Name: Murine 模型心肌梗塞后 MSC 加载注射水凝胶的心内移植 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: 了解利用酶交联明胶水凝胶进行小鼠心肌梗塞后心内间充质干细胞移植的方法。该技术可提高移植细胞的滞留率和存活率，为心脏组织修复与再生研究提供可行方案。

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本研究由韩国国家研究基金会（NRF）通过教育部长资助的基础科学研究中心项目（NRF-2018R1D1A1A02049346）支持

所有动物实验操作均依照韩国天主教大学医学院机构动物照护与使用委员会（IACUC）颁布的《实验动物福利法》、《实验动物照护与使用指南》以及《啮齿类动物实验指导原则与政策》进行。
1. 间充质干细胞和可注射明胶水凝胶的制备
<ol>
	<li>在37 °C和5% CO2条件下，将MSCs培养于100 mm培养皿中。当MSCs生长至80%融合度时，用DPBS洗涤培养皿两次，并加入1 mL 37 °C的胰蛋白酶替代液，孵育3分钟。 
	注意：MSCs按照常规方法从小鼠骨髓中分离16，在含10%胎牛血清（FBS）和1%抗生素-抗真菌溶液的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）中培养，并在第7至9代用于本研究。</li>
	<li>加入9 mL培养基，以500 × g离心3分钟。随后弃去上清液，将细胞重悬于1 mL PBS中，并将细胞悬液置于冰上保存。</li>
	<li>取10 µL细胞悬液与10 µL台盼蓝混合，使用自动细胞计数仪测定细胞浓度。</li>
	<li>将MSCs重悬并转移至1 mL离心管中，细胞密度为1 × 107 个细胞/mL。</li>
	<li>在PBS中配制6.25 wt%的GH偶联物溶液，并分装至两个小瓶中。随后将GH溶液分别与6 µg/mL的HRP（GH溶液A）或0.07 wt%的H2O2（GH溶液B）混合。 
	注意：明胶-羟基苯基丙酸（GH）偶联物的制备请参照已发表的实验方案12,15。
	<ol>
		<li>保持GH偶联物溶液与HRP（GH溶液A）以及GH偶联物溶液与H2O2（GH溶液B）的体积比均为9:1。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>在将MSCs与GH溶液A混合前，先将细胞悬液以1,000 × g短暂离心，并小心吸除上清液。随后将含有MSCs的细胞沉淀与GH溶液A混合。</li>
</ol>
2. 原位MSC接种与三维体外培养
<ol>
	<li>将含有间充质干细胞（MSCs）的GH溶液A和GH溶液B分别装入双筒注射器的两侧。将混合后的GH溶液与MSCs共300 µL接种至八孔培养板中，终浓度为5 × 106 个细胞/mL。</li>
	<li>原位水凝胶形成并通过酶促交联实现MSC包封后，加入700 µL含10%胎牛血清（FBS）和1%抗生素-抗真菌溶液的DMEM培养基。</li>
	<li>将培养板置于37 °C、5% CO2条件下孵育，每2–3天更换一次培养液。</li>
</ol>
3. 确认间充质干细胞在GH水凝胶中的体外增殖与存活
<ol>
	<li>为评估三维培养的间充质干细胞（MSCs）在GH水凝胶中的存活率，在预定的孵育时间后，采用活/死细胞染色法进行检测。</li>
	<li>将包埋于GH水凝胶中的MSCs分别孵育3、5、7或14天后，吸除培养基，并用PBS洗涤孔板两次。</li>
	<li>配制染色液：在10 mL DPBS中加入5 µL钙黄绿素乙酰甲酯（calcein AM）和20 µL乙啶同型二聚体-1（EthD-1）。</li>
	<li>向孔中加入200 µL染色液，在室温避光条件下孵育30分钟。</li>
	<li>吸除染色液，并用PBS洗涤孔板两次。</li>
	<li>小心将培养腔室从载玻片上分离，将盖玻片完整覆盖在GH水凝胶上。使用共聚焦显微镜观察包埋MSCs的增殖程度及形态学变化。 
