Name: 通过交替粘性 - 惯性力喷射进行 体外 水凝胶微载体的3D打印 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 32 s
Description: 学习利用交替粘性-惯性力喷射技术进行水凝胶微载体的温和生物打印方法，实现细胞封装与体外扩增。该方法可保持生物墨水原有理化特性，适用于功能性微组织构建与多种组织工程应用。

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本工作得到了北京市自然科学基金（3212007）、清华大学自主科研计划项目（20197050024）、清华大学春风基金（20201080760）、国家自然科学基金（51805294）、国家重点研发计划（2018YFA0703004）以及“111 计划”（B17026）的支持。

1. 细胞培养
<ol>
	<li>在高糖 Dulbecco 改良最低必需培养基（H-DMEM）中添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 非必需氨基酸溶液（NEAA）、1% 青霉素 G 和链霉素，以及 1% 谷氨酰胺补充剂，配制成 A549 细胞的培养基。</li>
	<li>将 A549 细胞在 37 °C、5% CO2 的 CO2 培养箱中培养。</li>
	<li>当细胞融合度达到约 80% 时，使用胰蛋白酶消化进行传代。
	<ol>
		<li>在 T75 培养瓶中加入 3 mL 胰蛋白酶，在 37 °C 下处理 3 分钟，然后加入 6 mL 培养基以终止消化。</li>
		<li>用移液器吹打培养基，收集松散贴壁的细胞。</li>
		<li>以 72.5 × g 离心 3 分钟，弃去上清液，并用 3 mL 新鲜培养基重悬细胞。</li>
		<li>将 1 mL 细胞悬液转移至含有 10 mL&#160;新鲜培养基的新 T75 培养瓶中。每 2 天更换一次培养基。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 喷嘴的制备
<ol>
	<li>按照制造商的说明将玻璃微量移液管装载到拉制仪上。微喷管的外径、内径和长度分别为 1.5 mm、1.1 mm 和 100 mm。</li>
	<li>设置拉制仪的拉制参数。默认情况下，HEAT、PULL、VELOCITY、TIME 和 PRESSURE 的值分别设置为 560、255、255、150 和 500。在此参数下拉制喷嘴。 
	警告：拉制后的喷嘴非常尖锐，操作不慎可能导致伤害。</li>
	<li>使用微加工设备，按照制造商的说明在指定直径处切断所得喷嘴（步骤 2.2），以获得特定的尖端直径。具体操作为：将喷嘴的指定直径部分置于加热的铂丝上，将铂丝加热至约 60 °C，持续约 5 秒，然后将喷嘴拉开。</li>
	<li>将喷嘴的喷头浸入疏水剂中 30 分钟，随后用无菌水冲洗三次。</li>
	<li>打印前，将喷嘴在酒精中灭菌 5 分钟，并用无菌水冲洗三次，以去除残留的酒精。</li>
</ol>
3. 水凝胶生物墨水的制备
<ol>
	<li>将 NaCl (0.45 g) 溶解于 50 mL 的&#160;无菌水配制0.9% (w/v) NaCl溶液。振荡溶液以促进溶解。待完全溶解后，通过0.45 µm聚对苯二甲酸乙二醇酯滤膜过滤溶液。</li>
	<li>称取低黏度海藻酸钠粉末（1 g），溶于25 mL氯化钠溶液（步骤3.1）中，在60–80 °C高温条件下过夜搅拌，得到4%（w/v）的海藻酸钠储备液。该储备液可在4 °C保存1个月。</li>
	<li>将海藻酸钠储备液（步骤 3.2）在烘箱中于 70 °C 加热 30 分钟，重复三次，以实现灭菌。</li>
	<li>将适量的海藻酸钠储备液（步骤 3.3）用 0.9% NaCl 溶液（步骤 3.1）稀释，配制成浓度分别为 2%、1.5% 和 0.5% 的溶液&#160;（质量体积比） 
	注意：除了在烘箱中加热外，海藻酸钠溶液的其他制备步骤均应在通风橱内进行。</li>
	<li>溶解1 g的&#160;将明胶粉末溶于25 mL NaCl溶液（步骤3.1）中，在60–80 °C的高温下过夜，以制备4%（w/v）的明胶储备液。该储备液可在4 °C保存1个月。</li>
	<li>将明胶储备液（步骤 3.5）在烘箱中于 70 °C 加热 30 分钟，重复三次，以实现灭菌。</li>
	<li>将适量体积的明胶储备液（步骤 3.6）用 0.9% NaCl 溶液（步骤 3.1）稀释至终浓度为 1.5%（w/v）。 
	注意：除了在烘箱中加热外，明胶溶液的其他制备步骤均应在通风橱内进行。</li>
	<li>为促进细胞在微载体上的黏附，将2% (w/v)海藻酸钠溶液与鼠尾I型胶原溶液（4 mg/mL）按3:1的比例混合，配制海藻酸钠-胶原溶液。用0.1 M NaOH溶液调节溶液pH至7.2后使用&#160;制备后立即使用。</li>
