Name: 通过胆管 TNBS 输液治疗慢性胰腺炎的鼠标模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: 了解通过胆管TNBS输注建立小鼠慢性胰腺炎模型的优化技术。该方法使用Von Frey单丝评估疼痛反应，为研究胰腺炎发病机制和治疗策略提供可靠的动物实验平台。

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本研究由美国退伍军人事务部（VA-ORD BLR&amp;#38;D 优秀奖 I01BX004536）以及美国国立卫生研究院资助项目 # 1R01DK105183、DK120394 和 DK118529（资助予 HW）支持。我们感谢吴红菊博士分享技术经验。

所有实验程序均经南卡罗来纳医科大学和拉尔夫·H·约翰逊医疗中心的机构动物护理与使用委员会批准。本研究使用8至10周龄的C57BL/6J雄性小鼠。小鼠饲养于标准的12小时光照/12小时黑暗循环环境中，可自由获取食物和水。
1. 注射用TNBS溶液的制备
<ol>
	<li>配制含10%乙醇的0.9%生理盐水。将TNBS储备液（见材料表）溶于10%乙醇中，终浓度为7.5 mM，方法是将7.5 µL TNBS加入1 mL 10%乙醇中。 
	注意：TNBS具有化学危害性。应在通风橱内配制该溶液，并使用个人防护装备（如手套、护目镜和实验服），避免直接接触TNBS。</li>
	<li>用31号针头的胰岛素注射器吸取50 µL 0.75% TNBS溶液。另取相同规格的注射器，吸取50 µL含10%乙醇的生理盐水作为溶剂对照。将注射器置于冰上，并避光保存，直至使用。</li>
</ol>
2. 小鼠准备与手术
<ol>
	<li>剃除腹部手术区域的毛发。</li>
	<li>术前注射一次镇痛剂（例如，腹腔注射布托啡诺 0.1 mg/kg）。</li>
	<li>使用 1.5–2% 异氟烷和 1 L/min 氧气诱导并维持小鼠全身麻醉。通过轻捏脚趾并观察动物是否无反射反应来确认麻醉效果。</li>
	<li>手术期间将小鼠置于加热的手术垫上。当小鼠处于麻醉状态时，在每只眼睛上涂抹兽用眼膏。</li>
	<li>用 2% 碘伏擦拭手术区域 3 次，再用 70% 酒精脱碘，对手术部位进行消毒（材料表）。</li>
	<li>使用显微剪刀行剖腹手术，制作 0.5–1 cm 的切口。</li>
	<li>轻柔地暴露十二指肠，并使用棉签定位胆总管（材料表）。</li>
	<li>在近端胆总管上方放置一个直型显微止血夹（材料表），以防止 TNBS 或溶剂溶液流入肝脏和胆囊（图 1A、B）。</li>
	<li>轻柔地暴露十二指肠，并通过乏特氏壶腹将针头插入胰管。</li>
	<li>当针头进入导管后，在针头周围的十二指肠部位放置一个弯型显微止血夹（材料表）（图 1A），以固定针头位置，并防止注射液进入十二指肠。</li>
	<li>在 1 分钟内缓慢将溶液（TNBS 或溶剂）注入胰管。 
	注意：TNBS 需在 1 分钟内缓慢注入，使用带有 5/16 英寸、31G 针头的胰岛素注射器灌注胰腺时，较易控制注射速度。操作时尽量保持手部稳定，避免刺破胆管。若 TNBS 注射成功，可在胰腺内观察到黄色着色。</li>
	<li>注射完成后，先小心移除靠近肝脏侧的微型夹子，再移除固定针头和十二指肠的微型夹子。</li>
	<li>小心地将十二指肠复位至原始解剖位置。</li>
	<li>在关闭腹腔前，向腹腔内留置 0.5 mL 温热的无菌生理盐水（36–37 °C），以帮助十二指肠复位并促进蠕动功能恢复。</li>
	<li>使用 5-0 缝线连续缝合肌肉层，再使用 4-0 缝线间断缝合皮肤。</li>
	<li>将装有小鼠的笼子放置在加热垫上，以便其从麻醉中恢复。</li>
	<li>确认小鼠体温正常且能够自主活动后，再将其送回饲养室。</li>
	<li>术后 48 小时内每 12 小时给予一次镇痛剂（例如，腹腔注射布托啡诺 0.1 mg/kg），并持续提供辅助加热。</li>
</ol>
3. 监测小鼠行为
<ol>
	<li>术后第7天拆除缝线。</li>
	<li>术后第一周内每天监测小鼠的健康状况和行为，观察是否存在痛苦迹象，如发声、弓背姿势或活动减少。每隔一天测量一次体重。</li>
	<li>使用Von Frey单丝纤维（VFFs）在术前以及术后2周和3周检测腹部机械性痛觉过敏，方法如下9,14。
	<ol>
		<li>按照施加力由小到大的顺序，将不同强度的VFFs以1–2秒间隔在上腹部区域各刺激10次。若出现腹部抬起、回缩或舔舐（缩腹反应），则视为阳性反应。</li>
		<li>若未观察到阳性反应，则改用更强的刺激；若观察到阳性反应，则改用更弱的刺激。缩腹阈值定义为小鼠在50%的刺激次数中产生反应时所对应的力值。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 胰腺组织的采集与组织学分析
<ol>
	<li>在麻醉条件下通过颈椎脱位处死小鼠，并小心地从肠道及其他器官中分离胰腺。</li>
	<li>将胰腺置于10%多聚甲醛中固定24小时，经石蜡包埋后切成5 µm厚的组织切片，并置于载玻片上用于染色。</li>
	<li>采用已有文献报道的标准方法进行苏木精-伊红染色和马松三色染色4。</li>
</ol>