	注：荧光图像在200倍放大倍数下获取，钙黄绿素的激发/发射波长为470/540 nm，EthD-1的激发/发射波长为516/607 nm。</li>
</ol>
4. 小鼠心肌梗死的诱导
<ol>
	<li>使用生理盐水配制的 Zoletil（30 mg/kg）和 Rompun（10 mg/kg）混合物，通过腹腔注射麻醉 7 周龄雄性 C57BL/6 小鼠（20‒22 g）。</li>
	<li>手术前，使用脱毛膏去除小鼠胸部毛发，并用碘伏对皮肤进行消毒。</li>
	<li>将小鼠置于手术台上，通过将导管插入气管进行插管，以机械通气方式提供辅助氧气。</li>
	<li>使用手术剪轻轻剪开皮肤，再用显微剪穿透肋间肌。用 5-0 丝线牵开左侧第 2 和第 3 肋骨，以保持胸腔开放。</li>
	<li>使用持针器以 8-0 聚丙烯缝线小心结扎左前降支（LAD）冠状动脉，并用电灼法切断缝线。</li>
	<li>观察左心室前壁立即出现的颜色变化。</li>
</ol>
5. 心肌内移植负载MSC的GH水凝胶
<ol>
	<li>通过结扎左前降支（LAD）诱导心肌梗死后，使用配备26G针头的双注射器，在梗死边缘区的两个不同位置各注射10 µL负载间充质干细胞（MSC）的GH溶液（总量：2 × 105 个MSC/20 µL）。
	<ol>
		<li>按照步骤1中所述相同方法，将负载MSC的GH溶液制备并转移至双注射器中。 
		注意：为评估负载MSC的GH水凝胶在梗死区域内的定植情况，MSC和GH偶联物分别预先用PHK26和异硫氰酸荧光素（FITC）标记。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>复位打开的胸腔，并使用5-0缝线缝合肌肉和皮肤。 
	注意：在关闭胸腔前，需使用导管注射器排出空气。</li>
	<li>拔除气管插管，将小鼠置于红外灯下的笼子中进行恢复。</li>
	<li>术后镇痛方面，&#160;应皮下注射酮洛芬（Ketoprofen）（5 mg/kg/天），持续至少72小时。所有小鼠均需密切观察足够时间，以确保手术后恢复良好，并获得充分的疼痛治疗。</li>
</ol>
6. 超声心动图
<ol>
	<li>移植后四周，先用5%异氟烷对小鼠进行初始麻醉，然后将异氟烷浓度调整至1%。</li>
	<li>使用脱毛膏去除胸部毛发，将小鼠置于加热垫上，并在胸部涂抹超声探头耦合剂。</li>
	<li>获取胸骨旁短轴切面的二维图像，并在乳头肌水平记录M型超声波图。 
	注意：将线阵探头（7–15 MHz）置于左侧胸骨旁线，观察解剖结构。</li>
	<li>测量左室前壁（LVAW）、左室内径（LVID）和左室后壁（LVPW）的相应数值，以获得心肌壁厚度、心腔大小及缩短分数。 
	注意：比较乳头肌水平的心功能指标，包括射血分数（EF）、缩短分数（FS）和收缩末期容积（ESV），以确保在相同的解剖位置进行准确评估。</li>
</ol>
7. 组织学评估
<ol>
	<li>在将负载MSC的GH水凝胶移植到梗死心脏后的预定时间点，将小鼠置于CO2麻醉箱中实施安乐死，并取心脏进行组织学分析15。</li>
	<li>对于苏木精-伊红（H&amp;#38;E）染色和马松三色（MT）染色，将分离的心脏组织用4%多聚甲醛（PFA）固定后进行石蜡包埋。随后使用切片机将石蜡包埋的心脏组织切成4 µm连续切片，并按照标准方案进行MT染色17。</li>
	<li>在切片扫描仪上以20倍放大倍数采集图像，并计算各治疗组的梗死面积。 
	梗死面积（%）= 梗死区总周长 / 左心室总周长 × 100</li>
	<li>通过中线长度测量法计算上述两个周长。对于左心室中线周长，测量心内膜与心外膜表面之间的中心线长度；对于梗死区中线周长，测量梗死区域长度，该区域需包含超过50%全层心肌厚度的部分18。 
	注：所有图像分析均使用ImageJ软件完成。</li>
	<li>测量乳头肌水平处瘢痕的心室壁厚度。</li>
	<li>计算胶原面积占比。 
	胶原面积（%）= 间质纤维化/心肌细胞区域总面积 / 心肌细胞区域总面积 × 100</li>
</ol>