	<li>将酪氨酸修饰的透明质酸絮状固体溶于磷酸盐缓冲液（PBS）中，在60–80 °C下过夜搅拌，得到0.8%（w/w）的酪氨酸修饰透明质酸PBS溶液。该储备溶液可在4 °C下保存1个月。</li>
	<li>将酪氨酸修饰的透明质酸PBS溶液在烘箱中于70 °C加热30分钟，重复三次以进行灭菌。</li>
	<li>将辣根过氧化物酶粉末（500 酶活性单位/mg）溶于 PBS 溶液中，配制成 8 酶活性单位/mg 的辣根过氧化物酶 PBS 溶液。</li>
	<li>将30%（w/w）的过氧化氢溶液用去离子水稀释至4 mM。</li>
	<li>通过将酪氨酸修饰的透明质酸PBS溶液与辣根过氧化物酶PBS溶液按1:1的比例混合，制备改性的HA-辣根过氧化物酶溶液。 
	&#8203;注意：除在烘箱中加热外，HA-辣根过氧化物酶溶液的其他制备步骤均应在通风橱内进行。</li>
</ol>
4. 基于AVIFJ的微液滴生成
<ol>
	<li>使用先前报道的自制细胞打印系统（图1A）26。波形发生器输出的电信号首先被放大，然后驱动压电陶瓷产生可控形变。固定在压电陶瓷上的喷嘴因此产生可控振动。</li>
	<li>用75%（v/v）酒精擦拭并经紫外（UV）照射过夜，对打印系统进行灭菌。</li>
	<li>将5 mL生物墨水（步骤3.1）装入一次性无菌注射器中，并将注射器安装到注射泵上。</li>
	<li>使用内径为1 mm的硅胶管将注射器（步骤4.3）与喷嘴（步骤2.5）连接。</li>
	<li>通过调节夹紧螺钉的松紧度，固定用于打印的喷嘴（步骤4.4）。安装时保持喷嘴尖端远离基底，以避免损坏和污染。 
	&#8203;注意：若在安装过程中喷嘴破裂，请佩戴较厚的手套，并仔细清理玻璃碎片和残留物。</li>
	<li>快速推动注射泵，将生物墨水（步骤4.3）加载至喷嘴（步骤4.5），设置流速为30 µL/min。擦去喷嘴尖端多余的材料。</li>
	<li>设置信号发生器参数。导入自行设计的包含500,000个采样点的波形，采样率和峰峰值电压（Vpp）分别设为5百万样本/秒和10 V。</li>
	<li>用去离子水清洗载玻片或培养皿，并将其置于喷嘴下方作为打印基底。</li>
	<li>预设运动路径，并将振动触发模式设为按需喷滴（drop-on-demand）。</li>
	<li>按照预先设计的图案打印液滴。</li>
</ol>
5. 基于AVIFJ的微载体形成
<ol>
	<li>重复步骤 4.1–4.4，但更换生物墨水&#160;至2% (w/v)海藻酸钠溶液（步骤3.4）、海藻酸钠-胶原蛋白溶液（步骤3.8）或改良的透明质酸-辣根过氧化物酶溶液（步骤3.13）。</li>
	<li>将3 g氯化钙溶解于100 mL水中&#160;无菌水配制3%（w/v）氯化钙溶液。待完全溶解后，通过0.45 µm聚对苯二甲酸乙二醇酯滤膜过滤溶液。</li>
	<li>加入5 mL的&#160;交联溶液（氯化钙溶液或过氧化氢溶液）加入培养皿中。将培养皿置于喷嘴下方作为基底。</li>
	<li>打印后，将微载体交联 3 分钟。</li>
	<li>收集微载体悬浮液至离心管中，通过29 × g离心富集微载体 g 孵育3分钟。将微载体重悬于培养基中，浓度约为600个微载体/毫升。</li>
</ol>
6. 在微载体表面接种细胞
<ol>
	<li>用Cell Tracker Green CMFDA对A549细胞进行染色，以方便观察细胞。具体操作为：移除培养基，加入5 mL的&#160;在培养箱中，用含有10 µM Cell Tracker染料的无血清培养基孵育细胞30分钟。随后，更换为新鲜培养基。</li>
	<li>以 1.6 × 10⁶ 个细胞/mL 的密度重悬 A549 细胞悬液6 cells/mL</li>
	<li>将1 mL海藻酸盐-胶原蛋白微载体悬液（步骤5.3）和1 mL A549细胞悬液（步骤6.1）加入低吸附6孔培养板中。</li>
	<li>将培养板置于摇床中，37 °C、5% CO₂ 培养箱内以 30 rpm 振荡培养2.</li>
	<li>从摇床取下培养板，静置30分钟使微载体沉降。每2天更换一半培养基。</li>
</ol>
7. 微滴/微载体形成的分析
<ol>
	<li>在明场显微镜或共聚焦显微镜下观察并测量喷嘴（步骤 2.2）、培养皿（步骤 4.10 和步骤 5.4）以及带有微载体的细胞（步骤 6.5）。具体而言，物镜放大倍数为 4x、10x 或 20x，目镜放大倍数为 10x。</li>
	<li>使用 ImageJ 软件测量微载体的直径。根据显微镜拍摄图像时附带的比例尺，在 ImageJ 中设定比例尺的实际尺寸，并绘制 10 条微载体的半径或半长轴线段。ImageJ 可计算出这些线段的平均长度及标准差。</li>
</ol>