<ol><li>Klauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+induced+vs.+classical+animal+models+of+chronic+pancreatitis%3A+a+critical+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22The+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison.</a> The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).</li>
<li>Liao, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+2+is+involved+in+%C2%B5-opioid+receptor+suppression+in+the+spinal+dorsal+horn+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).</li>
<li>Gui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+activity+governs+increased+susceptibility+to+pancreatitis+in+mice+expressing+human+PRSS1R122H%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H.</a> The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stem+Cell+Therapy+Mitigates+Chronic+Pancreatitis+via+Differentiation+into+Acinar-like+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice.</a> Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).</li>
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<li>Scoggins, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-dependent+acinar+cell+apoptosis+triggers+epithelial+proliferation+in+duct-ligated+murine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).</li>
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<li>Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+behavioral+changes+in+nociception+in+a+novel+rat+model+of+chronic+pancreatitis+for+the+study+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain.</a> Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).</li>
<li>Cattaruzza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+ankyrin+1+mediates+chronic+pancreatitis+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).</li>
<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+insular+cortex+mediates+hyperalgesia+induced+by+chronic+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats.</a> Molecular Brain. 12 (1), 76(2019).</li>
<li>Puig-Diví, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAX4+Gene+Transfer+Induces+alpha-to-beta+Cell+Phenotypic+Conversion+and+Confers+Therapeutic+Benefits+for+Diabetes+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment.</a> Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).</li>
<li>Ceppa, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+proteases+mediate+inflammatory+pain+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).</li>
<li>Puig-Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitability+and+suppression+of+A-type+K%2B+current+of+pancreas-specific+afferent+neurons+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).</li>
<li>Drewes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+in+chronic+pancreatitis%3A+the+role+of+neuropathic+pain+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms.</a> Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).</li>
</ol>