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<li>Meirelles Lda, S., Nardi, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+marrow-derived+mesenchymal+stem+cell%3A+isolation%2C+in+vitro+expansion%2C+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">Murine marrow-derived mesenchymal stem cell: isolation, in vitro expansion, and characterization.</a> Br J Haematol. 123 (4), 702-711 (2003).</li>
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</ol>

作者声明本研究无任何利益冲突。

可注射GH水凝胶因其能够在体内均匀地原位包载多种治疗剂，而在体内应用方面具有巨大潜力。此外，其物理和生化特性可根据疾病相关需求进行灵活调控。鉴于此，可注射水凝胶已被提出用于解决当前心脏干细胞治疗中存在的主要局限性，即细胞存活率低和细胞滞留效果差（例如 &#60; 移植后24小时内损伤心脏中的10%19,20为克服这一不良结果，本文所述方案提供了一种简单且可行的方法，通过使用可在心肌移植后原位交联的GH水凝胶，以提高细胞滞留率与存活率，该方法在小鼠心肌梗死模型中已显示出对心脏结构和功能的有利作用。
该技术的主要优势在于其广泛的体内适用性，可与任何类型的细胞和生物分子联用，只需在注射前将细胞或生物分子与预凝胶GH溶液简单混合即可实现负载。此外，为了全面了解供体与宿主之间的相互作用，可采用一种直接的标记方法对GH偶联物和/或包封的生物分子进行标记，以追踪其在体内的稳定性、宿主整合性及吸收动力学的变化。据我们所知，将可注射的明胶基水凝胶与治疗性干细胞联合使用，是首次在体外和...

心脏干细胞治疗已成为心肌修复与再生的一种潜在策略1,4。尽管近年来在动物模型和临床试验中取得了积极成果，但由于移植细胞在梗死心肌组织中的滞留率低且存活率差，干细胞治疗在心肌修复中的应用仍受到限制3,4。因此，基于细胞的组织工程技术，包括可注射生物材料5、心脏贴片6和细胞片层7，已被广泛研究，以提高细胞在宿主心肌中的滞留与整合能力。
在各种生物工程心脏组织修复的潜在方法中，将可注射水凝胶与适当类型的细胞（如间充质干细胞（MSCs）、胚胎干细胞（ESCs）和诱导多能干细胞（iPSCs））相结合，是一种有效将细胞递送至心肌区域的有吸引力的策略8,9。明胶是一种广为人知的天然聚合物，由于其良好的生物相容性、显著的生物可降解性以及相较于多种用于生物医学应用的生物材料更低的免疫原性，可被用作可注射基质。尽管基于明胶的可注射平台具有巨大潜力，但其在体内的适用性仍受限于其较低的机械刚度以及在生理环境中易于降解的特性。
为了克服这些局限性，已提出一种基于明胶、含有羟基苯丙酸的新型且简单的水凝胶设计，可用于体内应用。明胶-羟基苯丙酸（GH）共轭物可在辣根过氧化物酶（HRP）的作用下原位交联，并将多种药物、生物分子或细胞包封于水凝胶中，显示出在组织工程应用中的巨大潜力10,11,12,13,14。此外，我们近期研究了包封间充质干细胞（MSCs）的GH水凝胶的治疗效果，并在小鼠心肌梗死（MI）模型中证实了其在心脏修复与再生中的成功应用15。在本实验方案中，我们描述了一种将MSCs包封于GH水凝胶中并进行体外三维（3D）增殖的简单技术。同时，我们介绍了一种外科手术方法，通过冠状动脉结扎建立小鼠心肌梗死模型，并将负载MSCs的GH水凝胶移植至梗死心脏的心肌内。

