蚊虫触角电生理记录技术分步指南

进行触角电位图记录时，使用处于特定且一致生理状态的蚊虫对于获得可靠结果至关重要。该逐步操作方案可实现对蚊虫持久的触角电位记录。该方法适用于多种蚊虫种类，并可用于雌虫和雄虫。

静电触角图技术也可应用于其他昆虫模型，包括甲虫、蝇类、锥蝽和蚂蚁。首先，从用于防止降解的-20摄氏度冰箱中取出装有气味混合物及溶剂对照的1.5毫升棕色小瓶。接着，用移液器吸取10 µL气味溶液，滴加到置于已标记玻璃注射器内的滤纸条上。

在实验当天分离蚊虫。在显微镜下操作，用镊子轻轻折断两根带细丝的硼硅酸盐毛细管的尖端。在进行触角电位图（EAG）实验之前，确保电极夹内部清洁，无硼硅酸盐碎屑。

然后进行氯化处理，将电极架的银丝浸入纯漂白剂中5分钟，直至银丝变为深色、无光泽的灰色。随后用清水冲洗银丝。松开橡胶塞，使用20号针头将生理盐水溶液注入毛细管内部。

用液体冲洗毛细管，并将导线插入两根毛细管中。确保导线尖端距离毛细管尖端小于一毫米。将毛细管穿过电极架内的橡胶环，注意不要损坏橡胶环，确认无气泡存在后，轻轻拧紧橡胶塞。

将毛细管较宽的一端连接参考电极支架，较窄的一端连接记录电极支架。将两个安装好的电极支架放置在湿润的清洁湿巾上，防止电极尖端在安装头部前干燥。确保气浮台已升起。

气路无阻塞且气源已打开。确认医用空气罐已充满，以避免在实验中途更换，并检查湿化器中是否有气泡产生。打开计算机、软件程序及阀门电源。

在确认网络连接后，发送一个控制脉冲以验证输出脉冲的阀门是否正常工作。将一块铝板放在冰上，并在其上覆盖一片湿润的清洁擦拭布，于角落处放置一小滴电极凝胶。将蚊子杯置于冰上，使蚊子降温。

用显微剪刀剪去蚊子每根触角的尖端。用镊子将蚊子拖至电极凝胶小滴旁，轻轻将每根触角的尖端浸入凝胶中。用镊子将蚊子触角拉出，同时保持它们彼此靠近。

使用显微剪刀切下蚊子的头部。轻轻将参考电极的尖端浸入凝胶中，然后将其与蚊子颈部接触，使头部粘附在电极上。将参考电极头部置于显微操作器上。

将两个电极支架连接到放大器上。使用显微操作器将记录电极尽可能靠近触角尖端。然后将触角尖端插入记录电极中。

将气路管放置在距离蚊子头部标本一厘米的位置。打开放大器和噪声抑制器，并确保基线信号无明显噪声。当噪声水平达到满意状态后，将第一支气味注射器插入气路孔以开始测试，并关闭法拉第笼。

然后在EAG软件中点击记录以传递脉冲。以毫伏为单位测量EAG反应的幅度，随后进行下一个气味物质或浓度的测试。该实验成功证明，不同蚊虫物种对不同化学物质可表现出差异性的嗅觉反应。

矿物油作为阴性对照，未引起反应。通过使用鳄鱼夹将元件接地至法拉第笼，可减少因电噪声导致的结果误差。同一气味物质对不同种类蚊虫的反应阈值在幅度上可能存在差异。

例如，与埃及伊蚊、斯氏按蚊和致倦库蚊相比，北方曲须库蚊（Toxorhynchites rutilus septentrionalis）产生的EAG信号非常强。在对阳性对照物苯甲醛的反应中观察到明显的电位偏转，而对阴性对照物矿物油则无反应。

这些平均触角反应以柱状图形式展示。此外，通过向蚊子触角施加特定化学物质并逐步增加其浓度，绘制剂量-反应曲线，从而确定每种蚊子物种对该化学物质的检测阈值。在头部被切断并固定后，应尽快开始记录，以确保样本具有良好的反应性。

触角电位图（EAG）可用于确定蚊虫触角是否对特定浓度的某种化学物质产生反应。然而，该方法无法判断该化学物质的作用性质，例如，无法确定其是引诱剂还是驱避剂。