线粒体疾病脑 膜炎基因 模型中量化动物活动的实验方法比较分析

该协议使用两种不同的半启动检测方法快速量化液体介质中的C.elegans运动体活性，并有可能应用于C.elegans疾病模型的药物筛查。这两种技术的主要优点是易于使用和易于重复。这两种技术都有可能以可变的吞吐量来评估药物对蠕虫行为的影响。

这些运动性测定有助于评估C.elegans线粒体疾病模型的体细胞活性，在这些模型中，动物的神经肌肉系统受损。要分析C.elegans在玻璃滑梯上液体介质中的体活动，在同步控制NGM板上的突变蠕虫菌株后，无论是否对L4阶段进行感兴趣的药物治疗，请使用蠕虫采摘和立体显微镜，每株和条件在玻璃滑梯上采摘5只蠕虫，并将其转化为S.basal溶液的单独20微升滴。将来自相同实验条件的蠕虫从不同的 NGM 板添加到同一幻灯片上的多个液滴中，以获得多个技术复制。

收集所有蠕虫后，让动物在室温下在滑梯上适应一分钟，然后以每滴 15 帧每秒 15 帧的速度记录蠕虫在每次下降中游泳活动一分钟。要使用 ZebraLab 软件分析录制的 C.elegans 运动活动，请使用 ZEBRALAB AVI 选项将视频上传到软件中。单击 AVI 文件选项的量化。

要创建新的协议，请选择参数、协议参数和时间，并将实验持续时间设置为一分钟。根据所需的数据输出选择"无时间"和"未选择集成"期间，并选择"文件"并打开"电影"以上传每个以前录制的视频文件。要构建单个检测区域，请使用圆圈工具创建蠕虫所在的整个液体滴周围的区域。

将检测到选定区域内所有蠕虫的活动。要指示校准距离，请从视频区域的左侧到右侧绘制一条水平线，并选择校准、绘制和应用到组。为了分析所有不同的 C.elegans 蠕虫菌株的检测，请取消选择区域图标并调整活动阈值中的检测灵敏度。

要在活动分析进行期间可视化动物制作的轨道，请将显示刻度设置为 70，并选择"应用到组"。要分析视频，请单击"播放"并选择"实验"，然后执行以输入视频的文件名称。保存后，会出现一个窗口，询问是否以最大计算机速度分析视频。

单击"是"。运行中的实验窗口将打开。单击"开始"。

当记录分析完成后，单击"实验"并停止以保存电子表格中滴中分析的活动。要分析96井板格式液体介质中的C.elegans介质活性，当蠕虫到达L4阶段时，在每卷大肠杆菌OP50和S.basal介质中加入50微升，每孔油井的净96井平底微板。使用立体显微镜手动挑选每口96井板的15个同步蠕虫，让蠕虫适应20分钟。

在适应期结束时，使用标准平板扫描仪在扫描之间用不到 10 秒的时间扫描每个微板两次分析扫描，使用开源软件对齐两个连续扫描，并获取两个图像和相对蠕虫扫描分数之间的像素变化数据，根据扫描仪设置为像素时产生的光强度确定显微板响应的变化阈值为五。在分析C.elegans运动体活性在一滴液体介质中，线粒体复合I病蠕虫在L4阶段的体活动显著减少38%，与野生型蠕虫相比。同样，对相同种群的蠕虫扫描分析显示，与N2布里斯托尔野生型蠕虫相比，L4阶段疾病模型蠕虫的蠕虫活动显著减少。

这种机车活动损失也观察到在成人第一阶段线粒体复合I病蠕虫评估蠕虫扫描分析。在设置每个检测时，必须记住使用正确的蠕虫数量。按照这个程序，我们的实验室经常进行药物筛选。

这两种技术用于我们的实验室，用于评估感兴趣的药物对线粒体疾病临床前动物模型中蠕虫活动的影响。