<table><tbody><tr><td>4 % 多聚甲醛 (PFA)</td><td>Intron</td><td>IBS-BP031-2</td><td></td></tr><tr><td>5-0 丝线缝合线</td><td>AILEE</td><td>SK534</td><td></td></tr><tr><td>8-0 聚丙烯缝合线</td><td>ETHICON</td><td>M8732H</td><td></td></tr><tr><td>8孔细胞培养板</td><td>Nunc LAB-TEK</td><td>154534</td><td></td></tr><tr><td>Angiocath Plus (22GA) 导管</td><td>BD Angiocath Plus</td><td>REF382423</td><td></td></tr><tr><td>抗生素-抗真菌剂</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>离心机</td><td>GYROGEN</td><td>1582MGR</td><td></td></tr><tr><td>共聚焦显微镜</td><td>Zeiss</td><td>LSM 510</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td>MARIENFELD</td><td>101242</td><td></td></tr><tr><td>高级高温电灼套装</td><td>Bovie</td><td>QTY1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14040-133</td><td></td></tr><tr><td>双筒注射器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>伊红</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>HT110116</td><td></td></tr><tr><td>乙醇</td><td>EMSURE</td><td>K49350783 739</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清 (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Fechtner 钛合金结膜镊</td><td>WORLD PRECISISON INSTRUMENTS</td><td>WP1820</td><td></td></tr><tr><td>异硫氰酸荧光素同分异构体 I (FITC)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>F7250</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>HEBU</td><td>HB0458</td><td></td></tr><tr><td>脱毛膏</td><td>Ildong Pharmaceutical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>加热垫</td><td>Stoelting</td><td>50300</td><td>恒温毯系统</td></tr><tr><td></td><td></td><td>50301</td><td>50300 型加热垫替换件 (10 X 12.5 cm)</td></tr><tr><td>苏木精</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>HHS80</td><td></td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶 (HRP; 250-330 U/mg)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P8375</td><td></td></tr><tr><td>过氧化氢 (H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; 30 wt % in H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>216763</td><td></td></tr><tr><td>碘</td><td>Green Pharmaceutical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD 细胞染色试剂盒</td><td>Thermo Fisher</td><td>R37601</td><td></td></tr><tr><td>机械呼吸机</td><td>Harvard Apparatus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>微量离心机</td><td>HANIL</td><td>Micro 12</td><td></td></tr><tr><td>显微持针器</td><td>KASCO</td><td>37-1452</td><td></td></tr><tr><td>显微剪刀</td><td>HEBU</td><td>HB7381</td><td></td></tr><tr><td>显微镜</td><td>OLYMPUS</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>MT 染色试剂盒</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>HT1079-1SET</td><td>Weigert&amp;rsquo;s 铁苏木精溶液</td></tr><tr><td></td><td></td><td>HT15-1KT</td><td>三色染色 (Masson) 试剂盒</td></tr><tr><td>石蜡</td><td>LK LABKOREA</td><td>H06-660-107</td><td></td></tr><tr><td>PBS 缓冲液</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>PHK26 染色试剂盒</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>MINI26</td><td></td></tr><tr><td>切片扫描仪</td><td>Leica</td><td>SCN400</td><td></td></tr><tr><td>手术剪刀</td><td>HEBU</td><td>HB7454</td><td></td></tr><tr><td>手术胶带</td><td>3M micopore</td><td>1530-1</td><td></td></tr><tr><td>组织包埋盒</td><td>Scilab Korea</td><td>Cas3003</td><td></td></tr><tr><td>超声耦合剂</td><td>SUNGHEUNG</td><td>SH102</td><td></td></tr><tr><td>Trout-Barraquer 弯头持针器</td><td>KASCO</td><td>50-3710c</td><td></td></tr><tr><td>超声系统</td><td>Philips</td><td>Affiniti 50</td><td></td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>JUNSEI</td><td>25175-0430</td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠心肌梗死模型中注射型水凝胶负载间充质干细胞的心肌内移植

Intramyocardial Transplantation of MSC-Loading Injectable Hydrogels after Myocardial Infarction in a Murine Model

目前用于预防心肌梗死后心力衰竭的干细胞治疗面临的主要问题之一，是移植细胞在受损心肌中的滞留率和存活率较低，从而限制了其治疗效果。近年来，支架类生物材料的应用受到关注，因其有望改善并最大化干细胞治疗的疗效。本实验方案旨在介绍一种简单直接的技术，利用可注射的羟基苯基丙酸（GH）水凝胶来移植骨髓来源的间充质干细胞（MSCs）；由于这类水凝胶具备原位交联能力和高生物相容性，因此非常适合作为心脏组织工程中细胞递送的载体平台。我们展示了一种制备负载MSCs的GH水凝胶（MSC/水凝胶）的简便方法，并在三维（3D）体外培养条件下评估其细胞存活与增殖情况。此外，我们还演示了在小鼠体内进行心肌内移植MSC/水凝胶的技术，详细描述了通过结扎左前降支（LAD）冠状动脉诱导心肌梗死（MI）的手术操作，以及随后的MSC/水凝胶移植过程。

