL 试管</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>08-771-23</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 圆锥形离心管</td><td>Greiner Bio-one</td><td>227 261</td><td></td></tr><tr><td>70 &amp;micro;m 细胞筛网</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>抗 CD31-FITC 抗体</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-102-519</td><td></td></tr><tr><td>抗 CD45-FITC 抗体</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-102-491</td><td></td></tr><tr><td>抗 Sca1-APC 抗体</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-102-833</td><td></td></tr><tr><td>抗 Ter119-FITC 抗体</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-112-908</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Gold Biotechnology</td><td>A-420-500</td><td></td></tr><tr><td>II 型胶原酶</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17101-015</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>杜氏磷酸盐缓冲液 (DPBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>F-12 培养基</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11765-054</td><td></td></tr><tr><td>FcR 封闭试剂</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-575</td><td></td></tr><tr><td>汉克斯平衡盐溶液 (HBSS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14025-092</td><td></td></tr><tr><td>马血清</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16050-122</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>碘化丙啶溶液</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td></td></tr></tbody></table>

从小鼠附睾脂肪组织中分离脂肪前体细胞

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

肥胖以及糖尿病、心脏病和癌症等代谢性疾病均与显著的脂肪组织重塑相关。组织驻留的脂肪前体细胞（APCs）在脂肪组织稳态中发挥关键作用，并可能参与组织病理过程。单细胞分析技术（包括单细胞RNA测序和单细胞蛋白质组学）的日益广泛应用，正在深刻改变干细胞/前体细胞研究领域，使研究人员能够在群体或组织整体变化背景下，以前所未有的分辨率解析单个细胞的表达变化。本文提供了详细的操作方案，用于解剖小鼠附睾脂肪组织、分离来源于脂肪组织的单个细胞，并通过荧光激活细胞分选（FACS）富集具有活力的 Sca1+/CD31-/CD45-/Ter119- APCs。这些方案将帮助研究人员制备高质量的APCs，适用于单细胞RNA测序等后续分析。

本实验使用4月龄雄性FVB小鼠。通过FSC/SSC图排除碎片和双联体后，对活细胞（DAPI-群体）设门，随后选择APC+/FITC-群体（图1）。DAPI、APC和FITC的设门依据未染色对照样本确定。设门策略如图1所示。
分选1小时后，通过流式细胞术分析对分离质量进行定量评估（图2,3）。细胞使用碘化丙啶溶液（1:100）染色以进行活率检测。采用与分选相同的设门策略，细胞保持较高的活率和纯度：单细胞比例为92.6 ± 2.2%（图2中第三张图），活细胞（PI-细胞）比例为86.4 ± 3.0%，APC+/FITC-细胞比例为86.0 ± 2.8%（n = 4，平均值 ± 标准差）。这些百分比分别定义为各设门群体（单细胞、PI-</...

我们介绍一种简单的方法，利用荧光激活细胞分选技术从小鼠附睾脂肪垫中分离出高活力的脂肪前体细胞。

肥胖及糖尿病、心脏病、癌症等代谢性疾病均与显著的脂肪组织重塑密切相关。组织驻留型……

本方案可从雄性小鼠附睾脂肪组织中分离出高质量的脂肪祖细胞，适用于高灵敏度的下游分析。该技术能够获得高活力的脂肪祖细胞，并已在近期的单细胞RNA测序研究中得到验证。在处死雄性小鼠后，找到附睾脂肪垫，用钝头镊子轻轻牵拉，将其分离出来。使用剪刀取出睾丸，并将附睾脂肪垫置于含有3% BSA的5毫升HBSS中，于50毫升锥形管内4摄氏度孵育15分钟。孵育结束后，在4摄氏度下以150 × g离心7分钟。从锥形管中移除漂浮的附睾脂肪垫，并用洁净的剪刀将其充分剪碎。在13毫升的培养管中，加入200毫升2%胶原酶溶液至3.8毫升HBSS中。然后加入剪碎的组织，在37摄氏度、5 RPM转速的旋转培养箱中孵育1小时。将全部内容物转移至50毫升锥形管中，并加入10毫升中和培养基。轻轻颠倒混匀管壁2至3次。另准备一个装有70微米细胞筛的50毫升锥形管，将消化后的组织滤入新管中。将滤过液转移至15毫升离心管中，在4摄氏度下以350 x g离心10分钟。小心吸除上清液，并用 5 毫升 DPBS 重悬细胞沉淀。然后将离心管再次离心 10 分钟。小心吸除上清液，加入 50 微升流式细胞术缓冲液。轻轻吹打混匀细胞，并将细胞置于冰上。细胞在流式细胞术缓冲液中的总体积约为 100 µL。混匀细胞后，将 54 µL 细胞悬液转移至 1.7 mL 微离心管中。加入6 µL FCR封闭试剂，用移液器轻轻吹打混匀。然后将离心管置于4°C孵育10分钟。将剩余的细胞置于冰上保存，作为未染色对照使用。孵育期间，在微量离心管中加入抗Sca1-APC、抗Ter119-FITC、抗CD31-FITC和抗CD45-FITC抗体各11 µL，配制抗体混合液。轻轻吹打混匀，并置于冰上避光保存。用FCR封闭试剂孵育后，加入40 µL抗体混合液，轻轻吹打充分混匀。将细胞在 4 摄氏度下继续孵育 10 分钟。向染色细胞中加入 500 微升流式细胞术缓冲液，其中添加 DAPI 至终浓度为 1 微克/毫升。充分混匀，并使用带细胞筛网 snap cap 的 5 毫升试管过滤细胞。然后将细胞置于冰上。向未染色的细胞中加入500 µL流式细胞术缓冲液，轻轻吹打混匀。使用带细胞滤网扣盖的5 mL试管过滤细胞，并保持细胞在冰上。将染色后的细胞和未染色对照样本运送至流式细胞术分析或分选仪器。根据文本稿件中描述的设门策略，鉴定并分离 APC阳性、FITC阴性、DAPI阴性的细胞群体。利用未染色对照样本辅助设定设门参数。通过FSC-SSC图排除碎片和双联体后，对活细胞进行圈选，随后选择APC阳性、FITC阴性的细胞群体。DAPI、APC和FITC的圈门依据未染色对照设定。以下结果展示了从四月龄雄性FVB小鼠中分离脂肪祖细胞的过程。经过一小时分选后，通过流式细胞术分析对分离质量进行定量评估，结果表明细胞保持了较高的活力和纯度。在此方案之后可进行敏感的下游分析，例如单细胞RNA测序、定量实时PCR和流式细胞术，从而实现对脂肪前体细胞的进一步表征。脂肪祖细胞是具有异质性的细胞群体，需要进一步开展单细胞研究。该方法可实现分离适用于单细胞研究的细胞。