所有作者均声明不存在利益冲突。

经胆管灌注TNBS诱导小鼠慢性胰腺炎在技术上具有挑战性，因为药物灌注后3-4天内最多可达22.5%的小鼠死亡10本研究在先前研究的基础上优化了实验步骤，显著降低了小鼠的早期死亡率 &#60;10%。例如，增加药物体积（从35 μL增至50 μL）可确保药物到达&#160;整个胰腺。使用胰岛素注射器和较小的针头（31G）可减少对胰管的潜在损伤，以及胆汁泄漏至胆囊或腹腔的风险，后者极有可能导致小鼠在术后最初几天内死亡。夹闭胆管两端可防止TNBS泄漏至胆囊和肠道，从而避免可能的死亡风险。血管夹可将TNBS限制在注射的胰腺内，提高造模效率的同时减少对其他组织的损伤。此外，TNBS在高于0 °C的温度下不稳定，因此使用新鲜配制的TNBS可使慢性胰腺炎（CP）的诱导获得稳定的结果。
该方案可有效诱导8至12周龄雄性C57BL/6J小鼠产生CP&#160;并生成一种模拟慢性胰腺炎主要症状的模型，包括体重减轻、胰腺萎缩、纤维化以及可能的腹痛。与其他慢性胰腺炎小鼠模型相比，TNBS模型除用于评估炎症外，还被广泛用于评估镇痛效果<sup class="x...

慢性胰腺炎（CP）是一种慢性炎症性疾病，其特征为胰腺萎缩、纤维化、腹痛以及外分泌和内分泌功能的最终丧失1。目前的药物和外科治疗手段均无法根治该病，仅用于缓解由疾病引起的症状，如难治性腹痛、内分泌和外分泌功能障碍。因此，迫切需要更有效的治疗方法2。动物模型是深入理解该疾病机制并探索潜在治疗策略的重要工具3。目前已建立多种小鼠CP模型，其中胆囊收缩素（cerulein）模型和/或酒精模型应用较为广泛。胆囊收缩素是一种可刺激胰腺分泌的寡肽，已被证实能够稳定诱导出具有胰腺萎缩、纤维化等特征的CP模型4。另一种常用模型是连续注射L-精氨酸，可导致类似于人类患者所见的外分泌功能不全5。此外，通过完全或部分结扎胰管以及诱发胰管高压也可诱导CP的发生6,7。尽管已有多种可用于研究CP的动物模型，但目前尚无一种模型能有效模拟CP患者所经历的腹痛症状8。
既往研究表明，局部胰腺注射2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）可复制慢性胰腺炎（CP）患者所经历的持续性疼痛9,10,11。经TNBS处理的小鼠表现出腹部痛觉过敏、疼痛相关行为增加，以及对疼痛刺激的&#34;广泛性高敏感性&#34;，这一现象在CP患者中亦有观察到10。除了能准确模拟CP相关的疼痛外，TNBS模型还能复制人类疾病中的其他病理特征，如纤维化、单核细胞浸润以及腺泡细胞被脂肪组织替代10,12。然而，通过胆管输注TNBS在小鼠中是一项技术上具有挑战性的操作，可能引起动物死亡。据我们所知，目前尚无可视化操作流程展示胆管输注的具体实施方法。本文中，我们演示了通过胆管输注TNBS以建立CP小鼠模型的操作步骤。该技术将有助于生成用于研究CP及其他胰腺疾病的重要动物模型，并可用于向胰腺输注其他物质（如病毒、细胞）13。

<table><tbody><tr><td>10% 中性缓冲福尔马林（v/v）</td><td>Fisher Scientific</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>酒精消毒片，无菌</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>动物麻醉系统</td><td>VetEquip, Inc.</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>盐酸布托啡诺注射液</td><td>Par Sterile Products, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>离心管，15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>无水乙醇（200 proof），分子生物学级</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>超细显微解剖剪，4&amp;rdquo; 直头尖锐</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Graefe 镊子，4&amp;rdquo; 超精细尖端</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>加热垫</td><td>Amazon</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>Hegar-Baumgartner 持针器，5.25&amp;rdquo;</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>胰岛素注射器，带 31 号针头</td><td>BD</td><td>324909</td><td></td></tr><tr><td>碘伏消毒片</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>微型夹施加镊，5.5&amp;rdquo;</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>微型夹，直型强弯，1×6 mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5433</td><td></td></tr><tr><td>微型夹，直型，夹宽 0.75 mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>苦味酸磺酸溶液（TNBS），H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O 中 1 M</td><td>Millipore Sigma</td><td>92822-1ML</td><td></td></tr><tr><td>聚丙烯缝线 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>聚丙烯缝线 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠，0.9% 静脉注射液</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>手术巾，无菌</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>组织包埋盒</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-272416</td><td></td></tr><tr><td>von Frey 纤维丝</td><td>Bioseb</td><td>EB2-VFF</td><td></td></tr></tbody></table>