为了有效将间充质干细胞（MSCs）递送至梗死心肌，本实验方案采用了如图1所示的可原位交联的负载MSCs的水凝胶。在体内移植前，通过三维体外活/死细胞染色实验（活细胞：绿色；死细胞：红色）验证了MSCs在GH水凝胶中的增殖与存活情况。如图2所示，代表性图像显示MSCs在GH水凝胶内充分增殖，形成分支状网络结构。此外，在第14天可清晰观察到MSCs形成的复杂多细胞三维结构，表明GH水凝胶能够为包封的细胞提供适宜的微环境。
通过左前降支结扎法诱导心肌梗死（MI）后，将负载间充质干细胞（MSC）的明胶-肝素（GH）水凝胶经心肌内移植至梗死周围区域（图3A）。如图3B所示，MSCs与凝胶在梗死区域得到了良好维持。用PHK26（红色）染色的MSCs与用FITC（绿色）染色的GH水凝胶紧密结合，表明MSCs在梗死心脏中成功植入并长期保留，适用于体内应用。</p...

基于干细胞的治疗已成为修复心肌梗死后受损心肌组织的有效策略。我们提供了一种利用可被酶促交联的明胶水凝胶进行干细胞移植的最佳体内应用方法。

目前用于预防心肌梗死后心力衰竭的 cardiac stem cell 疗法面临的主要问题之一是细胞的滞留率和存活率较低……

该方法有助于解决当前加重的心脏治疗中的一些关键问题，例如移植细胞在梗死心脏中留存率低和存活率低导致的应用范围受限。为解决这一问题，该方法可提供一种可靠的技术，用于在小鼠模型中研究通过可注射水凝胶进行心肌内移植干细胞，该模型是研究心肌梗死后心脏组织修复与再生的优秀平台。该技术的主要优势在于，它是一种可行的方法，可通过原位交联包覆的可注射水凝胶，提高干细胞在心肌内移植后的留存率和存活率。这些水凝胶为心肌组织工程提供了多种应用前景，例如不仅可递送干细胞，还可递送生长因子、遗传物质和药物，以最大限度地增强其在梗死心肌组织中的治疗效果。体外实验操作流程将由本实验室的研究技术员李恩美（Eunmi Lee）进行示范。朴恩惠（Eun-Hye Park）和成恩华（Eunhwa Seong）两位研究技术员将示范体内实验的操作流程。在37摄氏度和5%二氧化碳条件下，在100毫米培养皿中培养间充质干细胞（MSCs）。当细胞达到80%融合度时，用DPBS洗涤培养皿两次，并加入1毫升胰蛋白酶替代物，在37摄氏度下孵育3分钟。然后向细胞中加入9毫升培养基，以500 × g离心3分钟。弃去所得上清液。将细胞重悬于1毫升磷酸盐缓冲液（PBS）中，并将细胞悬液置于冰上保存。取10微升细胞悬液与10微升台盼蓝混合稀释，使用自动细胞计数仪测定细胞浓度。将MSC重悬至浓度为1×10⁷个细胞/毫升，并转移至1毫升离心管中。在PBS中配制6.25%的GH偶联物溶液，并分装至两个小瓶中。随后将GH溶液分别与6微克/毫升的HRP或0.07%过氧化氢混合。将细胞悬液在1000 × g条件下短暂离心，小心吸除上清液。然后将细胞沉淀与GH溶液A混合。将含有MSCs的GH溶液A和GH溶液B分别加入双筒注射器的两侧。取300微升含MSCs的混合GH溶液，以每毫升500万个细胞的终浓度，接种至八孔腔室载玻片中。原位水凝胶形成并通过酶交联包封间充质干细胞后，加入700微升含有10%胎牛血清和1%抗生素-抗真菌溶液的DMEM培养基。将载玻片置于37摄氏度、5%二氧化碳条件下培养，每两至三天更换一次培养基。手术前，使用脱毛膏去除小鼠胸部毛发，并用碘液对皮肤进行消毒。将小鼠置于手术台上，通过向气管插入导管进行插管，以机械通气方式提供辅助氧气。使用手术剪轻轻切开皮肤，随后用显微剪刺入肋间肌。使用5-0丝线缝合分离左侧第二和第三肋骨，以保持胸腔开放。使用持针器以8-0聚丙烯缝线小心结扎左前降支冠状动脉，并用电灼法切断缝线。观察左心室前壁立即出现的颜色变化。诱导心肌梗死后，在梗死边缘区的两个不同位点各注射10微升负载GH的MSC溶液。复位打开的胸腔，并使用5-0缝线缝合肌肉和皮肤。拔除气管插管，将小鼠置于铺有红外灯的笼子中恢复。进行超声心动图检查，测量左心室前壁、左心室内径和左心室后壁的相应径线，以获取心肌壁厚度、心腔大小及缩短分数。在体内移植前，通过三维体外活死细胞染色实验确认间充质干细胞（MSCs）在GH水凝胶中的增殖与存活情况。代表性图像显示MSCs在GH水凝胶内充分增殖，形成分支状网络结构。在第14天可明显观察到MSCs形成了广泛的多细胞三维结构，表明GH水凝胶能够为包封的细胞提供适宜的微环境。在诱导心肌梗死之后，将负载MSCs的GH水凝胶直接移植至梗死周围区域。MSCs和凝胶在梗死区域内得到了良好的维持。MSCs 被良好地整合到 GH 水凝胶中。为验证负载 MSCs 的 GH 水凝胶的治疗效果，通过移植后第 28 天的超声心动图和组织学分析评估心脏功能和结构的变化，并在不同治疗组之间进行比较。代表性超声心动图显示，MSC 凝胶治疗组的心脏功能得到改善，包括缩短分数、射血分数以及收缩末期容积。此外，组织学分析显示，与其它组相比，MSC凝胶治疗组的纤维化程度更轻、梗死区心壁更厚、梗死面积更小，表明该方案显著减轻了左心室重构。通过该技术，我们在小鼠心肌梗死模型中实现了干细胞的长期存留与增殖，并显著改善了心脏结构与功能。该技术可进一步拓展至大型动物研究，并有望转化为临床应用，作为一种通过促进心肌组织修复与再生来预防梗死后心力衰竭的新策略。