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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本文所述方案提供了多种水凝胶微载体的制备方法及后续细胞接种的操作指导。与微流控芯片和喷墨打印方法相比，AVIFJ法在构建微载体方面具有更高的灵活性和生物相容性。该方法采用独立喷嘴设计，可兼容多种轻质喷头，包括玻璃微量移液管，适用于此类打印系统。其高度可控的加工过程允许自由调节包括储液腔体积、喷头内径和喷头形状在内的各项参数。此外，一次性喷嘴便于在不同材料之间切换时进行灭菌处理，避免因重复使用可能带来的污染风险。最后，在打印过程中，仅对喷嘴施加微小且快速的位移，而非强烈的力或热条件，从而最大程度地保持了所打印生物墨水原有的物理和化学特性；这一特点在生物材料应用中具有显著优势。
成功制备合适尺寸微载体最关键的步骤是：1）准备具有适当直径尖端的喷嘴，以及2）根据所打印生物墨水的黏度调整合适的采样频率和Vpp。通过去除卫星液滴并施加外部驱动力，可进一步实现微载体构建的稳定性。增加参数有助于微载体的形成，但过强的驱动力是产生卫星微载体的主要原因，会导致微载体尺寸不均一。因此，为提高微载体尺寸的均匀性，建议采用适当（而非过强）的采样频率和Vpp。提高微载体稳定性的另一个方面是施加外部驱动力。外...