通过胆管tnbs灌注建立小鼠慢性胰腺炎模型

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

慢性胰腺炎（CP）是一种复杂的疾病，涉及胰腺炎症和纤维化、腺体萎缩、腹痛及其他症状。已有多种啮齿类动物模型被用于研究CP，其中胆管内输注2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）的模型可模拟CP中出现的神经病理性疼痛特征。然而，在小鼠中进行胆管给药在技术上具有挑战性。本方案展示了通过胆管输注TNBS建立CP小鼠模型的操作步骤。TNBS通过十二指肠乳头（Vater壶腹）注入胰腺。本方案对药物体积、手术技术以及操作过程中的药物处理进行了优化。经TNBS处理的小鼠表现出CP的典型特征，包括体重和胰腺重量下降、与疼痛相关的行为改变以及胰腺形态异常。通过这些改进，TNBS注射相关的死亡率极低。该操作不仅对于构建胰腺疾病模型至关重要，也适用于胰腺局部药物递送。

为了降低与该操作相关的实验小鼠死亡率，对胆管灌注步骤进行了优化10。TNBS 首先以 35 μL 或 50 μL 的总体积给予。使用 50 μL 体积注射 TNBS 可以覆盖整个胰腺，并诱导出更为均一的疾病表型（图 1B）。此外，使用配备 31G 针头的胰岛素注射器注射 TNBS 相较于常规注射器和针头能够更精确地控制灌注速度。相较于配制超过一小时的 TNBS，新鲜配制并在冰上保存、一小时内使用的 TNBS 可获得更佳的实验效果。通过上述改进，受体小鼠的死亡率得以控制，始终低于 10%。
体重减轻是慢性胰腺炎（CP）的特征之一。对照组小鼠在术后前3天内体重减少了约6%，随后逐渐恢复（第21天时达到原始体重的104.6%）（图1C）。相比之下，接受TNBS处理的小鼠在前5天平均体重减轻约15%，之后体重逐渐回升（第21天时为原始体重的99.8%）（图1C）。此...

慢性胰腺炎（CP）是一种以胰腺炎症和纤维化为特征的疾病，常伴有难以缓解的腹痛。本文重点优化通过胆管输注2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）建立小鼠CP模型的技术。