preparation-adipose-progenitor-cells-from-mouse-epididymal-adipose

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

从小鼠表皮脂肪脂肪组织中制备脂肪祖细胞

本视频展示了一种从小鼠主动脉弓周围脂肪组织中分离和培养荧光标记的神经嵴来源脂肪干细胞（ADSCs）的技术。分离后，通过荧光激活细胞分选技术检测并分选NCADSCs，随后将其接种于培养板中进行培养，以促进细胞增殖。...

从小鼠主动脉周围脂肪组织中分离脂肪来源的干细胞

本文报道了一种利用磁性激活细胞分选（MCS）从血管周围脂肪组织（PVAT）中分离脂肪细胞前体细胞（APC）群体的方法。与荧光激活细胞分选（FACS）相比，该方法可显著提高每克脂肪组织中APC的分离效率。...

通过磁性激活细胞分选法分离的血管周围脂肪组织中脂肪细胞前体的扩增与脂肪生成诱导

从脂肪组织血管前体细胞分化出白色和米色脂肪细胞在改善肥胖相关代谢方面具有潜在价值。本文描述了从人类脂肪组织中分离CD34+CD31+内皮细胞以及后续的分化方案 体外...

从人网膜和皮下脂肪组织中分离、扩增及诱导CD34+CD31+内皮细胞的脂肪生成

本实验方案描述了通过荧光激活细胞分选或免疫磁珠分离技术，从小鼠腹腔内白色脂肪组织（WAT）储存部位中分离脂肪生成性及纤维炎症性基质细胞亚群的技术方法。...

从小鼠腹腔内脂肪组织库中分离脂肪生成性与纤维-炎症性基质细胞亚群

本报告描述了一种从新生小鼠中同时分离原代棕色和白色前脂肪细胞的实验方案。分离得到的细胞可在体外培养，并可诱导其分化为完全成熟的白色和棕色脂肪细胞。该方法可用于在培养条件下对原代脂肪细胞进行遗传学、分子水平及功能特性分析。...

从新生小鼠中分离与分化原代白色和棕色前脂肪细胞

本方案描述了从小鼠皮下脂肪中分离前脂肪细胞、将其分化为成熟脂肪细胞以及诱导胰岛素抵抗的方法。通过蛋白质印迹法检测胰岛素信号通路中相关蛋白的磷酸化/活化水平，以评估胰岛素作用。该方法可直接测定原代脂肪细胞中的胰岛素抵抗/敏感性。...

原代培养中分化的鼠脂肪细胞：胰岛素抵抗模型

前脂肪细胞从小鼠肩胛间棕色脂肪组织的基质血管组分中分离获得，并分化为能够积累脂滴、表达分子标志物并呈现成熟棕色脂肪细胞线粒体形态的细胞。这些细胞进一步通过免疫荧光和透射电子显微镜进行分析。...

从新生小鼠肩胛间脂肪组织基质血管组分中分化与成像棕色脂肪细胞

脂肪组织是间充质干细胞的优良来源。本文详细介绍了从小鼠附睾脂肪组织中分离、培养和鉴定脂肪组织来源干细胞（ADSCs）的逐步操作方法。...

从小鼠附睾脂肪组织中分离、体外扩增及表征间充质干细胞

成熟脂肪细胞的尺寸和脆弱性限制了可用于其研究和分离的技术与工具。本文介绍了一种分离成熟小鼠脂肪细胞的方案，该方案可轻松适用于不同的脂肪组织库和小鼠饮食模型。...

从瘦型与肥胖型小鼠中分离和培养原代小鼠脂肪细胞

诱导多能干细胞（iPSC）系的建立会产生具有不同发育潜能的细胞系，即使这些细胞系能够通过多能性的标准检测。本文介绍一种完全由iPSCs衍生小鼠的实验方案，该方法可确认iPSC系具有完全的多能性1。...

由诱导性多能干细胞衍生小鼠的制备

学习使用荧光激活细胞分选技术从小鼠附睾脂肪组织中分离高活性脂肪祖细胞。该方法适用于单细胞RNA测序等敏感下游分析，为脂肪生物学研究提供可靠方案。

从小鼠附睾脂肪组织中分离脂肪前体细胞

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