通过卵母细胞维他化保存生育能力:临床和实验室视角

卵母细胞化和加热程序对维持生育至关重要。按照此协议进行演示，用户可以最大限度地提高这些程序的有效性。卵母细胞的生育保护是当今一种既定且合乎道德的方法。

它能够达到有效和一致的临床结果，并克服与胚胎冷冻保存相关的道德和法律限制。为了熟练掌握病毒化过程，必须熟悉协议的所有临界点，特别注意样品接触低温保护剂的时间。在取回后的 38 小时内，在鉴定后立即将所有塑料用品标上患者的姓名、ID 和溶液类型，并要求证人在冷冻设备上确认患者的信息。

当所有的用品都贴上标签时，小心地将每瓶卵母细胞倒置数次，将30微升的 HEPES 缓冲介质与人类血清白蛋白补充，并在培养皿上放置 30 微升相邻的均衡溶液。使用脱衣舞移液器将卵母细胞放在第一滴中，并创建一个中等到 30 微升的平衡液滴的桥梁，以获得低温保护剂浓度的逐渐增加。三分钟后，在板中加入第二个 30 微升的均衡液滴，然后使用移液器在溶液滴之间架起一座中等桥。

当卵母细胞平衡时，为每个用于板的低温设备添加一滴30微升的平衡溶液。三分钟后，将卵母细胞移入纯平衡溶液中六到九分钟，使卵母细胞恢复到初始大小。卵母细胞恢复后，准备一个含有一毫升化溶液的中央井试管婴儿盘。

将卵母细胞以尽可能小的介质转移到盘中，并小心地移动它们，以消除任何多余的均衡溶液。在孵化结束前约 10 秒，将标有患者信息的低温设备置于显微镜下，并调整低温设备尖端的聚焦。将卵母细胞放在尖端旁边的低温装置上，以最少的化色溶液，将脱衣舞移液器从卵母细胞中移开，以去除任何多余的化色溶液，使卵母细胞覆盖在薄薄的中层。

快速将低温装置投入液氮中，并快速摇动设备以去除其表面的任何气泡。用钳子将低温装置的保护帽握住，在将装置插入盖中之前，先用液氮填充盖，同时将丙烯条保持在液氮中。然后将冷冻设备存储在标有患者信息的 visotube 中，并更新实验室表。

对于卵母细胞加热，小心地倒置每瓶解冻、稀释和洗涤溶液加热到室温，并在培养皿的中央井中加入一毫升解冻溶液，在37摄氏度下至少孵育一小时。将所有塑料用品标上患者的姓名、身份证和溶液类型，并要求证人在低温设备上确认患者的信息。要加热每个设备，在六井板的第一口井中加入 200 微升稀释液，并在平板的第二井和第三井中加入等量的洗涤液。

将 PBS 添加到井外区域，以防止溶液蒸发。将解冻溶液的盘放在立体显微镜下，并将焦点调整到盘的中心。小心地扭动以去除低温装置的保护盖，同时将丙烯条保留在液氮中，并尽快将低温装置从液氮中转移到解冻溶液中，以避免脱毒的风险。

一分钟后，聚焦低温设备的尖端以定位卵母细胞，并最终使用脱衣舞移液器轻轻地将卵母细胞从设备中释放出来。使用直径为 170 微米的脱衣舞移液器将卵母细胞和少量解冻溶液转移到六口井板第一井的稀释溶液中。三分钟后，将卵母细胞移入第一口洗涤液井五分钟。

在孵化结束时，将卵母细胞转移到第二口洗涤液井，在37摄氏度下孵育一分钟，然后将卵母细胞转移到适当的量预平衡IVF培养基中一小时，并更新实验室表。在12年期间，285名妇女至少进行了一次卵母细胞检索，使收集的成熟卵子全部被检出。这些妇女大多接受了一次检索。

35人多次被取回。接受卵母细胞检索的原因通常被描述为癌症、癌症、非医学和其他疾病以外的医学原因。有卵子化医学原因的患者和因癌症而进行生育保护的患者比非医学或其他原因的患者年轻，并且表现出更高的蚂蚁卵泡计数。

然而，由于患者医疗原因的平均成熟率略低，平均卵母细胞数量在各组之间相似。大约一半的病人有癌症以外的医疗原因，而大多数有其他原因的卵子化患者实际上返回加热。相反，极少数因癌症或非医疗原因而进行生育保护的患者使用其化卵母细胞进行试管婴儿。

尽管病毒化和变暖之间的时间不同，但卵母细胞的存活率在患者群体之间相似，证实了卵母细胞化和加热协议的功效和安全性。此外，存活率与手术员的病毒化和升温经验无关。可能影响结果一致性的最关键步骤是与变暖相关的步骤。

因此，仔细控制解冻解决方案的体积和温度非常重要。卵巢组织冷冻保存是目前唯一正在调查的策略，作为青春期前患者的一种选择。虽然很有希望，但这种方法有重要的局限性，限制了其应用。