通过胆管TNBS灌注建立小鼠慢性胰腺炎模型

慢性胰腺炎（CP）是一种复杂的疾病，涉及胰腺炎症和纤维化、腺体萎缩、腹痛及其他症状。

慢性胰腺炎是一种复杂的疾病，涉及胰腺炎症、纤维化、腹痛及其他症状。胆管TNBS灌注模型可复制慢性胰腺炎患者中观察到的神经性疼痛。该胆管TNBS灌注方案已优化，用于在小鼠中诱导建立慢性胰腺炎模型。由于小鼠胆管药物融合在技术上具有挑战性，对其进行可视化将有助于刚接触该方法的研究人员。在手术前以及手术后两周和三周，使用Von Frey单丝纤维以递增的力度对8至10周龄的C57黑六小鼠上腹部区域进行刺激，每次施加力度持续1至2秒，重复10次。将腹部回缩或舔舐行为视为阳性反应。接下来，使用一支配备31号针头的胰岛素注射器，吸取50 µL freshly prepared的0.75% TNBS溶液。另取一支注射器，吸取50 µL含10%乙醇的生理盐水作为溶剂对照，并将两支注射器置于避光的冰上保存。在确认小鼠无脚掌反射反应后，通过剃毛或使用脱毛膏去除麻醉小鼠腹部的毛发，然后将其置于解剖显微镜下的加热手术垫上。每只眼睛涂抹兽医用软膏，并用三遍2%碘溶液和三遍70%乙醇棉片依次消毒手术部位。使用显微剪刀以连续动作做0.5至1厘米的切口，用棉签轻轻暴露十二指肠并定位胆总管。为防止治疗液流入肝脏和胆囊，借助显微镜在胆总管近端放置一个直形微型血管夹，将含TNBS的注射器针头经十二指肠乳头插入胰管。用弯形微型血管夹固定针头，并在1分钟内将溶液注入胰管。当所有溶液输送完毕后，小心移除微型夹具，并确认十二指肠已恢复至原始位置。在关闭腹腔前，加入 500 微升 36 至 37 摄氏度的无菌生理盐水，以帮助十二指肠复位，并促进蠕动功能的恢复。使用 5-0 缝线行连续缝合关闭肌层切口，再使用 4-0 缝线行间断缝合关闭皮肤。然后将小鼠置于加热垫上的恢复笼中，并进行监测，直至完全恢复卧姿。术后第一周内每天监测小鼠的健康状况和行为，观察是否存在痛苦迹象，如发声、弓背姿势或活动减少，并每隔一天测量一次体重。如观察所示，注入50 µL墨水可实现整个胰腺的浸润，从而诱导出更为均一的疾病表型。在此代表性分析中，对照组小鼠在术后前三天体重下降约原体重的6%，随后逐渐恢复，并在第21天时体重增加超过原体重的100%。相比之下，接受TNBS处理的小鼠在术后前五天体重下降约原体重的15%，到第21天时仅恢复至略低于原体重的100%。与对照组小鼠相比，注射TNBS的小鼠在术后第二周和第三周表现出腹壁机械性痛觉过敏增强。与对照组动物相比，TNBS处理小鼠的胰腺大小及单位体重胰腺重量均显著降低，提示TNBS处理小鼠存在明显的胰腺萎缩，这与重症且长期慢性胰腺炎患者中的发现一致。对照组乙醇处理小鼠胰腺组织切片的组织学分析显示正常形态，而TNBS处理小鼠的组织切片则表现出空泡样改变，伴有大量腺泡细胞丢失，并被脂肪细胞浸润和纤维化所取代。防止注射的TNBS进入胆囊和肠道非常重要，因为TNBS具有组织损伤作用。输注过程中，应尽量

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通过胆管 TNBS 输液治疗慢性胰腺炎的鼠标模型

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通过雨蛙素与脂多糖腹腔注射联合制备小鼠重症急性胰腺炎模型

本实验方案描述了一种新型的慢性阻塞性胰腺炎建模方法，该方法通过可视化胰管并对其实施电凝，从而导致胰管阻塞。...

通过电凝法建立的梗阻性慢性胰腺炎模型

本文描述了一种通过沃顿氏管（Wharton's...

通过沃顿管插管小鼠下颌下唾液腺

一种用于可视化和量化小鼠肝门静脉或肝内胆管三维结构的方法。该树脂铸型技术还可应用于其他导管或血管系统，并能够实现 原位...

小鼠门静脉或肝内胆管系统的三维树脂铸型与成像

本文描述了一种在大鼠中进行葡萄糖和脂肪乳剂慢性输注的实验方案。该模型可用于研究营养过剩对器官功能及生理参数的影响。...

大鼠慢性营养素输注模型

采用激光光凝法对小鼠眼睛的房水引流系统进行处理，以诱导慢性高眼压。激光处理后，眼内压（IOP）可升高并持续数月。通过视觉运动反应测试监测实验动物的视力和对比敏感度下降情况。...

一种表征视觉缺陷的激光诱导小鼠慢性眼压升高模型

了解通过胆管TNBS输注建立小鼠慢性胰腺炎模型的优化技术。该方法使用Von Frey单丝评估疼痛反应，为研究胰腺炎发病机制和治疗策略提供可靠的动物实验平台。

通过胆管TNBS灌注建立小鼠慢性胰腺炎模型

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