微载体是直径为60-250 µm、具有较大比表面积的微珠，常用于细胞的大规模培养1,2。其外表面为细胞提供了丰富的生长位点，内部则为细胞的空间增殖提供了支撑结构。球形结构还便于对pH、O2以及营养物质和代谢产物浓度等参数进行监测和控制。当与搅拌式生物反应器联合使用时，微载体可在相对较小的体积内实现比传统培养更高的细胞密度，从而为大规模培养提供了一种经济有效的方法3。微载体培养技术已成为细胞学研究中的主要技术之一，在干细胞、肝细胞、软骨细胞、成纤维细胞及其他结构的大规模扩增领域已取得显著进展4。此外，微载体也被认为是理想的药物递送载体和自下而上的构建单元，因此在临床药物筛选和体外组织工程修复中发挥着日益重要的作用5。
为了满足不同应用场景下的力学性能要求，已开发出多种类型的水凝胶材料用于微载体的构建6,7,8,9,10,11。海藻酸盐和透明质酸（HA）水凝胶是两种最常用的微载体材料，因其具有良好的生物相容性和可交联性12,13。海藻酸盐可通过氯化钙轻松交联，并可通过改变交联时间来调节其力学性能。酪胺修饰的透明质酸（HA）则通过过氧化氢和辣根过氧化物酶催化的酪胺基团氧化偶联实现交联14。胶原蛋白由于其独特的螺旋结构和交联纤维网络，常被作为辅助材料添加至微载体中，以进一步促进细胞黏附15,16。
目前制备微载体的方法包括微流控芯片、喷墨打印和电喷雾17,18,19,20,21,22,23。微流控芯片已被证实可快速高效地生成尺寸均一的微载体24。然而，该技术依赖于复杂的流道设计和制造工艺25。喷墨打印过程中可能产生高温或过大的挤出力，而电喷雾方法中存在强电场，这些因素均可能对材料的性能产生不利影响，尤其是其生物活性19。此外，当应用于多种生物材料和不同直径时，这些方法所使用的定制喷嘴导致加工复杂性受限、成本较高且灵活性较低。
为了提供一种便捷的微载体制备方法，已应用一种名为交替黏性-惯性力喷射（AVIFJ）的3D打印技术来构建水凝胶微载体。该技术利用垂直振动过程中产生的向下驱动力和静压，克服喷嘴尖端的表面张力，从而形成液滴。与强烈的外力或高温条件不同，AVIFJ在打印过程中仅对喷嘴施加微小而快速的位移，对生物墨水的理化性质影响较小，因而对生物活性材料具有显著优势。利用AVIFJ方法，成功制备了多种生物材料组成的微载体，其直径为100–300 µm。此外，这些微载体被进一步证实能够良好地结合细胞，并为贴壁细胞提供适宜的生长环境。

<table><tbody><tr><td>A549 细胞</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td>人非小细胞肺癌细胞系</td></tr><tr><td>明场显微镜</td><td>Olympus</td><td>DP70</td><td></td></tr><tr><td>共聚焦显微镜</td><td>Nikon</td><td>TI-FL</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清，FBS</td><td>BI</td><td>04-001-1ACS</td><td></td></tr><tr><td>明胶</td><td>SIGMA</td><td>G1890</td><td></td></tr><tr><td>玻璃移液管</td><td>sutter instrument</td><td>b150-110-10</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>GIBCO</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>H-DMEM</td><td>GIBCO</td><td>11960-044</td><td>杜氏改良伊格尔培养基</td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶粉末</td><td>SIGMA</td><td>P6782</td><td></td></tr><tr><td>疏水剂</td><td>3M</td><td>PN7026</td><td>按照生产商说明稀释后使用</td></tr><tr><td>微电极拉制仪</td><td>narishige</td><td>MF-900</td><td></td></tr><tr><td>非必需氨基酸，NEAA</td><td>GIBCO</td><td>11140-050</td><td>非必需氨基酸</td></tr><tr><td>青霉素 G 和链霉素</td><td>GIBCO</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>培养皿</td><td>SIGMA</td><td>P5731-500EA</td><td></td></tr><tr><td>拉针仪</td><td>sutter instrument</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>海藻酸钠</td><td>SIGMA</td><td>A0682</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白酶</td><td>GIBCO</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>大鼠尾Ⅰ型胶原溶液</td><td>SIGMA</td><td>C3867</td><td></td></tr></tbody></table>

3d打印 体外 通过交替黏性-惯性力喷射法制备水凝胶微载体

3D Printing of In Vitro Hydrogel Microcarriers by Alternating Viscous-Inertial Force Jetting

微载体是直径为60-250 µm、具有较大比表面积的微珠，常用于大规模细胞培养的载体。微载体培养技术已成为细胞学研究中的主要技术之一，广泛应用于大规模细胞扩增领域。微载体在体外组织工程构建和临床药物筛选中也显示出日益重要的作用。in vitro组织工程构建和临床药物筛选。目前制备微载体的方法包括微流控芯片和喷墨打印技术，这些方法通常依赖于复杂的流道设计、不相容的两相界面以及固定的喷嘴形状。这些方法在应用于多种生物墨水时，面临喷嘴加工复杂、更换喷嘴不便以及挤出力过大的挑战。本研究采用一种称为交替黏性-惯性力喷射的3D打印技术，实现了直径为100-300 µm的水凝胶微载体的构建。随后将细胞接种于微载体上，形成组织工程模块。与现有方法相比，该方法具有喷嘴尖端直径自由可调、喷嘴切换灵活、打印参数可自由控制以及适用于多种生物活性材料的温和打印条件等优势。

