2021年7月4日
本研究通过线栓栓塞法建立了一种新型的Sprague-Dawley(SD)大鼠上矢状窦(SSS)血栓形成模型,并验证了该模型的稳定性和可靠性。
由于缺乏理想的动物模型,脑静脉窦血栓形成(CVST)的研究受到极大限制。目前,已通过在上矢状窦(SSS)起始段向心性插入自制栓子成功建立了一种新型SD大鼠CVST模型,该方法标准化了临床条件下各种或不可控的干扰因素。大鼠经腹腔注射成功麻醉后,将其固定于立体定位仪上,并涂抹眼用凝胶以保护角膜,防止麻醉期间角膜干燥。
去除大鼠头部顶部的毛发。为了更有效地进行此操作,可在准备室中提前完成前述步骤。大鼠通过麻醉机成功麻醉后,还需涂抹无菌眼用润滑剂。
用5%聚维酮碘对大鼠头部表面进行消毒,与75%乙醇交替使用三次。在头部正中做一条长约两厘米的皮肤切口。
用手术刀切开筋膜,然后小心剥离顶部的筋膜和骨膜,充分暴露颅骨。确认前囟(A)和后囟(B)的位置。以冠状缝与人字缝之间的区域作为血流观察区。
为防止颅骨影响激光散斑血流成像的观察,需将观察区域的颅骨磨薄,直至血管清晰可见。在磨颅骨过程中,应使用常温注射器反复冲洗硬脑膜,避免高温刺激对大脑皮层造成损伤。此步骤及后续操作均在解剖显微镜下进行。
在此图中,红色线框的矩形区域为血流观察区域。颅骨变薄区域的尺寸应约为一厘米乘以一厘米。蓝色线框的矩形区域为骨窗。
大约六毫米乘以四毫米。红色圆形区域为顶叶关节,箭头指向上矢状窦。当颅骨可见时,使用镊子小心移除骨窗剩余的骨片。
选择合适的丝线探针,以前端尖端作为插入点。用2毫米注射器针头小心刺穿预设点,并迅速将丝线探针插入该点。此时,丝线探针末端与SSS之间的夹角应约为30至45度。
然后将导丝探针末端与SS之间的角度调整为0到10度。缓慢将SSS插入结构内,直至其头部到达窦汇的后端。当SSS穿刺时,可能出现呼吸急促。
如果导丝探针末端无法一次性快速插入准备点,可使用一小块纱布或棉球轻轻按压探针点,同时缓慢下滑,小心暴露准备点。完成此操作后,迅速将导丝末端插入至 SSS 内。蓝色箭头显示了探针从插入口插入 SSS 后的状态。
白色箭头指示探针的杆部,红色箭头指示其头部。随后剪去尾部多余的组织。缝合大鼠的皮肤。
对皮肤进行三次消毒,并将大鼠从立体定位仪中取出。使用激光光源均匀照射血流观察区域。图像记录了线状探针进入上矢状窦(SSS)的动态过程。
该图中,A 和 B 显示了线圈栓塞置入前后血流的对比。C 显示,与大脑中动脉和毛细血管相比,上矢状窦(SSS)和脑静脉的血流显著减少。将动物固定在 MRI 扫描台上。
通过定位扫描校准脑部位置,并在确认位置后进行T2加权成像(T2WI)和MRI序列扫描。为了更清晰地观察上矢状窦(SSS)中线探针的状态,采用C2头部固定法显示大鼠脑部的T2WI图像。本图中,A、B和C分别从水平位、矢状位和颅顶位展示上矢状窦(SSS)中线探针的位置。
图像显示线栓探针已到位,证实上矢状窦(SSS)栓塞成功。由于大鼠上矢状窦血栓形成模型易于建立,创伤小,稳定性好,且可精确控制化学诱导的时间和位置,因此是一种理想的新型颅内静脉窦血栓形成(CVST)模型。
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本文介绍了一种新型且可靠的Sprague-Dawley(SD)大鼠脑静脉窦血栓形成(CVST)模型,该模型采用线栓栓塞技术,特异性针对上矢状窦(SSS)。该模型旨在标准化实验条件,最大限度减少创伤,并实现对缺血时间和部位的精确控制,从而克服既往CVST动物模型的局限性,促进对CVST病理生理机制的研究。
可靠的临床前模型对于降低早期脑血管药物研发的风险,以及在临床变异限制转化认知的情况下阐明疾病机制至关重要。上矢状窦(SSS)闭塞的线栓法大鼠模型可实现脑静脉窦血栓形成(CVST)的标准化、可重复性诱导,从而提高机制研究和治疗研究的可预测性。该模型通过实现可控的假设验证和可靠的跨研究可比性,解决了药物研发流程中的一个关键转折点。
该模型可融入从早期机制研究到临床前先导物评价的整个发现过程,为假设验证和转化研究提供了一个标准化的平台。