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Murine 模型心肌梗塞后 MSC 加载注射水凝胶的心内移植

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LAD结扎：一种小鼠心肌梗死模型

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心肌内细胞递送：小鼠心脏中的观察

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一种基于水凝胶支架和纤维蛋白胶的方法在小鼠心肌梗死模型中递送治疗药物

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在本方案中，我们演示并详细阐述了如何利用人诱导性多能干细胞进行心肌细胞分化与纯化，以及如何通过Rho相关蛋白激酶抑制剂预处理，在小鼠心肌梗死模型中进一步提高其移植效率。...

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我们旨在建立一种通过左回旋支动脉阻塞和快速起搏诱导心力衰竭的猪模型，以评估干细胞心肌内移植在细胞治疗中的效果和安全性。...

建立用于干细胞治疗的猪心肌梗死后心力衰竭模型

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小鼠模型中缺血再灌注损伤后延迟的心肌内干细胞递送

本方案旨在将三维生物打印贴片移植到模拟心力衰竭的小鼠梗死心外膜上。内容包括麻醉、开胸手术、左前降支冠状动脉永久性结扎以及将生物打印贴片应用于心脏梗死区域的详细操作步骤。...

在小鼠心肌梗死模型中移植三维生物打印补片

在小鼠心肌梗死部位周围进行超声引导下的细胞递送是一种安全、有效且便捷的细胞移植方法。...

超声引导下诱导多能干细胞来源的心肌细胞在心肌梗死小鼠中的移植

本文详细介绍了一种采用29 G x 88...

超声心动图引导下靶向且可靠的干细胞心肌内注射在心肌梗死大鼠模型中的应用

了解利用酶交联明胶水凝胶进行小鼠心肌梗塞后心内间充质干细胞移植的方法。该技术可提高移植细胞的滞留率和存活率，为心脏组织修复与再生研究提供可行方案。

小鼠心肌梗死模型中注射型水凝胶负载间充质干细胞的心肌内移植

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