制造了具有不同会聚速率和直径的打印头，以实现多种材料的打印。随着拉伸强度增加而获得的喷嘴如图所示 图1B喷嘴被分为三个区域：储液区（III）、收缩区（II）和喷头区（I）。储液区为喷嘴未加工部分，用于提供液体静压及生物墨水的输入。收缩区是产生向下驱动力的主要区域。拉力强度对喷头区有显著影响，拉力越长，收敛速率越低。喷头区越窄且越长，打印过程中的表面张力越大，导致离散微液滴的形成更加困难，但有利于后续操作中切割出更小直径的喷头尖端。随后，使用针头锻造仪器在指定直径处截断喷头图1C）。具有不同直径的吸头，包括 100、120、150 和 200 µm，可用于制备不同尺寸的微载体，满足不同应用的需求 体外 微组织
首先通过在培养皿上打印液滴来验证打印过程的稳定性和可控性。使用30 µm尖端喷嘴，多种生物墨水（包括PBS、1.5%海藻酸钠和1.5%明胶）均实现了稳定打印（图2A，...

本文介绍了一种由交变粘性-惯性力驱动的温和3D打印技术，可用于构建水凝胶微载体。自制喷嘴具有灵活性，可方便地更换以适应不同材料和直径。可获得并收集直径为50-500 µm的细胞结合微载体，用于后续培养。

3D打印 体外 通过交替黏性-惯性力喷射法制备水凝胶微载体

微载体是直径为60-250 μm、具有较大比表面积的微珠，常被用作大规模细胞培养的载体……

我们提供一种温和的生物打印工艺，用于制备具有良好可控性和生物相容性的微载体。细胞包封后，这些载体还可用于体外细胞扩增和功能性微组织构建。在打印过程中，喷嘴所受的位移有限，而非在类似条件下产生剧烈作用力，从而最大程度地保持了生物墨水原有的理化性质。除了传统的微载体外，还可构建具有内部细胞分布或海藻酸盐包封胶囊结构的单元，并将其应用于不同组织结构的组装。对于喷嘴的制备，按照制造商的说明将玻璃微量移液管装载到拉制仪上，并设置拉制仪的拉制参数。使用微加工仪在指定位置截断喷嘴，以获得实验所需的特定尖端直径，并将喷嘴在酒精中灭菌五分钟。然后，用无菌水冲洗喷嘴三次，以去除残留的酒精。制备水凝胶生物墨水时，将灭菌的4%海藻酸钠储备液用0.9%氯化钠溶液稀释，分别配制成0.5%、1%、1.5%和2%（质量/体积）浓度的溶液。进行微滴生成时，取5毫升生物墨水加入一次性无菌注射器中，并将注射器安装至注射泵上。使用内径为1毫米的软管将注射器与打印喷嘴连接。拧紧夹紧螺钉以固定喷嘴，并快速按压注射泵，将生物墨水装入喷嘴中。设置信号发生器参数，并预设振动的运动路径及按需触发模式。然后按照预设计的图案打印液滴。形成微载体时，向培养皿中加入5 mL交联溶液，并将该培养皿置于打印喷嘴下方作为基底。打印完成后，将微载体交联3分钟，随后将微载体悬液转移至离心管中。然后，通过离心富集微载体，并将其重悬于适量的培养基中，浓度约为每毫升600个微载体。在接种前，将A549细胞培养物的上清液更换为5毫升含10 µM Cell Tracker Green CMFDA染料的无血清培养基，在细胞培养箱中孵育30分钟。孵育结束后，弃去染料溶液，更换为新鲜培养基，并将细胞重悬至浓度为1.6 × 10⁶ 个细胞/毫升。向细胞中加入一毫升微载体悬浮液，并向低黏附性六孔培养板的每孔中加入一毫升 A549 细胞。将培养板置于细胞培养箱内的摇床上，以每分钟 30 转的速度振荡。孵育结束后，从摇床上取出培养板，静置 30 分钟使微载体沉降，然后通过明场和共聚焦荧光显微镜观察并测量打印喷嘴、培养皿以及接种了微载体的细胞。使用30微米尖端喷嘴，可将多种生物墨水（包括PBS、1.5%海藻酸钠和1.5%明胶）稳定地打印到培养皿上。随着墨水黏度增加，打印过程变得愈发困难，需要更大的驱动力才能获得较大的液滴。在本打印实验中可见，通过设置打印参数，可将液滴按特定的二维排列方式进行打印。喷嘴尖端的直径直接影响可打印微载体的尺寸。从这些明场和共聚焦图像中可以观察到，在培养两天后，A549细胞附着在海藻酸盐-胶原蛋白微载体上。培养六天后，A549细胞几乎完全覆盖了微载体表面。通过该操作步骤，我们已用壳聚糖包覆微载体表面，并利用葡萄糖酸盐溶解海藻酸盐凝胶，形成可应用于构建肺泡等中空结构的囊状结构。制备微载体的打印过程十分温和，因此该方法可广泛用于含细胞微载体的打印。

