蜜蜂群落花粉的采集和鉴定

该协议描述了三种方法:使用花粉陷阱收集皮质花粉，按颜色对花粉进行分类和乙酰分解。这些方法通常用于与授粉媒介相关的研究，例如授粉效率、传粉媒介觅食动态以及饮食质量和多样性。花粉捕获是从蜜蜂群中收集大量花粉的简单方法。

按颜色对花粉颗粒进行分类是一种经济实惠的花粉分类方法，需要低专业知识，并且乙酰分解允许识别与每种颗粒颜色相关的植物分类单元。演示该程序的将是教师研究助理Ellen Topitzhofer和我实验室的研究生研究助理Emily Carson。首先，确定何时从所需的养蜂场位置捕获花粉，并选择最佳的蜜蜂群落来捕获花粉。

通过计算返回蚁群入口的觅食者两分钟来评估菌落强度，然后选择返回觅食者总数最多的菌落。选择状况良好的带有木制器的蜂箱，最好没有额外的入口和翘曲的盖子。使用替代入口较少的蜂群，因为返回此类蜂群的觅食蜂更有可能重新定向到陷阱入口。

尽可能选择朝南的蜂巢入口。如果蜂箱是码垛式的，请在给定托盘上面向相同方向的每个菌落上安装花粉陷阱，以避免觅食者漂移到邻近的蜂巢入口。如果需要，通过检查框架是否存在幼虫并选择具有相对大量幼虫的菌落来评估菌落的育雏巢。

接下来，在选定的蜜蜂群落上安装花粉陷阱。对于前置式疏水阀，请用订书钉、螺钉和胶带将疏水阀固定在入口前面，或将疏水阀连接到缠绕在蜂巢上的蹦极绳上。用非粘性和可成型材料密封所有其他可能的进入菌落的入口，例如乳胶或聚氨酯泡沫或用于螺旋钻孔的八号硬件布。

使用胶带处理小裂缝。如果使用位于地面蜂箱上的前置式疏水阀，请在收集篮和草之间放置橡胶垫等屏障，以避免露水损坏水分。在安装后 24 小时和当天的觅食飞行开始之前，接合花粉陷阱的诱捕机制。

从收集托盘中收集小花粉并将其放入塑料袋或离心管中，然后将其存放在装有冰的冷却器中。用勺子或大勺子舀出10克花粉作为代表性的子样品。从子样品中取出所有蜜蜂部分和碎片，然后使用花粉颜色和纹理将 10 克子样品中的每个花粉颗粒分类为颜色组以区分组。

为了确保下游步骤中每个颜色组至少有 0.25 克，请将任何不够丰富的颗粒放入杂组中以形成至少 0.25 克的颜色组。使用潘通颜色指南命名每个单独的颜色组。从每个颜色组中称出0.25克花粉颗粒。

穿上适当的个人防护装备。然后，向每个含有0.25克彩色组花粉的微量离心管中缓慢加入500微升冰酸。在目视检查管子时，用干净的牙签搅拌花粉 10 到 15 秒。

将样品以1， 100倍G离心三分钟，然后将上清液倒入酸性废渣中。为了制备乙酰分解混合物，向标有乙酰分解混合物的烧杯中加入10.8毫升冰酸。然后，从储备溶液中缓慢加入1， 200微升浓硫酸。

向每个试管中缓慢加入 1， 000 微升乙酰分解混合物，并用干净的牙签搅拌 10 至 15 秒。将样品放在预热至80摄氏度的加热块上。孵育试管五分钟，在孵育中用干净的牙签彻底搅拌每个试管。

孵育后，向每个试管中缓慢加入500微升冰醋酸，并用干净的牙签搅拌10至15秒。离心样品，然后将每个管中的上清液倒入酸性废烧杯中。通过向每个管中加入 1， 000 微升蒸馏水并用干净的牙签搅拌，用水冲洗每个样品三次。

离心样品并将管中的上清液倒入碳酸氢钠烧杯中。然后，重复水冲洗两次。从乙醇烧杯中加入1， 000微升95%乙醇到每个管中，并用干净的牙签搅拌。

然后，离心样品并将管中的上清液倒入乙醇废烧杯中。混合safranin-O染色储备溶液，向每个试管中加入5至10滴。用牙签搅拌 10 到 15 秒，然后将牙签留在管中。

从乙醇烧杯中加入1， 000微升95%乙醇到每个管中并搅拌。离心样品后，将上清液倒入乙醇废烧杯中。向每个试管中加入 10 至 15 滴甘油，搅拌内容物 10 至 15 秒。

将试管在通风橱中打开，以在环境室温下蒸发乙醇至少两个小时。标记显微镜载玻片以进行花粉鉴定。从管中取出一滴花粉残留物，并将其放在其标记的显微镜载玻片的中心，使液滴稍微扩散。

将干净的盖玻片放在载玻片上的水滴上，并用透明指甲油将盖玻片密封在载玻片上。使用所述方法收集皮质花粉，按颜色分类，并鉴定每个颗粒颜色组的植物来源以评估花粉多样性。每个花粉采集样本都有多个可区分的颜色组。

在一些样品中，花粉颜色组仅包含四到五个颗粒。然而，大多数组具有显着更多，并作为自己标记的颜色组进行乙酰分解。乙酰分解后，使用明场光学显微镜通过确认从每个研究地点周围区域收集的凭证标本的形态特征，有效地将每个颜色组识别到其最低分类等级。

从杏仁作物位置收集的花粉比从其他作物收集的花粉具有相对较低的花粉多样性，每个站点3.2个植物分类群中平均有三种颗粒颜色 可以测试分类的花粉是否含有杀虫剂，以阐明蜜蜂饲料植物上发现的农用化学品，或分析化学成分以确定其对蜜蜂的营养价值。这项研究的结果为菌落收集的花粉中观察到的物种多样性提供了宝贵的见解，突出了杏仁种植系统中收集的花粉的多样性非常低。