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Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

通过交替粘性 - 惯性力喷射进行 体外 水凝胶微载体的3D打印

采用生物打印机基于可牺牲模具制备出具有特定图案的水凝胶。首先用第二种水凝胶填充泊洛沙姆模具，随后将其洗脱，形成可被第三种水凝胶填充的孔隙结构。该方法利用泊洛沙姆快速洗脱和良好可打印性的特点，实现由生物聚合物构建复杂结构。...

打印热响应性反向模具以制备用于三维细胞培养的图案化双组分水凝胶

通过将纳米复合材料定向且局部地渗入三维多孔微流控网络，可制备出具有三维（3D）微结构的复合梁。该制造方法具有灵活性，可使用不同的热固性材料和纳米填料，从而实现多种功能性的三维增强纳米复合宏观产品。...

通过微流控渗透法制备三维微结构纳米复合材料

本方案描述了一种结合微加工技术与冷冻凝胶化技术制备弹性三维大孔微凝胶的方法。在载入细胞后，可形成三维微组织，且易于注射 在体内 以促进再生治疗，或组装成阵列用于 体外...

用于可注射再生治疗和高通量药物筛选的三维微组织

已开发出一种用于加工紫外光交联水凝胶的增材制造策略。该策略可实现微加工水凝胶结构的逐层组装，以及独立组件的集成组装，从而制备出包含可响应磁驱动运动部件的集成器件。...

一种用于简便快速制造含磁响应组分的水凝胶基微型机器的增材制造技术

我们开发了一种异质性乳腺癌模型，该模型由永生化的肿瘤细胞和成纤维细胞嵌入可生物打印的海藻酸盐/明胶生物墨水中构成。该模型可重现 体内...

可生物打印的海藻酸盐/明胶水凝胶3D 体外 模型系统诱导细胞球体形成

本文介绍了一种明胶甲基丙烯酰胺的3D生物打印方法。...

基于明胶甲基丙烯酰胺水凝胶生物墨水的3D生物打印方案

本研究中，我们开发了一种新型的多层改性策略，用于低黏度类液体生物墨水（甲基丙烯酰化明胶），以防止包封细胞发生沉降。...

使用多层水凝胶生物墨水进行三维生物打印以实现均匀的细胞分布

工程化皮瓣需要整合功能性血管网络。在本方案中，我们介绍一种制造包含分级血管网络的3D打印组织皮瓣的方法，并将其直接与大鼠股动脉进行显微外科吻合。...

利用3D打印技术制备工程化血管皮瓣

水凝胶形成过程中的剪切处理可产生微凝胶悬浮液，该悬浮液具有剪切变稀特性，但在去除剪切力后能迅速重构。此类材料已被用作生物打印复杂、含细胞结构的支撑基质。本文描述了用于制备支撑床及相容性生物墨水的方法。...

通过凝胶化过程中剪切处理形成琼脂糖流体凝胶用于悬浮3D生物打印

本研究描述了一种在自愈性可退火颗粒-细胞外基质复合材料内进行神经干细胞自由成型嵌入式3D打印的实验方案。该方案能够高保真地程序化构建相互连接的人类神经组织结构。...

微凝胶-细胞外基质复合支撑材料用于人源神经组织嵌入式三维打印

利用κ-卡拉胶亚微凝胶介质嵌入式生物打印类组织结构

学习利用交替粘性-惯性力喷射技术进行水凝胶微载体的温和生物打印方法，实现细胞封装与体外扩增。该方法可保持生物墨水原有理化特性，适用于功能性微组织构建与多种组织工程应用。

3D打印体外通过交替黏性-惯性力喷射法制备水凝胶微载体

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